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星状病毒核酸检测标准物质的研制
引用本文:徐蕾蕊,魏海燕,林长军,马 丹,汪 琦,张西萌,李 丹,付溥博,刘 莉,魏永新,赵晓娟,曾 静.星状病毒核酸检测标准物质的研制[J].食品科学,2016,37(6):172-177.
作者姓名:徐蕾蕊  魏海燕  林长军  马 丹  汪 琦  张西萌  李 丹  付溥博  刘 莉  魏永新  赵晓娟  曾 静
作者单位:1.北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心,北京 100026;2.辽宁出入境检验检疫局,辽宁 大连 116001
摘    要:目的:研制用于食品中星状病毒核酸检测的cRNA标准物质。方法:利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒cRNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2 种标准物质样品。采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应(real-time-polymerase chain reaction,RTPCR)方法检验2 种标准物质样品均匀性和稳定性。样品中RNA浓度(拷贝/μL)通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果:均匀性结果显示2 种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P>0.05)。稳定性检验表明20~25 ℃ 10 d、4 ℃ 14 d、-20 ℃ 3 个月及-80 ℃和液氮6 个月2 种样品cRNA含量无显著变化。RNAsafe(-)标准物质定值为:(1.652±0.143)×108 拷贝/μL(-80 ℃)和(1.652±0.135)×108 拷贝/μL(液氮)。结论:RNAsafe(-)标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质。

关 键 词:星状病毒  核酸  定量实时聚合酶链式反应  数字聚合酶链式反应  标准物质  

Development of Astrovirus Reference Material Used in Nucleic Acid Amplification Testing
XU Leirui,WEI Haiyan,LIN Changjun,MA Dan,WANG Qi,ZHANG Ximeng,LI Dan,FU Pubo,LIU Li,WEI Yongxin,ZHAO Xiaojuan,ZENG Jing.Development of Astrovirus Reference Material Used in Nucleic Acid Amplification Testing[J].Food Science,2016,37(6):172-177.
Authors:XU Leirui  WEI Haiyan  LIN Changjun  MA Dan  WANG Qi  ZHANG Ximeng  LI Dan  FU Pubo  LIU Li  WEI Yongxin  ZHAO Xiaojuan  ZENG Jing
Affiliation:1. Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 100026, China; 2. Liaoning Enter-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Dalian 116001, China
Abstract:
Keywords:astrovirus  nucleic acid  real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR)  digital polymerase chain reaction  reference material  
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