联合应用S/D法和膜过滤法灭活/去除凝血酶病毒效果的验证

目的验证联合应用S/D法和膜过滤法灭活/去除凝血酶病毒的效果。方法采用S/D法灭活凝血酶中间体的乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),膜过滤法去除猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和呼肠孤病毒Ⅲ型(reovirus3,Reo3),细胞病变法测定病毒滴度;参照《中国药典》三部(2010版)要求,测定聚山梨酯80和磷酸三丁酯的残留量,并检测样品病毒灭活/去除前后的效价、蛋白质含量及相对分子质量。结果 S/D法可有效灭活脂包膜指示病毒,膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV和Reo3指示病毒。梨酯80和磷酸三丁酯残留量符合《中国药典》三部(2010版)限度要求;样品经灭活/去除病毒后,效价提高了8.5%,蛋白质含量提高了12.7%,灭活前后相对分子质量范围无明显变化。结论联合应用S/D法和膜过滤法可用于凝血酶及其他血液制品的病毒灭活/去除工艺,以提高制品的病毒安全性。     

重组人凝血因子Ⅷ病毒灭活/去除工艺验证

目的验证重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulationⅧ,rhFⅧ)病毒灭活/去除工艺。方法采用S/D法作为rhFⅧ病毒灭活工艺,纳米过滤(20 nm孔径)作为rhFⅧ病毒去除工艺,分析病毒灭活/去除两步工艺对rhFⅧ活性的影响;分别以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、小鼠白血病病毒(xenotropic murine leukemia virus,X-MuLV)及小鼠细小病毒(murine minute virus,MMV)作为指示病毒,对上述工艺进行病毒灭活/去除效果验证。结果 S/D灭活工艺中,3批制品的活性收率分别为96. 2%、100. 4%和103. 2%;(24±2)℃处理180 min后,指示病毒PRV、VSV和X-MuLV滴度降低量(Log10)虽然均4,但盲传3代,仍未检出病毒。纳米过滤工艺中,3批制品蛋白回收率均大于98%,活性回收率均大于90%,纳米过滤120 min,MMV滴度降低量(Log10) 4。结论建立的rhFⅧ病毒灭活/去除工艺,可有效灭活/去除病毒,保证制品的质量和安全。     

大连化物所成功研发可吸附灭活新型冠状病毒的催化材料

正近日,中科院大连化学物理所于成功研发出可吸附灭活新型冠状病毒的催化材料。近阶段,新型冠状病毒感染的肺炎疫情影响整个世界。从化学的观点看,各种病毒所包含的蛋白质、核糖核酸、脂肪膜等生物大分子没有一般的有机物小分子稳定,易于水解或氧化失活。因此,基于固体材料的吸附性能、酸碱性、氧化还原性等化学特性,实现对病毒的吸附和灭活在理论上是可行的。     

美兰光化学法对红细胞膜的影响

目的　观察美兰光化学法灭活红细胞制品中病毒对红细胞膜的影响。方法　在离体条件下 ,观察光化学处理后单线态分子氧对红细胞膜结构及组分的影响。结果　经光照灭活病毒后 ,红细胞膜脂质流动性 ,膜蛋白组分及含量与对照红细胞相比差异无显著意义 ,而膜脂过氧化酶含量与对照红细胞相比差异有显著意义。结论　光化学处理对人红细胞膜具有一定的损伤     

巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白病毒灭活效果的验证

目的以伪狂犬病病毒(PRV)、Sindbis病毒和HIV-1为模型病毒,验证巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白(HBIG)的病毒灭活效果。方法将模型病毒按1:9(v/v)的比例加入HBIG样品中,60℃水浴保温10h,测定病毒滴度,观察病毒灭活效果,并以放射免疫法测定病毒灭活前后样品抗HBsAg效价的变化。结果病毒灭活后,PRV滴度下降超过5LgCCID50/0.1ml,Sindbis病毒滴度下降超过6LgPFU/ml,HIV-1滴度下降超过4LgCCID50/0.1ml;3批HBIG样品的抗HBsAg效价分别降低了6.5%、6.0%和5.8%。结论巴氏消毒法可以对HBIG样品中的模型病毒进行有效灭活。目的以伪狂犬病病毒(PRV)、Sindbis病毒和HIV-1为模型病毒,验证巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白(HBIG)的病毒灭活效果。方法将模型病毒按1:9(v/v)的比例加入HBIG样品中,60℃水浴保温10h,测定病毒滴度,观察病毒灭活效果,并以放射免疫法测定病毒灭活前后样品抗HBsAg效价的变化。结果病毒灭活后,PRV滴度下降超过5LgCCID50/0.1ml,Sindbis病毒滴度下降超过6LgPFU/ml,HIV-1滴度下降超过4LgCCID50/0.1ml;3批HBIG样品的抗HBsAg效价分别降低了6.5%、6.0%和5.8%。结论巴氏消毒法可以对HBIG样品中的模型病毒进行有效灭活。     

不同光源照射含亚甲蓝血浆的病毒灭活实验

用口炎疱疹病毒 (VSV)和 Sindbis病毒作为指示病毒 ,观察了盛装在国产 PVC储血袋内含亚甲蓝的血浆经 5种不同光源 (荧光、红光、自然光、卤素光、白灼光 )照射后的病毒灭活效果及对血浆中的凝血因子的影响 ,实验证实亚甲蓝配合上述可见光照射均对血浆中的病毒灭活有效 ,其中荧光的照射效果尤为突出。用荧光照射 30 min,可使 VSV和 Sindbis病毒的致病剂量降低 >7log TCID5 0 /m l,且血浆中的 :C、 :C、纤维蛋白原的回收率均 >75 % ,提示亚甲蓝 /荧光照射对单袋血浆的病毒灭活具有一定的实用性和可行性。     

人血浆载脂蛋白AⅠ冻干品干热法灭活病毒的效果验证

目的采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证。方法将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoAⅠ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响。结果干热法对ApoAⅠ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44%)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Western blot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化。结论干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoAⅠ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性。     

肝水解肽的制备及其病毒灭活/去除工艺的验证

目的制备肝水解肽,并对其病毒灭活/去除工艺进行验证。方法以鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)为指示病毒,在100℃,pH6.0～7.0煮沸20min灭活病毒,用截留相对分子质量为10000的中空纤维柱,在进压0.15Mpa、回流压0.05Mpa和进压0.20Mpa、回流压0.10Mpa各循环超滤3次去除病毒,用无特定病原(SPF)的鸡胚和鸡成纤维细胞进行病毒灭活/去除的效果验证。结果加热煮沸后,指示病毒未检出,滴度降低NDV≥7.4logEID50/0.2ml、IBDV≥5.45logCCID50/0.1ml;超滤后IBDV未检出,滴度降低≥5.43logCCID50/0.1ml。盲传复壮均未检出病毒。制备的肝水解肽多肽含量均在20mg/ml以上。结论制备的肝水解肽工艺中两种灭活/去除病毒方法均有效,经灭活/去除病毒后的产品质量稳定。     

饮用水中病毒的健康危害与控制

文中介绍病毒的特点、介水传播的健康危害、国内外饮用水标准中对病毒指标的控制要求,并对饮用水中病毒的去除或灭活方法和效果进行了探讨,以期为饮用水中病毒的监测和控制提供技术支持。     

二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察

目的观察二乙烯亚胺(BEI)对流感病毒的灭活效果。方法分别使用甲醛和BEI对流感病毒进行灭活试验,通过血凝试验检测二者灭活效果,并确定各自最佳灭活时间。用灭活的病毒液免疫小鼠,检测其抗原性,并用RT-PCR方法分析灭活病毒基因组的完整性。以裂解剂TritonX-100裂解病毒后,分别加入甲醛和BEI灭活,采用单向免疫扩散法检测灭活不同时间病毒液的HA含量。结果BEI灭活36h可将病毒完全灭活;BEI灭活的病毒免疫小鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体;BEI灭活病毒液经RT-PCR,不能扩增出病毒基因;BEI灭活病毒的HA平均含量比甲醛灭活病毒的HA平均含量略高。结论BEI在灭活流感病毒感染性的同时,能够灭活病毒基因,并较好地保持病毒的抗原性。     

