| 五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析 |
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| 引用本文： | 陈娟,唐俊妮,李键,陈丽君. 五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析[J]. 中国食品卫生杂志, 2014, 26(2): 137-141 |
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| 作者姓名： | 陈娟 唐俊妮 李键 陈丽君 |
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| 作者单位： | 西南民族大学生命科学与技术学院,四川 成都 610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川 成都 610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川 成都 610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川 成都 610041 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪人才支持计划(NCET-11-0847)；国家自然科学基金(31371781)；国家科技重大专项(201203009) |
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| 摘 要： | 对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限。方法 根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eaeA基因、单核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志贺菌的ipaH基因设计5对特异性引物进行多重PCR,对反应条件包括镁离子浓度、引物浓度和退火温度进行优化试验,并确定该检测方法的检出限。结果 最佳反应条件为金黄色葡萄球菌、沙门菌和福氏志贺菌引物浓度为0.25μmol/L,单核增生李斯特菌引物浓度为0.4μmol/L,大肠杆菌O157∶H7引物浓度为0.3μmol/L,Mg2+浓度为2.25mmol/L,退火温度为60℃；在此条件下金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌的多重PCR的DNA检出限分别为6.4、32、32、800和160pg。结论 通过对5种引物的PCR条件进行优化和检出限的分析,为食品中该5种致病菌的快速检测奠定基础,对实际应用具有指导意义。
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| 关 键 词： | 多重PCR 扩增条件 优化 检出限 食源性致病菌 食品安全 |
| 收稿时间： | 2013-07-09 |
Optimization of multiplex PCR method for five food-borne pathogens and analysis of its detection limit |
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| CHEN Juan,TANG Jun-ni,LI Jian and CHEN Li-jun. Optimization of multiplex PCR method for five food-borne pathogens and analysis of its detection limit[J]. Chinese Journal of Food Hygiene, 2014, 26(2): 137-141 |
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| Authors: | CHEN Juan TANG Jun-ni LI Jian CHEN Li-jun |
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| Affiliation: | College of life science and technology,Southwest University for Nationalities,Sichuan Chengdu 610041,China;College of life science and technology,Southwest University for Nationalities,Sichuan Chengdu 610041,China;College of life science and technology,Southwest University for Nationalities,Sichuan Chengdu 610041,China;College of life science and technology,Southwest University for Nationalities,Sichuan Chengdu 610041,China |
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