固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的烟酰胺单核苷酸α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

目的 基于超高效液相色谱串联质谱法,通过优化色谱/质谱条件和样品前处理条件,建立了同时测定食品中烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)含量的方法。方法 样品经5%甲醇水溶液超声提取,HLB固相萃取柱和混合型阴离子交换固相萃取柱分别净化,采用Waters ACQUITY UPLC?HSS T色谱柱进行分离,流动相为5 mmol/L乙酸铵含0.1% (V/V)甲酸水-甲醇,梯度洗脱;流速0.2 mL/min;柱温30℃;多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)定量分析,定量离子对NMN为m/z 335.0/123.0、NAD+为m/z 662.0/540.0。结果 在最优条件下,α-NMN和β-NMN两种异构体的分离度为5.56。该方法中α-NMN、β-NMN和NAD+均在10~1000 ng/mL范围内线性良好,相关系数R2分别为0.9999,0.9998和0.9995。α-NMN、β-NMN和NAD+的方法检出限分别为4.0、2.0和1.0 ng/mL,定量限分别为10.0、5.0和3.0 ng/mL,回收率分别为90.78%～97.90%、96.98%~109.80%、83.78%~101.68%,相对标准偏差分别为2.1%～2.5%、5.0%~5.7%、5.4%~6.5%。结论 该方法灵敏度高,选择性好,结果准确可靠,可同时快速检测各种基质食品中烟酰胺单核苷酸α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量。     

核磁共振法测定食品中水苏糖的含量

以已知浓度的柠檬酸作为定量外标,琥珀酸和烟酰胺分别作为定量内标,建立了食品中水苏糖的核磁共振定量分析检测方法。该方法在0. 025～6. 40 g/L质量浓度范围内线性良好,相关系数R~2> 0. 999;以柠檬酸作为外标方法加标回收率为97. 91%,日内精密度与日间精密度分别为1. 65%和5. 27%;琥珀酸和烟酰胺作为内标方法加标回收率分别为101. 39%和106. 35%,日内精密度分别为1. 34%和0. 83%,日间精密度分别为0. 65%和2. 46%;对市售不同食品基质(固态、液态)中水苏糖含量进行检测,测定结果准确。与现行行业标准(QB/T 4260—2011)高效液相色谱法相比,该方法简化了样品的前处理操作,节约了时间,定量准确,对食品中水苏糖的定量检测具有更广泛的适用性。     

β-烟酰胺单核苷酸对生理机能影响的研究进展

我国处于亚健康状态的超重或肥胖人群与老龄化人口数量都在逐年上升。在衰老和肥胖过程中,细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,NAD＋）水平会发生系统性下降。NAD＋是细胞能量代谢、调节细胞机能、影响衰老的关键靶点,因此,通过补充NAD＋前体以改善生理机能、延缓衰老已经成为目前研究热点。β-烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）是动物体内NAD＋代谢的中间产物,也是目前最直接高效的NAD＋补充前体。但是NMN对生理机能存在多方面多器官的复杂影响,而且人体临床试验与动物实验结果并不一致,服用量也尚未确定。本文综述到目前为止NMN的动物实验和人体临床试验结果,旨在探究补充NMN对动物、人体生理机能的影响、机制及其适宜剂量和不良反应,以期为未来NMN研究与应用提供思路。     

全谱解卷积核磁共振定量法测定婴幼儿配方乳粉中23种小分子有机物

采用全谱解卷积（Global Spectral Deconvolution，GSD）结合核磁共振定量（Quantitative Nuclear Magneticresonance，qNMR）技术，建立了婴幼儿配方乳粉水提物中核苷酸、核苷、有机酸、氨基酸等23个小分子水溶性物质的含量测定方法。结果显示，所建立GSD-qNMR定量方法的相关系数在0.9960~0.9997之间，精密度的RSD在1.02%~3.72%之间，重复性的RSD在1.34%~3.68%之间，稳定性的RSD在1.62%~3.20%之间，回收率在85.02%~110.00%之间。将该方法胆碱测定值与国标方法进行了对比，结果较为一致（相对标准偏差小于15%）。基于GSD处理的qNMR法各项方法学指标均优于传统qNMR方法，更适用于婴幼儿配方乳粉等复杂食品基质中小分子水溶性物质的定量检测。     

