TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法，并进行验证。方法 采用正交试验确定捕获抗体、检测抗体最佳浓度，建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法，并对方法进行线性范围、特异性、检测限、定量限、准确性、重复性验证；采用建立的方法检测多种生物制品，验证方法的适用性。结果 选定捕获抗体用3μg/mL浓度包板，检测抗体稀释15 000倍建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法。该方法线性范围为0.41～40.00 ng/mL，检测限为0.258 ng/mL，定量限为0.5 ng/mL；检测标准品、样品时，测量偏差小于5%；重复性验证CV<5%；不同类型样品加标回收率在80%～120%之间。结论 建立的TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法特异性、准确性、重复性良好，可准确、有效、快捷地检测各种类型生物制品中TrypLE的残留量。     

竹炭固相萃取-分散液相微萃取-气相色谱/质谱检测水中酰胺类除草剂

建立了一种新型、灵敏的检测水中酰胺类除草剂的分析方法。以固相萃取结合分散液相微萃取作为预处理技术,利用气相色谱/质谱检测酰胺类除草剂。优化了洗脱剂种类、流速、水样体积及pH值、盐效应等实验条件。在优化实验条件下,方法的检出限为0.16~1.12 ng·L-1,甲草胺、乙草胺和丁草胺的线性范围分别为2.0~104 ng·L-1,5.0~104 ng·L-1和1.0~104 ng·L-1。将所建立的方法用于河水和水库水中酰胺类除草剂的检测,加标回收率为76.6%~93.5%,结果满意。     

四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。     

芬太尼类药物色谱质谱联用检测方法研究

研究芬太尼类药物色谱质谱联用检测方法,本方法中利用固相萃取技术和同位素内标稀释方法进行萃取和净化,使用Waters公司ACQUITY UPLC BEHC_(18)反相色谱柱对目标化合物进行分析测试,实验结果表明在1.00～100.00 ng/mL的浓度范围内,线性相关系数均大于0.99,本方法芬太尼、去甲芬太尼的检出限均为0.500 ng/mL,定量限均为1.00 ng/mL,在5.00～100 ng/mL的不同基质添加水平下,回收率在85%～115%之间,RSD≤5(n=6),本方法快速准确可靠,灵敏度高,操作简便,可满足芬太尼类药物检测确证工作需求。     

HPLC法测定格列吡嗪控释片有关物质及方法学验证

目的:建立了测定格列吡嗪控释片中有关物质的高效液相色谱法。方法:用GL Wonda Sil~C_(18)色谱柱,以水(用磷酸调节p H值值至3.7)为流动相A,乙腈为流动相B,线性梯度洗脱;进样量20μL;紫外检测波长为225nm。结果:列吡嗪与降解杂质分离良好,杂质Ⅰ的检测限为0.12ng,定量限为0.32ng,格列吡嗪检测限为0.24ng。结论 :方法灵敏度高,专属性强,适用于格列吡嗪控释片的有关物质测定。     

全自动固相微萃取-气相色谱串联质谱法检测水中土臭素和2-甲基异莰醇

通过试验优化建立了以2-异丁基-3-甲氧基吡嗪为检测内标,使用全自动固相微萃取与气相色谱串联质谱联用技术检测水中2-甲基异莰醇和土臭素的方法.方法操作简单、无需使用有机溶剂、环境友好,且方法准确度和灵敏度高、精密度好.使用纯水配制2-MIB和GSM浓度梯度为50、100 ng/L的标准溶液,检测结果的相对误差均小于5％.对青岛地区生活饮用水和水源地表水实际水样进行加标回收试验时,生活饮用水的加标回收率在88.2％～132％,水源水的加标回收率在96.3％～114％,试验相对标准偏差RSD均在6％以内(n=6).该方法GSM和2-MIB的方法检出限分别为0.24 ng/L和0.41 ng/L,测定下限分别为1.0 ng/L和1.6 ng/L,远低于国标限值.     