终端干热法灭活凝血因子类制品中细小病毒的工艺验证

目的验证终端干热法灭活凝血因子类制品中细小病毒的灭活工艺,并对其灭活效果进行评价。方法以猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)为指示病毒,模拟凝血因子类制品生产工艺中病毒灭活的工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测残余病毒滴度,验证终端干热法灭活病毒的效果。结果 3家企业生产的人凝血因子Ⅷ制品经100℃加热30min灭活,病毒滴度分别下降2.01～2.31、≥3.92和3.13～3.50LgTCID50/0.1ml;冻干与加热联合作用,病毒滴度分别下降2.82～3.00、≥4.24和4.00～4.12LgTCID50/0.1ml;5家企业生产的人纤维蛋白原经100℃加热30min灭活,病毒滴度分别下降3.50～3.63、2.56～2.70、3.06～3.57、3.00～3.25和≥3.75LgTCID50/0.1ml;冻干与加热联合作用,病毒滴度分别下降4.00～4.12、3.12～3.46、4.04～4.56、3.50～3.75和≥4.63LgTCID50/0.1ml。结论终端干热法对凝血因子类制品中的细小病毒具有一定的灭活作用,但由于工艺复杂、影响因素较多,不同企业生产的同类制品的病毒灭活效果不尽相同。     

pH值、辛酸钠浓度和灭活时间对病毒灭活效果的影响

目的探讨p H值、辛酸钠浓度和灭活时间对辛酸钠用于人免疫球蛋白制品中加入的脂包膜指示病毒灭活效果的影响。方法向不同p H值和不同辛酸钠浓度的人免疫球蛋白制品中加入指示病毒伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV),于30℃水浴条件下作用不同时间后,采用细胞病变法测定残余病毒滴度,对不出现病变的细胞盲传3代。探讨p H值、辛酸钠浓度和灭活时间对辛酸钠灭活PRV效果的影响。结果在酸性p H值(4.6±0.2)条件下,当辛酸钠浓度在7~13 mmol/L时,均能在5 min以内灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml。在中性p H值(7.4±0.2)条件下,13 mmol/L辛酸钠能瞬时灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml,而7、9和11 mmol/L浓度的辛酸钠能灭活PRV 2.8、0.43和3.2 Lg TCID50/0.1 ml,均不能瞬时完全灭活病毒,但继续灭活至5 min,可灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml。灭活后不出现病变的细胞盲传3代未出现细胞病变。结论辛酸钠可有效灭活加入人免疫球蛋白制品中的脂包膜指示病毒PRV;且酸性p H值条件下,辛酸钠的灭活效果优于p H值中性条件;辛酸钠对指示病毒的作用是灭活而非抑制。     

热力对IgG制品中HIV-1灭活的研究

采用病毒感染细胞技术观察热力对IgG制品中人类免疫缺陷病毒1型（HIV－1）的灭活作用。冻干IgG中的HIV－1（104.8TCID50）可被80℃2h和100℃30min灭活。IgG溶液中的HIV－1（106.1TCID50）可被60℃20min和80℃5min灭活。用灭活后的HIV－1再感染MT4细胞，通过连续传代培养（3代，21天）后，细胞均未出现感染性病变，提示HIV－1对热较敏感。     

