| Loop结构A79Y和T81Q定点突变对木聚糖酶XynASP热稳定性的影响 |
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| 引用本文： | 凌少华,李思琪,蒋月,叶明洋,吕婷婷,王冶,李恩中,李同彪.Loop结构A79Y和T81Q定点突变对木聚糖酶XynASP热稳定性的影响[J].粉末涂料与涂装,2023(3):274-280. |
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| 作者姓名： | 凌少华 李思琪 蒋月 叶明洋 吕婷婷 王冶 李恩中 李同彪 |
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| 作者单位： | 黄淮学院生物与食品工程学院 |
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| 基金项目： | 河南省省级重大科技专项(191110110600)；;河南省重点研发与推广专项(科技攻关)(212102110274,222102110372)；;河南省高等学校重点科研项目(22A180022)； |
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| 摘 要： | 目的 识别溶糖曲霉(Aspergillus saccharolyticus)JOP 1030-1木聚糖酶Xyn ASP Loop结构中的热稳定性位点，提高其热稳定性。方法 利用Fireprot在线服务器预测木聚糖酶热稳定性相关氨基酸位点，在Loop结构中筛选有益突变位点。通过定点突变构建单点突变体XynA79Y、XynT81Q及双点突变体XynLQ(A79Y/T81Q)。将重组突变质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达，利用Ni-NTA蛋白纯化试剂盒对重组木聚糖酶进行纯化，并测定酶的最适温度及热稳定性、最适pH及pH稳定性。结果 在Loop结构中筛选出有益突变位点A79Y和T81Q，纯化后的蛋白样品纯度较高。相比野生型Xyn ASP，突变体XynA79Y、XynT81Q及XynLQ的最适温度分别提高了10、5和5℃。40℃热处理30 min，野生型Xyn ASP仅保留30.2%残余酶活力，而突变体XynT81Q为3...
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| 关 键 词： | 木聚糖酶 Fireprot 定点突变 热稳定性 |
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