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单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制
引用本文:潘秀华,孟宪荣,栗绍文,张超,谢世琦,闫少侠,蔡旭旺.单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制[J].中国食品卫生杂志,2014,26(2):115-119.
作者姓名:潘秀华  孟宪荣  栗绍文  张超  谢世琦  闫少侠  蔡旭旺
作者单位:华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn;华中农业大学动物医学院 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,湖北 武汉 430070收稿日期:┣┣中收稿日期┫┫2013-09-16 基金项目:┣┣中基金项目┫┫“十二五”农村领域国家科技计划课题2012AA101601;武汉市科技攻关计划2013020501010172作者简介:┣┣中作者简介┫┫潘秀华 女 硕士生 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:panxiuhua1987@12;6.com通讯作者:┣┣中通信作者┫┫栗绍文 男 副教授 研究方向为动物源性食品安全研究E-mail:lishaowen@mail.hzau.edu.cn
基金项目:“十二五”农村领域国家科技计划课题(2012AA101601);武汉市科技攻关计划(2013020501010172)
摘    要:以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×105cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×106 cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。

关 键 词:单增李斯特菌    InlA蛋白    单克隆抗体    胶体金免疫层析检测试纸条    食源性致病菌
收稿时间:2013/9/16 0:00:00

Development of colloidal gold strip for detection of Listeria monocytogenes
PAN Xiu-hu,MENG Xian-rong,LI Shao-wen,ZHANG Chao,XIE Shi-qi,YAN Shao-xia and CAI Xu-wang.Development of colloidal gold strip for detection of Listeria monocytogenes[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2014,26(2):115-119.
Authors:PAN Xiu-hu  MENG Xian-rong  LI Shao-wen  ZHANG Chao  XIE Shi-qi  YAN Shao-xia and CAI Xu-wang
Affiliation:Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China;Key Lab of Veterinary Diagnostics Innovation in Agricultural Ministry,College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Hubei Wuhan 430070,China
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Keywords:
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