乳酸片球菌AS1.2696来源的α-L-鼠李糖苷酶酶学性质分析

克隆表达乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因，研究重组酶的酶学性质。分析乳酸片球菌AS1.2696菌株的全基因组序列，聚合酶链式反应扩增目的基因，以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-prha2和pSE-prha3，在大肠杆菌Escherichia coli XL-blue进行表达，使用镍亲和层析纯化重组蛋白，研究重组酶PRHA2、PRHA3的酶学性质。结果表明，重组酶PRHA2的最适pH值和温度分别为5.0和60?℃，Km值为（3.039±0.581）mmol/L，Vmax值为（2.032±0.186）μmol/（min·mg）；PRHA3的最适pH值和温度分别为5.5和45?℃，Km值为（2.797±0.132）mmol/L，Vmax?值为（113.35±1.485）μmol/（min·mg）。PRHA2和PRHA3能够水解人工底物对硝基苯基-α-L-吡喃鼠李糖苷（p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside，pNPR）以及α-1,6键的橙皮苷、芦丁；PRHA2对4-硝基苯基-β-D-阿拉伯糖苷（4-nitrophenyl-β-L-arabinoside，pNPA）有一定的水解活性；PRHA3对淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C这几种物质C-7位的葡萄糖糖苷键有较弱的水解作用。此外，PRHA3能够水解朝藿定C的C-3位以α-Rha(2→1)α-Rha连接的外侧的鼠李糖苷键，在食品及医疗方面具有一定的应用价值。