代谢工程改造大肠杆菌发酵生产β-烟酰胺单核苷酸

为实现大肠杆菌高效生产β-烟酰胺单核苷酸（β-nicotinamide mononucleotide,β-NMN）,设计模块化代谢改造策略。首先,对烟酰胺（nicotinamide,NAM）和β-NMN支路代谢涉及的8个酶进行失活,减少底盘细胞对前体和产物的额外消耗。其次,通过引入NAM输入蛋白（Bc NiaP）、β-NMN输出蛋白（Bm PnuC）、5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶（5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate?synthetase,Prs）和烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide?phosphoribosyl?transferase,Nampt）,敲除调节蛋白PurR,工程菌N12’摇瓶发酵可积累0.34 g/L的β-NMN;此后,比对筛选发现Comamonadaceae?bacterium来源的Nampt活性较高且对底盘细胞负担较小;通过进一步强化Bm PnuC和Prs的表达水平,工程菌N18摇瓶发酵β-NMN产量提高至1.36 g/L。最后,利用发酵罐分批补料发酵38 h,β-NMN产量达到10.2 g/L,NAM到β-NMN的摩尔转化...     

重组大肠杆菌全细胞催化合成NMN

基于前期研究构建的一株能以烟酰胺(nicotinamide,NAM)和葡萄糖为底物高产β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)的大肠杆菌工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)-NF017,采用全细胞催化方式进行NMN合成。首先,在摇瓶水平上对菌株培养过程的发酵培养基类型、诱导温度和诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度,以及全细胞催化过程的反应体系初始pH、反应温度和底物NAM与葡萄糖的添加比例（质量浓度比）进行了优化,在最优条件下,NMN的生成量（质量浓度）达1.84 g/L。为了进一步提高NMN的生成量,在5 L发酵罐上对全细胞催化过程中溶氧水平和底物NAM的流加方式进行控制和优化。最终,应用恒定速度流加NAM的补料模式,NMN的生成量提高至12.24 g/L,底物NAM的摩尔转化率达85.65%。该研究结果为应用全细胞催化法生产NMN提供了一定参考。     

基于双菌耦合发酵策略的烟酰胺单核苷酸合成

本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶（nicotinamideribosidekinase,NRK）和多聚磷酸酶（polyphosphatekinase,PPK）的双菌耦合发酵体系，实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）生产中的应用。首先分别构建表达NRK1和NRK2的工程菌株，筛选得到高活性的大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)-pET28a-NRK1,NMN产量5.17 g/L，产率77.4%；然后对NRK1的诱导表达条件进行优化，发现低温16℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷0.7 mmol/L、接种量3%、诱导时长22 h更利于蛋白的可溶性表达；进一步对E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1合成NMN的最优体系进行探索，发现在菌体质量浓度100 g/L、温度18℃、时间12 h、ATP与烟酰胺核糖（nicotinamide riboside,NR）浓度比1∶1.5时，NMN产量最高为5.73 g/L，产率85.78%；最后，通过对E. coli BL21(...     

在线稀释-离子色谱法测定造纸法烟草薄片中阳离子含量

本研究开发了一种采用定量环在线稀释-离子色谱法检测造纸法烟草薄片中Li+、Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+阳离子含量的方法，以外标法定量。在0.1 g样品用50 mL 0.01 mol/L盐酸水溶液室温振荡萃取30 min的条件下，检出限、定量限分别可达0.011～0.031μg/mL、0.034～0.094μg/mL，线性相关系数达0.998以上；日内重复性和日间重现性分别为2.14%～3.86%、2.57%～4.52%，表明该方法的重复性和重现性较好。在3种不同阳离子浓度下，加标回收率在95.8%～107.3%之间，相对标准偏差(RSD)在1.53%～4.51%之间。结果表明，此方式方便快捷，适用于大通量检测，检测结果准确度明显优于人工稀释方式，且精密度提升明显。经检验，不同造纸法烟草薄片样品中所含阳离子的种类存在差异，且含量差异较大。     

