| 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化 |
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| 引用本文： | 李冀,杨慧,唐蕊华,李晶,李琦,邵燕,呼延霆,黄庆生,师俊玲.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化[J].粉末涂料与涂装,2015,28(5). |
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| 作者姓名： | 李冀 杨慧 唐蕊华 李晶 李琦 邵燕 呼延霆 黄庆生 师俊玲 |
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| 作者单位： | 西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术国防重点实验室,陕西西安,710072 |
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| 摘 要： | 目的原核表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定。方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的mec Af基因片段,克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-6p-mec Af,经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组表达质粒p GEX-6p-mec Af经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5%,纯化后纯度达90%。结论成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coli中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础。
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| 关 键 词： | 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白2a 转肽酶区 原核细胞 基因表达 |
Prokaryotic expression and purification of transpeptidase domain of penicillin binding protein 2a of methicillin-resistant Staphylococcus aureus |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Penicillin binding protein 2a (PBP2a) Transpeptidase domain Prokaryotic cells Gene expression |
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