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pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达
引用本文:刘学锋,吕正兵,汪波,徐涛.pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达[J].浙江理工大学学报,2012(6):847-851.
作者姓名:刘学锋  吕正兵  汪波  徐涛
作者单位:浙江理工大学生命科学学院,杭州310018
基金项目:国家自然科学基金(30772712)
摘    要:将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GSll5毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平板筛选高拷贝重组子。利用甲醇在BMMY培养基中诱导表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Westernbloting分析显示获得分子量约31kD的融合蛋白,融合蛋白经纯化后MTT分析其抗肿瘤活性,结果显示融合蛋白具有显著的抗肿瘤效果。

关 键 词:掌叶半夏凝集素  死亡素  pPIC3.5K  MTT
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