莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT57抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 韩鹏飞,闫珍,樊振川.莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT57抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J].食品与生物技术学报,2019,38(11):108-114. |
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作者姓名: | 韩鹏飞 闫珍 樊振川 |
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作者单位: | 天津科技大学 大健康生物技术研究所 天津 300457; 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津 300457; 天津科技大学 食品工程与生物技术学院,天津 300457,天津科技大学 大健康生物技术研究所 天津 300457; 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津 300457; 天津科技大学 食品工程与生物技术学院,天津 300457,天津科技大学 大健康生物技术研究所 天津 300457; 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津 300457; 天津科技大学 食品工程与生物技术学院,天津 300457 |
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摘 要: | IFT57是纤毛内运送蛋白IFT B复合物的一个重要组分,在鞭毛组装中发挥着重要作用。利用莱茵衣藻ift57基因中一段编码亲水性氨基酸序列的片段构建了带有6×His标签的原核表达载体pET-28a(+)-ift57,并转入大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达蛋白质,以12 g/dL SDS-PAGE鉴定,获得相对分子质量大小为17 200的ITF57重组蛋白质片段。对6×His-IFT57融合蛋白质进行纯化,并用其免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血液并分离血清。利用Western blotting对所获抗体进行特异性鉴定。ELISA测定结果表明,抗血清效价为512 000。在抗血清经Protein A纯化后,Western blotting检测显示所制备的IFT57多克隆抗体能够特异性识别莱茵衣藻中的IFT57蛋白质。这一结果表明,为表达纯化溶解性较差的蛋白质抗体制备提供了借鉴意义,所获抗体为深入研究IFT57在鞭毛组装中的作用机理奠定了基础。
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关 键 词: | 莱茵衣藻 纤毛 IFT57 原核表达 多克隆抗体 |
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