校园周边熟食中金黄色葡萄球的分离及肠毒素基因检测

了解校园周边熟食中金黄色葡萄球菌的污染及其肠毒素基因的分布情况。采集校园周边农贸市场及其路边小摊的熟食样品89份,采用国家标准GB4789.10-2016和PCR方法进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌株进行21种肠毒素基因检测。结果表明共分离出71株金黄色葡萄球菌,样品中金黄色葡萄球菌的污染率为79.78%,其中,农贸市场和路边小摊的熟食污染率分别为80.70%(46/57)和78.12%(25/32);检测的21种肠毒素基因中,sec、see、seh、sel、sep和ses未检出,其他15种基因型被检出,包括3种传统肠毒素基因和12种新型肠毒素基因。71株金黄色葡萄球菌中,46株菌株检出携带肠毒素基因,检出率为64.78%(46/71)。46株携带肠毒素菌株中,sex检出率最高为86.96%(40/46),sei和sem为32.61%(15/46),sen和seo为30.43%(14/46),set为21.74%,seg为13.04%,sea、seb和ser为10.87%,sej和seu为6.52%,sek和seq为4.34%,sed为2.17%。通过本研究发现校园周边农贸市场及路边小摊的熟食中金黄色葡萄球菌污染率和肠毒素基因携带率均较高,新型肠毒素基因检测率高于传统肠毒素基因型,研究结果为金黄色葡萄球菌食品安全提供参考依据。     

婴幼儿奶粉和米粉中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒素基因检测

目的：了解婴幼儿奶粉和米粉中金黄色葡萄球菌的污染及其毒素基因的携带情况。方法：采集陕西省18个地区不同品牌的婴幼儿奶粉143份和米粉224份,按国标法和PCR方法进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;采用PCR方法检测ses基因、ets基因、tsst-1基因和pvl基因。结果：367份样品中检测出30个金黄色葡萄球菌污染样品,检出率为8.17%,其中奶粉11.19%(16/143)、米粉6.25%(14/224),分别从中分离鉴定出29株和25株金黄色葡萄球菌;从54株金黄色葡萄球菌中共检测到有64.8%(35/54)的菌株携带有毒素基因,其中奶粉72.4%(21/29)、米粉56.0%(14/25);奶粉分离株中检测到的毒素基因型有pvl、sea、seb、sed、seg、sea＋pvl、seb＋seg、seb＋sed＋seg、sec＋pvl、sec＋seg＋pvl和seg＋pvl,其检出率分别为10.3%(3/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、13.8%(4/29)和10.3%(3/29);米粉分离株中检测到的毒素基因型有pvl、sed、seg、sea＋seg＋pvl、sec＋pvl、sec＋seg、sec＋see＋seg、sec＋see＋seg＋pvl、see＋pvl和seg＋pvl,其检出率分别为8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)和12%(3/25)。奶粉和米粉中都没有检测到ets、tsst-1和seh、sei、sej基因。结论：婴幼儿奶粉和米粉中均存在一定程度的金黄色葡萄球菌的污染,且多数菌株都携带一定的毒素基因,这对消费这些产品的婴幼儿身体健康构成潜在的危险。     

PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。     

温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究

目的了解温州市食品中金黄色葡萄球菌的污染状况,分析分离的金黄色葡萄球菌的耐药性、毒力基因分布及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.10—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行菌株分离鉴定,采用纸片法进行药敏试验,mini-VIDAS法和聚合酶链式反应(PCR)法分别进行肠毒素及其基因的检测,PFGE法进行分子分型。结果 4类食品388份样品中有16份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为4.12%,其中生畜肉和生禽肉检出率较高,分别为13.89%(5/36)和11.11%(4/36)。所有菌株均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(100.00%,16/16),其次为红霉素(56.25%,9/16),多重耐药率为18.75%(3/16),未检出对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌肠毒素及其基因检测阳性率均为56.25%(9/16),其中seb、seg基因检出率较高,均为37.50%(6/16)。PFGE图谱分为12种PFGE带型。结论金黄色葡萄球菌在温州市食品中存在一定的污染率,且具有分子多态性、产肠毒素率及毒素基因携带率较高的特征,提示存在潜在的食品安全隐患。     

