| 植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化 |
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| 引用本文： | 王盼,费永涛,刘冬梅,黄娟,吴晖,余以刚,唐语谦,肖性龙. 植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化[J]. 现代食品科技, 2015, 31(6): 150-155 |
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| 作者姓名： | 王盼 费永涛 刘冬梅 黄娟 吴晖 余以刚 唐语谦 肖性龙 |
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| 作者单位： | （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641）,（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31101254）；广东省自然科学基金(2011010005679)；中央高校基本科研业务费专项资金项目（D2116760）；广东省科技攻关（2013B020312002）；广东省科技攻关项目(412051029089) |
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| 摘 要： | 研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化到感受态细胞DH5α,成功构建重组质粒p ET-32a(+)-nir。将重组质粒转化到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21中,在IPTG浓度为1 mmol/L和诱导温度为25℃的条件下诱导4 h后诱导表达NIR蛋白,经诱导后的工程菌能将50μg/m L的亚硝酸盐降解90%以上,利用亲和层析柱Ni sepharose 6 Fast flow进行纯化得到重组蛋白,该重组蛋白经SDS-PAGE电泳后的分子量约为60 KDa。总之,经由植物乳杆菌DMDL 9010克隆出亚硝酸还原酶基因,并成功构建了重组质粒p ET-32a(+)-nir,利用基因工程方法得到的工程菌能有效降解亚硝酸盐,并能利用亲和层析得到高纯度的NIR。
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| 关 键 词： | 亚硝酸盐还原酶；植物乳杆菌；基因克隆；蛋白表达；工程菌 |
| 收稿时间： | 2014-10-21 |
Cloning, Expression, and Purification of the Nitrite Reductase Gene from Lactobacillus plantarum DMDL 9010 |
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| WANG Pan,FEI Yong-tao,LIU Dong-mei,HUANG Juan,WU Hui,YU Yi-gang,TANG Yu-qian and XIAO Xing-long. Cloning, Expression, and Purification of the Nitrite Reductase Gene from Lactobacillus plantarum DMDL 9010[J]. Modern Food Science & Technology, 2015, 31(6): 150-155 |
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| Authors: | WANG Pan FEI Yong-tao LIU Dong-mei HUANG Juan WU Hui YU Yi-gang TANG Yu-qian XIAO Xing-long |
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| Affiliation: | (College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China),(College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China) and (College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510641, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nitrite reductase Lactobacillus plantarum gene cloning protein expression engineered bacteria |
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