Purification and Characterization of Intracellular α-galactosidase from Rhizopus sp. AOI

根霉Rhizopus sp．A01的菌丝体破碎液依次经过三相分离、SephaαexG-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶，纯化了54．8倍，总酶活回收率达到27．3％，在SDS-PAGE上显示相对分子质量为85．6ku的单-条带，凝胶过滤表明该酶表观相对分子质量为302ku。该酶水解对硝基苯-α—D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4．5，最适温度为55％，表观Kn值为（0．242±0．027）mmol／L，表观Kcat／Km值为4．089×10^5L／（mol·s）；对蜜二糖和棉子糖有弱的水解作用，水解速度依次为138．3μmol／（h·mg）、19．7μmol／（h·mg）。水解活性受Fe^2＋和Fe^2＋的显著激活，但受Mn^2＋、Cu^2＋、Hg^＋和Mg^2＋等离子的强烈抑制。该酶活性在pH4．0～8．2保持稳定，在50℃时保温90min，残余酶活达到了48％。