| 肌氨酸氧化酶的酶学性质及失活机理 |
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| 引用本文： | 仝艳军,辛瑜,杨海麟,冯守帅,张玲.肌氨酸氧化酶的酶学性质及失活机理[J].食品与生物技术学报,2015,34(12):1239-1247. |
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| 作者姓名： | 仝艳军 辛瑜 杨海麟 冯守帅 张玲 |
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| 作者单位： | 江南大学 教育部工业微生物技术重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 教育部工业微生物技术重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 教育部工业微生物技术重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 教育部工业微生物技术重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 教育部工业微生物技术重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 将来源于Bacillus sp.的肌氨酸氧化酶(SOX)基因在E.coli成功表达,并探索了肌氨酸氧化酶(sarcosine oxidase)酶学性质和失活机理。Bacillus sp.的肌氨酸氧化酶基因克隆入载体p ET28a,并转化至E.coli BL21(DE3)表达。经IPTG诱导8 h,对菌体破壁液进行SDS-PAGE电泳分析,发现在43 kDa处有明显蛋白质条带。采用亲和介质分离纯化获得较高纯度SOX。SOX酶学性质分析结果表明,其相对分子质量为43.8 kDa,最适反应温度40℃,最适反应pH值为8.0;20 mmol/L的Mn~(2+)对SOX具有明显激活作用;其动力学参数分析表明,肌氨酸作为底物时的K_m值为141.6 mmol/L,V_(max)为0.115 mmol/(L·min)。结合SDS-PAGE凝胶电泳、荧光光谱和圆二色性光谱分析,探明了液态SOX的失活机理。在37℃恒温条件下,随储存时间延长,SOX酶分子内部疏水基团逐渐暴露且二级结构被破坏,导致酶分子变性以及最终酶活力下降。为进一步提高SOX的酶活稳定性提供了理论依据。
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| 关 键 词： | 肌氨酸氧化酶 酶学性质 失活机理 |
On the Enzymatic Properties and Deactivation Mechanism of Sarcosine Oxidase |
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| TONG Yanjun,XIN Yu,YANG Hailin,FENG Shoushuai and ZHANG Ling.On the Enzymatic Properties and Deactivation Mechanism of Sarcosine Oxidase[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2015,34(12):1239-1247. |
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| Authors: | TONG Yanjun XIN Yu YANG Hailin FENG Shoushuai and ZHANG Ling |
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