核磁共振磷谱法测定乳制品中的酪蛋白含量

基于插值法建立乳制品中酪蛋白的核磁共振磷谱定量检测方法。结果表明，该方法的检出限为0.38 g/L（信噪比（RSN）=3），定量限为1.25 g/L（RSN=10）；在5.00～35.00 g/L质量浓度范围内线性良好，相关系数R2大于0.999；加标回收率在91.94%～105.10%范围区间；日内精密度在0.65%～1.40%范围区间；日间精密度在1.40%～1.80%范围区间。对市售不同乳制品中酪蛋白含量进行检测，该方法与GB 31638—2016《酪蛋白》测定结果误差在±5%以内，满足方法可行性对比分析验证要求。该方法相比常规方法样品前处理简单、定量准确性高，大大缩短了检测时间，且有更广泛的适用性，满足乳制品中酪蛋白快速定量检测的要求。     

烟酰胺单核苷酸功能研究进展

近年来，烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide mononucleotide,NMN)已经成为热门的保健品原材料，其延缓衰老、治疗糖尿病、治疗神经性疾病等有益生理功能引起了人们的广泛关注。NMN在人体内通过合成辅酶I(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD⁺)来发挥相应的生理功能。NMN可以有效提高人体内NAD+的含量，目前的研究尚未发现NMN有较强的毒理性质。文章较为系统地总结了NMN的作用机制、功能研究进展、食用安全性和生物利用度，旨在为进一步研究NMN的生理功能提供参考。     

核磁共振磷谱定量测定肉制品中磷酸盐的含量

建立了核磁共振磷谱（31P-qNMR）技术快速定量测定肉制品中磷酸盐含量的方法。样品采用碱性缓冲盐振荡提取2次,离心过膜后,以六甲基磷酰三胺为内标进行定量分析。结果表明:该方法加标回收率为97.0%～112.0%,相对标准偏差0.87%～3.15%。日内精密度为0.68%～3.55%,日间精密度为1.12%～4.51%,对市售肉制品中磷酸盐含量进行检测,核磁共振法测定结果准确,与离子色谱法无显著性差异（P>0.05）。该方法无需复杂的前处理操作,节约时间,定量准确,为肉制品中磷酸盐的定量测定提供了一种快速的新颖的方法。     

基于核磁共振法测定运动膳食补充剂中4种苯乙胺类物质

通过核磁共振技术鉴定和检测运动膳食补充剂中4种主要苯乙胺类物质,该研究不需要色谱预处理即可在20种运动膳食补充剂中检测出苯乙胺、辛弗林、甲基辛弗林和大麦芽碱。此外,还建立并验证同时多重检测4种苯乙胺类物质浓度的核磁共振定量方法。研究表明,核磁共振可以作为鉴定和检测营养补充剂中物质成分的有效手段。     

HPLC-MS/MS同时检测大鼠体内三聚氰胺和三聚氰酸含量

目的建立HPLC-MS/MS同时检测大鼠血浆和组织中三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法。方法以同位素标记的三聚氰胺和三聚氰酸作为内标物,大鼠血浆和组织经二氯甲烷-乙腈前处理后,经色谱柱分离,串联离子阱质谱采用ESI源按运行时间段切换正、负离子模式进行测定。结果在0.3～75μg/ml范围内,三聚氰酸和三聚氰胺具有良好的线性(r≥0.998)。在0.9、5.0、50μg/ml的给药大鼠的血浆样本中,三聚氰酸和三聚氰胺的回收率分别为97.4%～99.4%、96.8%～98.9%,两者的变异系数为2.43%～6.35%(日内)、1.70%～4.12%(日间)和0.30%～9.17%(日内)、0.75%～3.39%(日间);在0.9、5.0、50μg/ml的给药大鼠肝组织样本中,三聚氰酸和三聚氰胺的回收率分别为90.8%～104.6%、91.7%～106.0%,对应的变异系数为3.70%～5.14%(日内)、2.84%～4.50%(日间)和1.31%～2.21%(日内)、1.12%～3.36%(日间)。结论该方法样品前处理简单,基质干扰小,分析效率高,具有良好的精密度、准确度和特异性,是进行三聚氰酸、三聚氰胺在动物体内的组织代谢和毒性研究的理想分析方法。     

