| 多重实时荧光定量PCR分析转基因烟草外源基因拷贝数 |
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| 作者姓名： | 余婧 邹颉 付强 郭玉双 林世锋 赵杰宏 |
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| 作者单位： | 贵州省烟草科学研究院, 烟草行业烟草分子遗传重点实验室, 贵州省贵阳市龙滩坝路29号 550081 |
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| 基金项目： | 中国烟草总公司贵州省公司科技项目（201604）;贵州省科技支撑计划农业攻关科技计划项目（黔科合NY[2013]3020号）;贵州省科学技术基金（黔科合J字[2014]2117号） |
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| 摘 要： | [目的]采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的拷贝数。[方法]将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的相关性标准曲线方程,将待测株系外源基因的Ct值代入标准曲线方程后估算其拷贝数。[结果]获得了上述4个基因的标准曲线,其R2均接近于1,相关性较高。在检测的六个转基因株系中初筛到3株3个外源基因均为单拷贝的株系。[结论]可使用该方法对转基因烟草外源基因插入拷贝数进行估算,为获得稳定遗传材料提供初筛依据。
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| 关 键 词： | 转基因烟草 多重实时荧光定量PCR 外源基因 拷贝数 |
| 收稿时间： | 2017-03-02 |
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