pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达 |
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引用本文: | 刘学锋,吕正兵,汪波,徐涛.pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达[J].浙江理工大学学报,2012(6):847-851. |
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作者姓名: | 刘学锋 吕正兵 汪波 徐涛 |
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作者单位: | 浙江理工大学生命科学学院,杭州310018 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30772712) |
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摘 要: | 将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GSll5毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平板筛选高拷贝重组子。利用甲醇在BMMY培养基中诱导表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Westernbloting分析显示获得分子量约31kD的融合蛋白,融合蛋白经纯化后MTT分析其抗肿瘤活性,结果显示融合蛋白具有显著的抗肿瘤效果。
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关 键 词: | 掌叶半夏凝集素 死亡素 pPIC3.5K MTT |
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