核磁共振氢谱定量检测3 种食用菌麦角固醇

选择C-18H质子单峰作为麦角固醇的目标定量特征峰，氘代氯仿作为溶剂、吡嗪作为内标物，建立3 种食用菌麦角固醇的定量检测方法。通过优化采样参数、采集时间、扫描次数和弛豫延迟时间核磁检测条件，确定δ 0.63处的质子单峰C-18H作为麦角固醇的目标定量特征峰；经方法学评价，在0.55～5.30 mg/mg范围内，回归方程线性关系良好，相关系数R2为0.999 7，检出限和定量限分别为0.001 8 mg/mL与0.045 0 mg/mL；平均加标回收率为103.491 9%，方法的精密度与稳定性相对标准偏差均小于2%，食用菌样品检测验证该方法专属性，表明建立的方法对3 种食用菌中麦角固醇定量检测具有快速准确的优势。     

NMR氢谱定量测定奶酪中总共轭亚油酸的含量

目的：建立用核磁共振定量法测定奶酪中总共轭亚油酸含量的方法,并与紫外分光光度法进行比较。方法：以1,2,4,5-四甲基苯为内标,采用5 mm BBO探头、脉冲序列noesyig1d、探头温度300 K、扫描次数128 次、脉冲延迟时间（D1）10 s。结果：该方法的加样回收率为93.33%,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为4.20%;精密度RSD为0.99%,重复性RSD为3.17%,稳定性RSD为1.81%。结论：该方法前处理简单,无需标准品做参比,在对目标物完成定性、定量分析的同时还可以实现对非目标物的定性分析。与紫外分光光度法相比,该方法具有更好的专属性。     

低场核磁共振法测定猪肉中脂肪含量

为避免索氏抽提法使用有机溶剂带来的环境污染与危害,提高猪肉中脂肪含量的检测效率,采用低场核磁共振技术研究测定猪肉中脂肪含量。首先优化回波时间、重复扫描次数等信号采集参数和样品质量、烘干时间、检测温度等样品相关参数,然后对方法重复性和精密度进行考察验证。结果表明,4 g肉糜烘干6 h,在检测温度50 ℃、回波时间0.3 ms、重复扫描次数64 次条件下,以纯猪油为标准样品,检测结果良好,标准曲线R2达到0.999 9,重复性相对标准偏差为1.69%～2.72%,日内、日间精密度分别为3.07%、2.57%。该低场核磁法与GB 5009.6—2016《食品中脂肪的测定》中索氏抽提法之间相关系数高达0.999 5。因此,该方法可用于猪肉中脂肪含量的准确定量,同时可为其他畜禽肉脂肪含量的测定提供参考。     

Certification of the reference material of water content in water saturated 1-octanol by Karl Fischer coulometry,Karl Fischer volumetry and quantitative nuclear magnetic resonance

Certified reference materials (CRMs) of water content are widely used in the calibration and validation of Karl Fischer coulometry and volumetry. In this study, the water content of the water saturated 1-octanol (WSO) CRM was certified by Karl Fischer coulometry, volumetry and quantitative nuclear magnetic resonance (Q NMR). The water content recovery by coulometry was 99.76% with a diaphragm-less electrode and Coulomat AG anolyte. The relative bias between the coulometry and volumetry results was 0.06%. In Q NMR, the water content of WSO is traceable to the International System (SI) of units through the purity of internal standard. The relative bias of water content in WSO between Q NMR and volumetry was 0.50%. The consistency of results for these three independent methods improves the accuracy of the certification of the RM. The certified water content of the WSO CRM was 4.76% with an expanded uncertainty of 0.09%.     

NMR State Diagram Concept

ABSTRACT:  This article introduces a new concept, the NMR (nuclear magnetic resonance) state diagram, in the context of food shelf-life stability as affected by the molecular mobility of the food matrix. Our literature review shows that some shelf-life–related changes cannot be explained or predicted by the current a _w and glass transition temperature concepts. This article presents the theoretical principles and some experimental evidence of the NMR state diagram concept that could be complementary to the a _w and glass transition concepts. An NMR state diagram is a curve of NMR relaxation time versus temperature. Some of the curve features were found to correlate highly to the physiochemical states and changes of food polymers, for example, caking, stickiness, and firming. The potential applications of this concept in quality and safety of food products, especially dry and intermediate moist foods, may include ingredients screening, prediction of physiochemical changes, chemical degradation, and microbiological activity. The goal concept of this article is to provoke more in-depth studies to analyze the relationships among NMR relaxation, molecular mobility, and stability of foods.