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短小芽孢杆菌碱性β-葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究
作者姓名:阚劲松  张敏  徐涛
作者单位:合肥学院生物与环境工程系
基金项目:安徽高校自然科学研究重点项目(编号:KJ2016A878);安徽省教育厅质量工程项目(编号:2016sxzx036);安徽省自然科学基金青年项目(编号:1308085QC48)
摘    要:以毕赤酵母密码子为基准,对短小芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶基因密码子进行优化,设计合成全基因序列,构建表达载体转入毕赤酵母中。结果表明,短小芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶基因已成功转入酵母菌中并分泌表达,诱导培养72h发酵液的酶活力可达25.39U/mL。重组酶最适反应温度45℃,最适pH 9.0,重组酶的K_m值1.26mmol/L,V_(max)为32.15μmol/(min·mg)。重组β-葡萄糖苷酶对大豆苷水解活性相对活力是pNPG的248%,转糖苷活性催化50%底物葡萄糖合成龙胆二糖,达34.25g/L。

关 键 词:碱性β-葡萄糖苷酶;短小芽孢杆菌;毕赤酵母;龙胆二糖;表达
收稿时间:2019-04-11
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