| 屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性 |
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| 引用本文： | 杨玲双,谢新强,李滢,张菊梅,丁郁,吴清平,王涓. 屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性[J]. 现代食品科技, 2022, 38(8): 35-43 |
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| 作者姓名： | 杨玲双 谢新强 李滢 张菊梅 丁郁 吴清平 王涓 |
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| 作者单位： | （1.华南农业大学食品学院，广东广州 510642）（2.广东省科学院微生物研究所，广东省微生物安全与健康重点实验室，华南应用微生物国家重点实验室，广东广州 510075） |
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| 基金项目： | 广东省重点研发计划项目(2018B020205002)；广东省科技厅项目(2019QN01N107)；广东省科学院科技发展创新驱动发展能力建设项目(2020GDASYL-20200301002)；广东省重点实验室(2020B121201009) |
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| 摘 要： | 该研究旨在探究降胆固醇潜在菌株屎肠球菌132胆盐水解酶（bile salt hydrolase，BSH）的活性，通过PCR技术克隆目的基因并在大肠杆菌BL21中表达，同时探讨其酶学特性。利用茚三酮法对其菌体破碎液BSH活性进行测定，比酶活达0.55 U/mg。通过克隆其目的基因，连接pET-28a(+)的表达载体并进行异源表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）实验显示，该酶分子量约37 ku。当底物为甘氨胆酸钠（glycocholic acid，GCA）、pH 5.50时，BSH酶活达4.93 U/mg。酶学特性结果表明，GCA为底物、pH 5.50、温度为30 ℃时达最适条件，BSH水解能力最强，酶活达6.59 U/mg，温度在4~30 ℃时，pH为5~7有较好的热稳定和pH稳定性。不同离子对酶活的影响实验表明Na+、Ca2+、Mg2+均对酶活有激活作用；Mn2+、Fe2+对酶活影响不大，但Ni2+、Al3+、Li2+、Co2+、Zn2+均对酶活有强抑制作用，比酶活降到10%以下，几乎丧失活性。通过酶反应动力学得出该酶的Vmax为6.44 μmol/(min?mg)，Km值为3.16 mmol/L。因此，通过bsh基因克隆并异源表达，提高了屎肠球菌132BSH活性，并且BSH水解各类胆盐能力较强，为降胆固醇功能食品的开发与应用奠定基础。
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| 关 键 词： | 屎肠球菌132；胆盐水解酶；基因克隆；异源表达；酶学特性 |
| 收稿时间： | 2021-11-18 |
Cloning, Heterologous Expression, and Enzymatic Characteristics of the Bile Salt Hydrolase Gene from Enterococcus faecium 132 |
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| YANG Lingshuang,XIE Xinqiang,LI Ying,ZHANG Jumei,DING Yu,WU Qingping,WANG Juan. Cloning, Heterologous Expression, and Enzymatic Characteristics of the Bile Salt Hydrolase Gene from Enterococcus faecium 132[J]. Modern Food Science & Technology, 2022, 38(8): 35-43 |
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| Authors: | YANG Lingshuang XIE Xinqiang LI Ying ZHANG Jumei DING Yu WU Qingping WANG Juan |
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| Affiliation: | (1.College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China) (2.Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Safety and Health, State Key Laboratory of Applied Microbiology Southern China, Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences, Guangzhou 510075, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Enterococcus faecium 132 bile salt hydrolase gene cloning heterologous expression enzymatic characteristics |
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