二阶校正三维荧光测定大气污染源中苯并(a)蒽

建立了一种激发发射矩阵荧光结合基于交替三线性分解(ATLD)的二阶校正方法,快速精准检测大气污染源如油污、油烟气和烟囱灰样品中苯并(a)蒽(BaA)含量。在N=5时,ATLD获得3种样品中BaA的平均回收率分别为98.0%±5.0%、86.7%±2.3%和108.2%±3.4%,预测均方根误差分别为0.33 ng/m L、0.64 ng/m L和0.37 ng/m L。结果表明,该方法能在多种背景干扰下检测大气污染源中BaA含量,且方法准确快速,检测限低,绿色环保。     

TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA方法的适用性验证及应用

目的对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行适用性验证及应用。方法对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,并应用该方法检测3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液、纯化液和原液中Vero细胞残余DNA含量,计算Vero细胞残余DNA去除率。结果 Taq Man MGB探针实时定量PCR能够特异性扩增Vero细胞基因组DNA长串连重复序列;DNA浓度在10-1~10-6 ng/μl范围内标准曲线线性良好,相关系数为0.996,扩增效率为93.54%;检测灵敏度为10-6 ng/μl,高于斑点杂交法;检测高(10-2 ng/μl)、中(10-4 ng/μl)、低(10-6 ng/μl)浓度阳性对照DNA模板的试验内变异系数(CV)为0.145%~3.110%,试验间CV为0.624%~2.359%;检测不同浓度阳性对照DNA的回收率在101.5%~109.4%之间,均在定量方法可接受的回收率范围内;在斑点杂交检测灵敏度范围内,同一样品采用Taq Man MGB探针实时定量PCR法与斑点杂交法半定量检测的结果吻合。3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液纯化后可有效去除Vero细胞残余DNA,总去除率约为100%。结论 Taq Man探针实时定量PCR法特异性、精密性、准确性良好,灵敏度高,可作为斑点杂交法的替代方法,用于实验室内部的质量控制。     

直接测汞仪法测定肥料产品中总汞含量

利用直接测汞仪法测定有机肥、过磷酸钙、水溶肥、复合肥等肥料产品中总汞含量。该方法在0～10 ng的测量范围内线性良好,方法检出限为0.016 ng;样品称量后可直接自动进样测定,不需要样品前处理过程,具有快速、高效的检测特点,其检测结果与原子荧光光谱法一致,加标回收率在82.0%～103.0%,能够满足肥料中总汞含量的检测要求。     

利用气相色谱串联质谱技术测定泥页岩中菲、萘及其甲基化产物的方法研究

利用气相色谱串联质谱技术(GC-MS/MS)对菲、萘及其甲基化产物进行了分离和测定。建立了利用GC-MS/MS检测泥页岩中菲、萘及其甲基化产物的分析方法。结果表明方法在各化合物0.5—200 ng/mL范围内相关性较好,相关系数均达到0.995及以上,检出限分别为萘0.13 ng/mL、2-甲基萘0.10 ng/mL、1-甲基萘0.11 ng/mL、菲0.06 ng/mL、3-甲基菲0.03 ng/mL、2-甲基菲0.09 ng/mL、9-甲基菲0.04 ng/mL、1-甲基菲0.06 ng/mL。实际样品分析测试结果的相对标准偏差低于10%,说明该方法适用于泥页岩中菲、萘及其甲基化产物的痕量分析。     

无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法的建立

目的建立无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法。方法依据活性PT的ADP核糖基化酶活性,设计并合成一段荧光标记的合成肽Gαi3C20,以其为底物,采用柱前衍生-HPLC法检测无细胞百日咳疫苗的毒性,并对建立的方法进行验证。结果该方法的最低检测限为1 ng;最低定量检测限为8 ng,线性范围为8⁴00 ng/ml,区间内线性系数为0.999;用建立的方法对同一份样品平行测定10次,变异系数小于10%;该方法的回收率为94.9%;联合疫苗中的其他主要成分,如丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)、黏附素(pertactin,PRN)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)对检测结果无明显干扰。结论建立了无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法,该方法有望替代现行的动物检查法,可加强我国百白破联合疫苗的质量控制,提高疫苗的质量。     

