响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。