| 双歧杆菌胆盐水解酶基因的重组表达、纯化与酶学性质 |
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| 引用本文： | 周晓玲,张娟,陈坚,堵国成.双歧杆菌胆盐水解酶基因的重组表达、纯化与酶学性质[J].食品与生物技术学报,2016,35(8):792-800. |
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| 作者姓名： | 周晓玲 张娟 陈坚 堵国成 |
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| 作者单位： | 食品安全与营养协同创新中心，江苏 无锡 214122; 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江南大学，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 为了提高胆盐水解酶在大肠杆菌中的表达量,研究重组胆盐水解酶的酶学性质。利用大肠杆菌表达系统,对双歧杆菌来源的胆盐水解酶进行了表达。将PCR获得的胆盐水解酶基因克隆至表达载体p ET-22b(+),得到重组质粒p ET-22b(+)-bsh,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经发酵优化,重组菌在20℃、IPTG 1 mmol/L条件下诱导32 h可达最高酶活,对甘氨脱氧胆酸钠和牛磺酸脱氧胆酸钠的酶活分别为135.2 U/m L和121.3 U/m L。采用镍亲和层析柱对重组胆盐水解酶进行纯化,经SDS-PAGE分析,胆盐水解酶相对分子质量(Mr)为35.0×103。酶学性质研究表明,重组胆盐水解酶偏好水解甘氨结合胆盐,对甘氨胆酸钠的催化活性最高,达到220.1 U/mg。酶催化反应的动力学参数经Hill方程拟合,希尔系数大于1,表明底物与酶之间存在协同作用,且不同底物与重组胆盐水解酶之间存在不同的协同作用,表明重组胆盐水解酶属于变构酶。研究结果为其他来源胆盐水解酶在基因工程菌中的表达,和进一步研究胆盐水解酶的结构和催化反应机理提供了参考。
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| 关 键 词： | 胆盐水解酶 双歧杆菌 大肠杆菌 重组表达 酶学性质 |
Expression, Purification and Enzymatic Properties Study of the Bile Salt Hydrolase from Bifidobacterium in Escherichia coli |
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| ZHOU Xiaoling,ZHANG Juan,CHEN Jian and DU Guocheng.Expression, Purification and Enzymatic Properties Study of the Bile Salt Hydrolase from Bifidobacterium in Escherichia coli[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2016,35(8):792-800. |
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| Authors: | ZHOU Xiaoling ZHANG Juan CHEN Jian and DU Guocheng |
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