鲜湿米粉中金黄色葡萄球菌污染状况研究

监测市售鲜湿米粉中的金黄色葡萄球菌的污染情况,并进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA)鉴定和肠毒素分型,为预防湿米粉中金黄色葡萄球菌中毒及食品安全风险积累数据。监测结果为139份样品中有38个样品检出金黄色葡萄球菌。在分离出的38株分离株中,21株鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA),32株携带肠毒素基因。结果表明:湿米粉中金黄色葡萄球菌检出率高,菌株产肠毒素能力较强,存在的食品安全隐患不容忽视。     

广州市白云口岸航空食品中金黄色葡萄球菌凝固酶基因分型及肠毒素基因研究

目的对2013—2015年从广州市白云口岸航空食品中分离的金黄色葡萄球菌进行基因分型研究,为食源性金黄色葡萄球菌分子溯源提供基础数据。方法以血浆凝固酶和肠毒素为目标基因,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对9株金黄色葡萄球菌进行基因分型,其中6株为航空食品分离株,1株为配餐车间大门手拭分离株,2株为标准菌株。肠毒素基因检测包括5种传统肠毒素基因(sea、seb、sec、sed、see)和6种新型肠毒素基因(ser、seg、seh、sei、sej、sep)。结果 6株航空食品分离株的血浆凝固酶基因扩增分型结果为2个PCR型,酶切后得3种亚型;肠毒素基因检测结果显示有2株航空食品分离株含有肠毒素基因,检出率为33.3%(2/6),检出的基因为2种传统肠毒素基因(sec、sed)和4种新型肠毒素基因(ser、seg、sei、sej),均同时携带2种以上肠毒素基因。结论血浆凝固酶基因扩增分型结果显示,不同时间、不同采集地点存在相同的基因型,提示金黄色葡萄球菌存在交叉污染的可能性;航空食品分离株共检出6种肠毒素基因,提示金黄色葡萄球菌基因型多样性,应加强其他新型肠毒素基因检测。     

乳源凝固酶阴性葡萄球菌的PFGE分型及耐药性研究

对分离自隐性乳房炎乳样中的25株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,结果表明不同牛场流行的CNS种类和基因型有所不同,即使来自同一牛场的相同菌种也表现出完全不同的流行克隆型,证明了菌种基因型的多样性。MIC测定结果显示所有菌株都表现出三重以上耐药,且耐药程度高(36%~96%)。携带最多的耐药基因是erm C(96.55%)和tet K(89.66%)基因,然后是erm B(82.76%),tet M(82.76%),msr A(86.21%),msr B(82.76%)和lnu A(72.41%)基因,mph的基因含量最少,为41.38%。另外,本文还检测出4株mec A基因阳性菌株,即超级耐药菌——MRCNS。MTP和刚果红试验结果显示88%的菌株都具有产生物被膜的能力,并且其多重耐药性显著高于不产生物被膜的菌株。综上所述,目前,乳源及食品动物源细菌耐药形式极其严峻,多重耐药菌及耐药基因的传播,给食品安全及公众健康造成了巨大风险,急需出台一系列的用药规定,加大科研力度,研究安全、绿色、高效新药物。     

