| 基于内参的志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测 |
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| 引用本文： | 王建昌,王金凤,李静,孙晓霞,陈瑞春. 基于内参的志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测[J]. 食品与生物技术学报, 2016, 35(4): 408-418 |
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| 作者姓名： | 王建昌 王金凤 李静 孙晓霞 陈瑞春 |
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| 作者单位： | 河北省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051,河北省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051,河北省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051,河北省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051,河北省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051 |
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| 摘 要： | 根据Genbank已公布的志贺氏菌基因组序列,筛选特异性靶基因ipa H,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并在体系中加入内参(IAC),通过标记不同荧光基团的Taq Man探针来监测IAC,进而实时监控整个PCR反应过程。按照人工污染样品,以评价所建立反应体系的性能。以志贺氏菌基因组DNA为模板,最低检测限为1 pg/u L;以10倍梯度稀释的菌液用水煮法提取DNA为模板,最低检测限为9×103CFU/m L;以含有ipa H的质粒为模板,最低检测限可以达到103考贝/u L;建立ipa H和ipa H-IAC标准曲线,Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999);人工污染初始菌量为20 g中10 CFU的羊肉时,志贺氏菌在增菌6 h后即可检出(水洗加试剂盒法)。作者建立的ipa H-IAC实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中志贺氏菌,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生,进一步保证了结果的可靠性,有利于实现样品中志贺氏菌实时荧光定量PCR检测方法的标准化。
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| 关 键 词： | 志贺氏菌；ipaH；实时荧光定量PCR；内参 |
Establishment of Fluorescence Quantitative PCR Assay in Detection of Shigella Based on Internal Reference |
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| WANG Jianchang,WANG Jinfeng,LI Jing,SUN Xiaoxia and CHEN Ruichun. Establishment of Fluorescence Quantitative PCR Assay in Detection of Shigella Based on Internal Reference[J]. Journal of Food Science and Biotechnology, 2016, 35(4): 408-418 |
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| Authors: | WANG Jianchang WANG Jinfeng LI Jing SUN Xiaoxia CHEN Ruichun |
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