电化学适配体传感方法检测啶虫脒

建立了一种基于适配体的电化学传感方法检测啶虫脒。适配体能够与啶虫脒特异性结合，由此引发的杂交链式反应可以实现信号放大。该方法能够对啶虫脒实现高灵敏度、高特异性检测。结果表明，在1μg·mL^-1～0.1ng·mL^-1范围内，电化学信号与啶虫脒浓度的对数值存在线性关系，检测限低至0.028ng·mL^-1。     

水中2-甲基异莰醇和土臭素的固相微萃取-气相色谱串联质谱检测方法

通过对2-甲基异莰醇(2-MIB)、土臭素(GSM)、2-异丁基-3甲氧基吡嗪(IBMP)的MS1全扫描、产物离子扫描、最佳碰撞电压试验,建立以IBMP为内标检测2-MIB、GSM的气相色谱串联质谱方法;结合已有的固相微萃取方法和气相色谱方法,通过作标准曲线、单点重复性试验、确定方法检测限、自来水和水源水的加标回收试验等手段,采用固相微萃取的前处理方式,对水中2-MIB和GSM进行检测研究。结果表明:在5～100 ng/L作标准曲线时,2-MIB和GSM的色谱峰面积与其质量浓度的线性关系良好(R~2≥0.999),2-MIB和GSM的方法检测限分别为0.52 ng/L和0.43 ng/L,浓度平均值分别为2.31 ng/L和2.06 ng/L;在饮用水中采用国标限量浓度进行加标回收试验时,2-MIB的回收率为91.7%～112.3%,GSM的回收率为100.6%～116.6%,相对标准偏差(RSD)≤5.6%(n=8)。该方法有效降低了两个相邻色谱峰对定量造成的干扰,同时提高了各自的检测灵敏度和专一性,准确度高,无需使用有机溶剂。     

b型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立

目的建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以Hib多糖—酪胺结合物(PRP-Ty)作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方法。采用棋盘法确定最佳包被多糖抗原浓度及Hib抗血清稀释倍数,绘制标准曲线,并确定最低检测限;对建立的方法进行批内和批间精密性验证;取Hib发酵液,在培养温度、接种量等因素相同的情况下,分别将培养液初始p H调至6.0±0.02、7.0±0.02和8.0±0.02,培养不同时间取样,采用建立的方法检测培养液内PRP含量。结果 PRP-Ty的最佳包被浓度为1.25μg/ml,Hib抗血清的最佳稀释倍数为300倍。该方法检测的线性范围为6.25~200 ng/ml,最低检测限为6.25 ng/ml,回归方程为y=-23.12 x+99.62,R2=0.996。采用该方法分别重复检测3次高浓度(200 ng/ml)和低浓度(20 ng/ml)PRP多糖的变异系数(CV)分别为1.608%和3.344%;采用该方法及传统化学检测法分别检测6次同一批Hib成品分装疫苗的多糖,该方法检测结果的CV值为5.75%,传统化学法检测结果的CV值为1.98%,均符合要求;该方法检测不同初始p H培养液培养的Hib发酵液,培养时间为8 h左右时,PRP产量最高;当初始p H为8.0±0.02时,培养液内PRP含量增长最快,所达到的浓度最高。结论建立了Hib多糖间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度较高,精密性良好,可应用于Hib多糖含量的定量检测。     

无细胞百日咳疫苗中活性PT的保护作用

目的 比较经基因工程方法脱毒的无细胞百日咳疫苗(APV)中不同含量活性PT的保护作用。方法 用小鼠保护性试验(AMPT)评价不同含量活性PT疫苗样品的百日咳效力,组织胺致敏试验(HST)检测不同含量PT样品中PT活性。结果 含5ng活性PT的疫苗与不含PT的疫苗效力差异无显著意义;含50ng活性PT疫苗与不含和含5ng活性PT的疫苗效力差异有显著意义。用HST肛温测定法可以检测到含50ng活性PT的样品中PT活性。结论 AMPT适用于高度脱毒或基因工程脱毒的APV的效力检定,HST肛温测定法可以证实APV中PT的活性。     

