枯草芽孢杆菌糖化型α-淀粉酶的研究(Ⅰ)——糖化型淀粉酶的发酵生产条件及纯化

枯草芽孢杆菌KO_2在合适的碳源,如糊精、可溶性淀粉及氮源,如豆饼浸出液的培养液中三天能达产糖化型α-淀粉酶高峰。使用硫酸铵分级盐析,离交色谱,凝胶过滤可获得纯净的酶。对此纯化的酶的研究表明:该酶的等电点为pH5.16,pH稳定范围5.0～8.5,温度稳定范围40～50℃以下,最适作用pH为5.5,最适作用温度66℃,分子量经凝胶过滤、高压液相色谱、SDS电泳及超速离心分析测得为42,000～45,000,由396氨基酸残基构成并确定了各种氨基酸的百分比及数量,对于可溶性淀粉的米氏常数为0.057,最大速度V_(max)=1.3微克分子/分钟·亳升·单位酶活。比较此酶与液化型α-淀粉酶、糖化酶对基质的作用表明,此酶具有独特的作用机理。