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| 烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达 | |
| 作者姓名： | 钟晓武 付强 邹颉 赵杰宏 林世锋 郭玉双 任学良 |
| 作者单位： | 贵州省烟草科学研究院;烟草行业烟草分子遗传重点实验室;川北医学院附属医院;医学研究中心;川北医学院基础医学院生物学教研室; |
| 基金项目： | 贵州省科技厅农业攻关项目“烤烟种质资源鉴定与创新及新品种选育研究”(黔科合NY字[2011]3047号);中国烟草总公司重点项目“烤烟育种新技术与新一代烤烟新品种选育研究”(中烟办[2010]221号);贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金“贵州主推烟草品种基因组结构研究”(黔科合人字[2013]02号) |
| 摘 要： | 为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。 |
| 关 键 词： | 烟草 糖基转移酶 基因 蛋白酶 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |