水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(gE)的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法 以VZV全病毒抗原为免疫原，通过小鼠杂交瘤融合技术筛选可稳定分泌抗VZV-g E抗体的杂交瘤细胞株，间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价，经Hi Trap^TMMabselect^TMSu Re和Hi Trap^TMDesalting纯化后，12%SDS-PAGE分析单克隆抗体纯度，Western blot法检测特异性，小鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定亚型。经表位叠加试验筛选捕获抗体及酶标抗体，棋盘滴定法确定捕获抗体(0.25、0.5、1、2、5和10μg/m L)和酶标抗体(1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000和1∶10 000稀释)工作浓度后，建立VZV-g E含量的双抗体夹心ELISA检测方法。验证方法的线性范围、准确性、精密性和特异性。采用建立的方法检测3批7 L生物反应器培养1～14 d的CHO-VZV-g E细胞培养上清中g E含量。结果共获得4株稳...