苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备

HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用，蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能。将苹果转录因子基因MdHB1分别连接到pGEX-6p-1和pET-28a（＋）表达载体，热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3），随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）诱导培养，分别得到了带有GST和6×His标签的MdHB1融合蛋白（分别命名为MdHB1-GST和MdHB1-His6）。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，在?18、28?℃和37?℃?3?个温度诱导条件下都是沉淀中MdHB1-GST融合蛋白的量较多，37?℃尤为明显，较低的诱导温度（18?℃和28?℃）能够提高融合蛋白MdHB1-GST可溶性形式存在的比例；28?℃条件下50?mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8?h左右达到最大，且受IPTG质量浓度（10、50、100?mg/L）的影响不大。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白MdHB1-His6为抗原，成年兔免疫以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明，所得抗体效价较高。蛋白质免疫印迹实验结果说明，所制备多克隆抗体特异性良好，能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测MdHB1蛋白。综上所述，本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究MdHB1在植物体内的功能。