婴幼儿奶粉和米粉中蜡样芽胞杆菌及其毒素、毒力基因的调查研究

了解婴幼儿奶粉及米粉中蜡样芽胞杆菌污染状况及其毒素、毒力基因的携带特点。方法 采用稀释培养计数(MPN计数)法分离蜡样芽胞杆菌,采用PCR技术检测10种蜡样芽胞杆菌的腹泻毒素及呕吐毒素基因,在流动相A为0.1%甲酸-乙腈溶液,流动相 B为0.1%甲酸-0.2 mmol/L乙酸铵溶液条件下,用Acquity BEH300 C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)对样品进行分离,采用超高效液相色谱-串联质谱法检测样品中的呕吐毒素(cereulide)。结果 本研究共监测39份样品,28份检出蜡样芽胞杆菌,检出率为71.79%(28/39)；2份检出呕吐毒素,检出率为5.13%(2/39)。检出的蜡样芽胞杆菌菌株大多属于携带复合型毒素的菌株,均携带3种以上的腹泻毒素基因,非溶血性的肠毒素 nhe基因(nheA、nheB 和nheC)和肠毒素FM基因(entFM)为主要的毒力基因,其中nheABC 基因携带率为100%,entFM基因携带率为35.71%(10/28),cytK基因是检测到的最少的一种毒力基因。结论 应加强婴幼儿奶粉及米粉中的蜡样芽胞杆菌污染监测及其毒力基因致病性研究,以科学评估蜡样芽胞杆菌对婴幼儿食品可能构成的食品安全风险。     

加工环境中单核细胞增生性李斯特菌耐药特征分析

目的分析在流通过程中加工环境来源的食源性李斯特菌耐药性及耐药基因携带情况,探讨加工环境对该菌的影响。方法收集2016~2017年分离自加工环境中的71株单核细胞增生性李斯特菌,利用微量肉汤稀释法对8种抗菌药物进行药物敏感性分析,并采用PCR鉴定11种耐药基因(tet A、tet M、tet S、erm A、erm B、erm C、mec A、aac(6’)-Ib、van A、van B、cfr)。结果 71株Lm对庆大霉素(11.27%)、氨苄西林(4.22%)、头孢他啶(98.59%)、环丙沙星(97.18%)、四环素(21.12%)、红霉素(15.49%)、林可霉素(92.96%)均具有不同程度的耐药性,对万古霉素敏感。其中以耐受3~6种抗菌药为主,耐药情况较为严重。耐药基因检测表明四环素类tet A,tet M为主要耐药基因,检出率高达50%以上,其次为红霉素类erm A、erm B、erm C,检出率约11%,氨基糖苷类aac(6’)-Ib的检出率为5.63%。结论加工环境单核细胞增生性李斯特菌的耐药性呈上升趋势,其耐药表型与耐药基因型并不完全一致,从而表明加工环境中存在影响单核细胞增生性李斯特菌耐药性因素,同时为食源性李斯特菌病的防治及预警提供参考依据。     

鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌污染及耐药性和毒力基因分析

目的 了解鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌的检出情况、耐药性以及毒力基因分布特征。方法 从湖北省襄阳市、十堰市、随州市三地共采集303份食物样品进行金黄色葡萄球菌筛查,通过聚合酶链式反应(PCR)法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的鉴定和毒力基因检测,并用K-B纸片扩散法进行耐药性测定。结果 303份样品中共有41份检出金黄色葡萄球菌,阳性率为13.53%,其中生肉制品检出率最高(23.91%,22/92)。在产肠毒素菌株中以携带产肠毒素基因sea的菌株最多,占87.80%(36/41)。携带表皮剥脱素基因eta和中毒性休克综合征毒素基因tst的菌株分别占97.56%(40/41)和7.32%(3/41)。同时携带3种及以上肠毒素基因的菌株占17.07%(7/41)。同时含有eta和tst的菌株占2.44%(1/41)。药敏结果显示,分离菌株对青霉素、四环素、红霉素和多西环素的耐药率分别为78.05%(32/41)、43.90%(18/41)、31.71%(13/41)和21.95%(9/41),对其他8种抗菌药物的耐药率均<20%。mecA基因检测表明,19.51%(8/41)的菌株为MRSA,且7株MRSA菌株来源于生肉制品和未加调料的素卤菜。结论 鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌具有较高的检出率,而且产毒株较多,并且存在多重耐药现象,相关部门需加强食品安全监测以控制该菌株的流行与扩散。     

