定向进化转录调节基因提高漆酶异源表达 |
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作者姓名: | 李燕 杨建花 李宝库 朱蕾蕾 |
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作者单位: | 河北大学 药学院,河北 保定 071002;中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室,天津 300308;中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室,天津 300308;河北大学 药学院,河北 保定 071002 |
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基金项目: | 天津市海外留学择优资助项目 |
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摘 要: | 为提高Tremetes viscolor漆酶Lcc的表达量,本研究主要针对漆酶转录调节区域进行定向进化。利用易错PCR,选择不同浓度的Mn2+对调节区域进行突变,并以酿酒酵母为宿主细胞进行异源表达,构建S. c/pYES2-Lcc调节子突变库。选用2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)为底物的96孔板测定漆酶酶活高通量筛选方法对突变库中960株突变体进行筛选,并对酶活高的突变体进行摇瓶复筛,最终获得三株遗传稳定性良好的酶活较高地突变体M1、M2、M3,其粗酶液酶活分别是野生型菌株粗酶液酶活的1. 73倍、1. 46倍、1. 37倍,突变菌株M1粗酶液酶活最高可达35. 4 U/L。
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关 键 词: | 漆酶 定向进化 酿酒酵母 |
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