| 摘 要： | 目的建立GⅡ.4诺如病毒(Norovirus,No V)抗原ELISA定量检测方法,用于重组GⅡ.4 No V病毒样颗粒疫苗研制中抗原含量检测。方法使用纯化的GⅡ.4 No V病毒样颗粒作为免疫原,分别免疫新西兰大白兔和豚鼠,制备抗血清。以豚鼠抗GⅡ.4病毒样颗粒多抗作为包被抗体,HRP标记的兔抗GⅡ.4病毒样颗粒多抗作为检测抗体,建立GⅡ.4 No V抗原ELISA定量检测方法,确定该方法的线性范围,并对该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性进行验证;用建立的方法检测GⅡ.4病毒样颗粒制备过程中间品的抗原含量。结果 GⅡ.4病毒样颗粒内部参考品在15.6~250 ng/ml范围内,线性关系良好,R20.98,高、中、低3个浓度样品回收率在90.9%~110.2%之间,板内和板间精密度试验的CV值均不超过15%;包被微孔板37℃放置6 d,稳定性试验的CV值均小于15%;与GⅡ.4No V病毒样颗粒之外的抗原均无交叉反应;可用于定量检测重组No V抗原制备过程中不同阶段样品。结论建立了GⅡ.4 No V抗原ELISA定量检测方法,该方法准确度、精密度、稳定性、特异性、适用性均良好,为No V病毒样颗粒疫苗的研制提供了质控方法。
|