Characterization of Staphylococcus aureus isolated from powdered infant formula milk and infant rice cereal in China

Dry infant foods are not sterile and could be contaminated with various bacteria including certain pathogens. The aim of this study was to investigate the prevalence of Staphylococcus aureus in infant foods and to characterize these strains. A total of 367 infant food samples, including 143 samples of powdered infant formula milk (PIF) and 224 samples of infant rice cereal (IRC), were collected in the Shaanxi Province of China during the period of July to August 2010 and screened for S. aureus. All S. aureus isolates were characterized by antimicrobial susceptibility testing, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), and detection of genes encoding enterotoxins, exfoliative toxins, Panton-Valentine leukocidin (PVL), and toxic shock syndrome toxin 1. Among all the samples examined, sixteen of 143 PIF samples (11.2%) and 14 of 224 IRC samples (6.3%) were positive for S. aureus. From these positive samples, 29 S. aureus strains were isolated from PIF and 25 from IRC. Of these S. aureus isolates, 83.3% were resistant to at least one antimicrobial, 35.2% to three or more antimicrobials. Resistance was most frequently observed to erythromycin (75.9%), followed by ciprofloxacin (51.9%) and trimethoprim/sulfamethoxazole (27.8%), while significantly fewer isolates were resistant to gentamicin (22.2%), tetracycline (18.5%), or cefoxitin (3.7%). In addition, 63.0% of isolates were positive for one or more toxin genes tested. The three most predominant toxin genes were pvl (40.7%), seg (38.9%), and sec (18.5%), followed by sea (7.4%), seb (7.4%), sed (5.6%), and see (5.6%). The ets, tsst-1, seh, sei, and sej genes were not detected. A total of 39 PFGE patterns were generated among 51 selected food isolates. Our findings indicate that PIF and IRC in the Shaanxi province were contaminated with S. aureus, and many S. aureus isolates harbored multiple toxin genes and exhibited multiple antimicrobial resistance. In addition, these S. aureus isolates were genetically diverse. The presence of S. aureus strains in these infant foods poses a potential threat to infant health.     

2009—2018年广州市即食食品中金黄色葡萄球菌污染情况和菌型特征

目的 分析2009—2018年广州市零售即食食品中金黄色葡萄球菌污染情况,以及菌株肠毒素基因、耐药表型特征。方法 从广州市辖11个区的农贸市场、超市随机购买零售即食食品,增菌后分离金黄色葡萄球菌。对所有菌株进行多位点序列分型(MLST)、抗生素敏感性试验,并检测24种肠毒素基因。对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体盒(staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)分型。结果 2009—2018年广州市采集的1 399份即食食品中共分离出157株金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)(检出率为11.22%),其中熟猪肉中金葡菌检出率(17.95%)相比非熟肉食品中金葡菌检出率(9.43%)差异有统计学意义(P<0.001);抗生素敏感性检测结果显示7株金葡菌为MRSA,检出率为0.5%;157株金葡菌对青霉素的耐药率高达83.43%,其次是四环素(55.41%)、红霉素(41.40%)、氯霉素(29.30%)、克林霉素(21.02%)、复方新诺明(20.40%)及庆大霉素(14.01%);对环丙沙星、苯唑西林及头孢西丁的耐药率均≤10.0%,对万古霉素、达托霉素、利奈唑胺均敏感。即食食品中优势克隆复合体(CC)为CC59(25.48%),其次为CC6(17.83%)、CC398(10.83%)。菌株特征分析结果发现对3种或3种以上抗菌药耐药的菌株占比,CC59和CC398大于CC6(P<0.001),而所有CC6菌株都携带seg, sei, sem, sen, seo及seu,远高于CC59(P<0.001)。结论 广州市即食食品中的优势菌群是CC59、 CC6和CC398,这3种优势克隆群在国内临床患者和食物中毒分离株中也很常见,需要公共卫生部门引起重视,加强对市售即食食品中金葡菌的监测。     