动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证

目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。     

乙型脑炎病毒的生物反应器培养及其灭活和纯化

目的利用NBS 14 L篮式生物反应器大规模培养乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),并对病毒收获液进行灭活和纯化,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供参考。方法用NBS 14 L篮式生物反应器,以片状载体FibralCel DISKⅠ为载体,进行Vero细胞高密度培养,分别按0.01、0.1和0.3 MOI接种JEV(P3V2)毒种,灌流培养,收获3批病毒液,检测病毒滴度;分别使用不同浓度的甲醛(100、200、400 ng/ml)于4、25℃和不同浓度的β-丙内酯(β-丙内酯︰病毒液分别为1︰2 000、1︰4 000、1︰8 000)于4℃对病毒收获液进行灭活,取灭活后的病毒液,接种昆明小鼠,验证病毒灭活效果;用截留相对分子质量为10万的超滤器对病毒收获液进行超滤浓缩,用Sepharose 4FF层析柱对病毒浓缩液进行层析纯化。结果共培养3批Vero细胞,平台期密度约为1.6×107个/ml。3批病毒收获液的滴度分别为8.4、8.1和7.9 lgLD50/ml。以甲醛为灭活剂,作用浓度为200 ng/ml,温度为4℃时,作用7 d可完全灭活病毒,且免疫原性合格;以β-丙内酯为灭活剂,作用浓度为1︰4 000,温度为4℃时,作用12 h可完全灭活病毒,且免疫原性合格。3批病毒浓缩液病毒液经Sepharose 4FF层析柱层析纯化后,蛋白去除率达99%以上,抗原回收率在95%以上,Vero细胞蛋白质残留量和DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)的相关规定。结论成功实现了JEV的大规模生物反应器培养,层析纯化后病毒的抗原回收率较高,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供了参考。     

二乙烯亚胺对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果

目的观察二乙烯亚胺(Binary ethylenimine,BEI)对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果。方法在不同温度(37、33、28和25℃)下采用4种浓度(0.002、0.001、0.0005和0.00025mol/L)的BEI及0.0925mg/ml的甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株进行灭活,采用微量滴定法测定病毒感染性滴度,ELISA法检测灭活病毒液D抗原含量,并进行病毒灭活验证试验。结果在37℃条件下,0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒,灭活后的病毒液D抗原含量回收率为90.6%,显著高于甲醛灭活的回收率(60.6%)。经验证,灭活彻底,无活病毒存在。结论 BEI对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分。     

对10厂家低pH静脉注射用人血丙种球蛋白病毒灭活工艺的验证

以水泡性口炎病毒 (VSV)为指示病毒 ,对 10厂家的人血静脉注射用丙种球蛋白 (IVIG)生产中的低pH病毒灭活工艺进行了验证 ,结果表明该方法是一种安全、有效且简便易行的病毒灭活方法 ,但仍存在局限性。同时 ,对病毒灭活验证实验中的一些问题进行了探讨。     

SARS-CoV-2收获液滴度稳定性及灭活动力学分析

目的 对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)收获液在2～8℃环境下的滴度稳定性及β-丙内酯灭活剂对病毒的灭活效果进行研究。方法 将3批(批号：202111001、202111002和202111003)SARS-CoV-2收获液于2～8℃放置12 d，每隔3 d(0、3、6、9、12 d)取样，采用Karber法检测病毒滴度；2～8℃过夜平衡的3批病毒收获液按1∶4 000的体积分数加入β-丙内酯进行灭活，在不同的灭活时间点(0、0.5、1、1.5、2、3、4、8、16、24 h)取样检测病毒滴度，取灭活8.0、16、24 h的病毒液进行灭活验证，取灭活24 h的病毒灭活液进行透射电镜观察。结果 2～8℃环境下，SARS-CoV-2的滴度随放置时间的延长不断降低，0～3 d滴度下降不明显，第12天滴度由最初的7.75、6和7.5 lgCCID₅₀/mL降至5.75、4.625和6.25 lgCCID₅₀/mL，表明2～8℃环境下病毒...     

分子动力学模拟二硫键对大豆11S球蛋白结构及表面活性的影响

采用分子动力学模拟分析了二硫键对天然和还原状态下大豆11S球蛋白结构及其表面活性的影响。模拟结果表明,二硫键断裂后蛋白质分子稳定性降低,蛋白质分子的构象和二级结构发生变化;二硫键全部断裂会增大蛋白质分子的柔性,有利于表面活性的提高。而断开Cys88-298和Cys12-45、Cys88-29之间的二硫键会增大蛋白质疏水区域的溶剂可及表面,说明这两种断裂方式会增大蛋白质分子在界面的吸附量,有利于界面张力的降低,可以有效提高蛋白质的表面活性。     

两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23～25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8～4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID_(50)/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID_(50)/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。