南瓜糖蛋白的分离纯化及其糖链结构鉴定

采用水提醇沉法从南瓜粉中提取南瓜糖蛋白,分别用硫酸铵、乙醇分级沉淀及琼脂糖凝胶电泳法对南瓜糖蛋白进行分离纯化,定性检测后用碱性β-消除反应及核磁共振氢谱(Proton Nuclear Magnetic Resonance,~1H NMR)、核磁共振碳谱(Carbon 13Nuclear Magnetic Resonance,~(13)C NMR)技术测定糖肽键的结构。结果显示:纯化后的糖蛋白不含游离还原糖和淀粉,其在紫外240 nm附近南瓜糖蛋白碱水解液吸光度值发生了明显的变化,证明南瓜糖蛋白的糖肽键主要为O-糖肽键;其多糖的~1H NMR和~(13)C NMR谱图表明,该多糖组分的单糖残基中包含α-和β-两种糖苷键类型,且南瓜多糖主要含有3种端基碳分别为→4)-α-D-半乳糖-(1→、T-α-D-半乳糖-(1→和→2)-α-L-鼠李糖-(1→,在175.57和171.25处的共振吸收峰说明多糖中含有糖醛酸和脂类结构。