太湖流域人工合成麝香的分布调查研究

采用超声辅助乳化-液液微萃取和快速溶剂萃取技术并结合气相色谱-质谱方法,分析检测了太湖水样和湖底沉积物中8种人工合成麝香含量。结果表明,太湖流域人工合成麝香污染物主要有佳乐麝香(HHCB)、吐纳麝香(AHTN)、二甲苯麝香(MX)和麝香酮(MK)。其中水样中的平均浓度分别为15.5ng/L、10.2ng/L、1.82ng/L、0.648ng/L;湖底沉积物中的平均含量分别为0.812ng/g、0.476ng/g、0.0842ng/g、0.0249ng/g。太湖流域与国内外其他地区的人工合成麝香污染水平相当,有关部门应引起注意。     

HPLC梯度洗脱法测定盐酸利托君的有关物质

目的建立测定盐酸利托君中有关物质的方法。方法采用phenomenex C8色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-磷酸氢二铵和庚烷磺酸钠混合溶液(磷酸调pH 3.0)为流动相,梯度洗脱,流速1.5 m L/min,检测波长214 nm,柱温35℃。结果高效液相色谱法专属性强,盐酸利托君、盐酸利托君非对映异构体、杂质A约的检测限分别为的2.1 ng,2.5 ng,2.3 ng。结论该方法简便、准确,分离度好,可用于控制盐酸利托君原料的质量。     

HPLC法快速监测5-羟基间苯二甲酸反应液

目的:建立简单快速的HPLC法监测5-羟基间苯二甲酸反应液。方法:梯度洗脱反相液相色谱。结果:5-羟基间苯二甲酸和5-溴间苯二甲酸保留时间分别约4.5min和8.2min,检测限分别为0.05ng和0.065ng。重复检测反应液的RSD分别为0.06%和1.3%。结论:本法可作为5-溴间苯二甲酸合成5-羟基间苯二甲酸反应液的一种快速、灵敏、可行的监控方法。     

聚氨酯输液器中7种异氰酸酯成分的提取与2种抗氧剂的溶出研究

文章模拟银杏二萜内酯葡胺注射液（GDLI）的临床使用情况，建立7种异氰酸酯类成分的提取与2种抗氧剂的溶出检查方法。异氰酸酯类成分检测采用高效液相色谱（HPLC）柱前衍生法，衍生试剂为9-N-甲氨甲基蒽，以Kromasil C18为色谱柱，以乙腈-3%三乙胺溶液为流动相系统。抗氧剂1010与1076检测采用HPLC法，Kromasil C18色谱柱，以甲醇-水（90∶10）为流动相。结果表明：7个异氰酸酯类成分在4.1～96.8 ng/mL范围内线性关系良好，平均回收率在78.0%～106.9%之间，检出限在0.005～0.015 ng/mL之间，定量限在0.015～0.050 ng/mL之间。抗氧剂1010与1076分别在0.152 0～118.600 0μg/mL、0.392 0～122.600 0μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率分别为92.0%、101.0%，检测限分别为0.456 ng/mL、1.570 ng/mL，定量限分别为1.52 ng/mL、3.92 ng/mL。实验建立的方法灵敏度高、重复性较好，适合对聚氨酯输液器中异氰酸酯类成分的提取和抗氧剂的溶出研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中的邻苯二甲酸酯

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定化妆品中11种邻苯二甲酸酯类化合物的分析方法。化妆品样品经甲醇超声震荡提取,Pro Elut PSA玻璃固相萃取柱净化,采用Endeavorsil C18液相色谱柱分离,以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,采用HPLC-MS/MS进行检测。11种邻苯二甲酸酯类化合物在1~100 ng/m L范围内线性良好(r2=0.999 2),方法检出限为0.03~0.40 ng/m L,定量限为0.1~1.0 ng/m L,在10、20、50 ng/m L 3个不同加标水平下,平均加标回收率为80.2%~119.4%,相对标准偏差15%。该方法有较高灵敏度和精密度,满足化妆品中增塑剂快速检测要求。