手性拆分异丙甲草胺中间体的产脂肪酶菌株的筛选及优化

目的]从土壤中筛选出能选择性水解2-(2-甲基-6-乙基)苯基氨基]丙甲酯(NEMPAME)的菌株,并对该菌株进行鉴定及优化。方法]以NEMPAME为碳源,结合传统的罗丹明B平板筛选方法,通过摇瓶复筛,筛选1株具有最高立体选择性水解NEMPAME的菌株。在摇瓶培养下,采用单因素和正交试验,对其培养条件进行优化。结果]从土壤中筛选出1株催化拆分NEMPAME的菌株,经形态观察和16Sr RNA鉴定,初步认为是铜绿假单胞菌(Pseudomonas)。经培养条件优化后酶活提高了308.98%。结论]该菌株拆分NEMPAME研究中发现,活性蛋白属于胞内酶,手性选择性为R-型。优化后:葡萄糖10 g/L,酵母20 g/L,Mg SO40.5 g/L,Zn Cl20.5 g/L,橄榄油10 g/L,初始p H值7.5,培养温度37℃,发酵时间48 h。