| NIRF蛋白的原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 杨艳,金方敏,钱冠华,段昌柱.NIRF蛋白的原核表达及纯化[J].粉末涂料与涂装,2011,24(1). |
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| 作者姓名： | 杨艳 金方敏 钱冠华 段昌柱 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30872248); 重庆市科技委员会资助(CSTC,2008BB5400); 重庆市教育委员会资助(KJ080326) |
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| 摘 要： | 目的 原核表达NIRF基因,并纯化NIRF蛋白。方法 PCR扩增全长NIRF基因,克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用GST 4B球珠亲和纯化目的蛋白。结果重组表达质粒pGST-NIRF经酶切鉴定证明构建正确。22℃条件下培养,菌体A600值达1.8时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导7 h,能使GST-NIRF在上清中大量表达;纯化的重组GST-NIRF蛋白纯度达85%以上,可与GST抗体和NIRF抗体发生特异性结合。结论已成功在大肠杆菌中表达了GST-NIRF蛋白,纯化的蛋白可用于NIRF的生物功能活性研究。
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| 关 键 词： | NIRF GST标签 原核细胞 基因表达 纯化 |
Prokaryotic Expression and Purification of NIRF Protein |
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| YANG Yan,JIN Fang-min,QIAN Cuan-hua,DUAN Chang-zhu.Prokaryotic Expression and Purification of NIRF Protein[J].Chinese Journal of Biologicals,2011,24(1). |
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| Authors: | YANG Yan JIN Fang-min QIAN Cuan-hua DUAN Chang-zhu |
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| Affiliation: | YANG Yan,JIN Fang-min,QIAN Guan-hua,DUAN Chang-zhu (Department of Cell Biology and Genetics,Molecular Medicine & Cancer Research Center,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China) |
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| Abstract: | Objective To express Np95 / ICBP90-lkie RING finger protein(NIRF)gene in prokaryotic cells and purify the expressed product. Methods The full-length NIRF gene was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. The constructed recombinant plasmid pGST-NIRF was transformed to E. coli BL21 (DE3)for expression under induction of IPTG. The expressed protein was purified by affinity chromatography with GST 4B beads. Results Restriction analysis proved that recombinant plasmid pGST-NIRF ... |
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| Keywords: | NIRF GST labeling Prokaryotic cells Gene expression Purification |
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