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海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定
引用本文:鄢荣歆,徐赛涛,丛丽娜,杨冠科,朱蓓薇. 海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定[J]. 大连轻工业学院学报, 2009, 0(6)
作者姓名:鄢荣歆  徐赛涛  丛丽娜  杨冠科  朱蓓薇
作者单位:大连工业大学生物与食品工程学院;
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30571449); 国家重点基础研究发展规划(“973”计划)前期研究资助项目(2006CB708210)
摘    要:通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程...

关 键 词:海刺参  组织蛋白酶L  RT-PCR  3′-和5-′RACEPCR  重组表达  

Cloning,expression and assay of cathepsin L from the sea cucumber Stichopus japonicus
YAN Rong-xin,XU Sai-tao,CONG Li-na,YANG Guan-ke,ZHU Bei-wei. Cloning,expression and assay of cathepsin L from the sea cucumber Stichopus japonicus[J]. Journal of Dalian Institute of Light Industry, 2009, 0(6)
Authors:YAN Rong-xin  XU Sai-tao  CONG Li-na  YANG Guan-ke  ZHU Bei-wei
Affiliation:YAN Rong-xin,XU Sai-tao,CONG Li-na,YANG Guan-ke,ZHU Bei-wei(School of Biological and Food Engineering,Dalian Polytechnic University,Dalian 116034,China)
Abstract:
Keywords:
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