肉鸡屠宰环节中金黄色葡萄球菌的流行及分子特征和耐药性

为探究肉鸡屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌的污染关键环节及菌株的分子特征和耐药性,对陕西省某肉鸡屠宰场5 个屠宰环节（活鸡肛拭、浸烫、预冷、分割和贮存）进行4 次样本收集。通过选择培养和聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增nuc基因对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定。然后对分离株进行23 种毒素编码基因、27 种耐药基因、16 种抗生素耐药性及葡萄球菌蛋白A（staphylococcal protein A,SPA）、多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）和肠杆菌科基因间重复序列PCR（enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR,ERIC-PCR）分型检测。结果表明,收集的144 份样本中有32 份样本被污染（22.2%,32/144）。除活鸡肛拭样本无检出外,其余环节样本均有检出。其中浸烫褪毛环节污染率最高（40.0%,12/30）,其次为分割环节（26.7%,8/30）、预冷环节（21.9%,7/32）和贮存环节（15.6%,5/32）。23 种被检毒素编码基因中16 种毒素编码基因被检出,其中pvl、seb、sek、seg、sei、sem、sen、seo、seu、sep和seq基因常被检出,且96.9%（31/32）的分离株携带新型肠毒素编码基因。27 种被检耐药基因中仅有4 种耐药基因被检出,包括blaZ、tet(K)、erm(B)和aac(6’)/aph(2’’)。16 种所测试抗生素中,菌株对7 种抗生素表现为耐药,其中对甲氧苄啶/磺胺甲恶唑耐药最为普遍,其次为氨苄西林、青霉素、四环素、环丙沙星、红霉素和庆大霉素。所有分离株共有5 种克隆型（ST7-t091、ST5-t010/t002和ST59-t437/t441）和4 种ERIC-PCR聚类簇（I1～I4）。不同批次样品分离株中存在相同ERIC-PCR图谱、分子型、耐药谱、毒素和耐药基因。结果表明,肉鸡屠宰过程中普遍存在金黄色葡萄球菌污染。且不同环节存在交叉污染现象,其中浸烫被认为是受污染的关键环节。研究还发现,分离株携带肠毒素编码基因与分子型有显著相关性（P＜0.05）。通过对不同环节的监测,有助于识别加工环节污染的关键控制点,可以有效预防及控制食源性疾病的暴发。     

市售凉皮中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因、耐药特征检测及SPA分型

为监测并研究凉皮中金黄色葡萄球菌的污染情况,选取连锁超市、流动摊点、小餐馆和学校餐厅4?种销售渠道,在陕西杨凌地区进行为期一年的凉皮跟踪采样,共得样本432?个,金黄色葡萄球菌检出率为24.3%（105/432）。检测sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej?9?种肠毒素基因,sea携带率最高为96.2%（101/105）,see次之为64.8%（68/105）,还有部分seb和sec检出,检出率分别为54.3%（57/105）和49.5%（52/105）,seh检出率为1.0%（1/105）,sed、seg、sei、sej的检出率则均为0.0%（0/105）。研究针对青霉素、氨苄西林和苯唑西林等14?种常见药物进行耐药性实验,105?株来自阳性样本的金黄色葡萄菌全部具有耐药性,对青霉素和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑耐受率为100.0%（105/105）,对头孢哌酮、环丙沙星、万古霉素和阿米卡星均敏感。此外,多重（n≥3）耐药率高达90.5%（95/105）,表型为青霉素-氨苄西林-甲氧苄啶/磺胺甲恶唑-阿莫西林/克拉维酸的耐药率最高,为61.9%（65/105）。检测105?株金黄色葡萄球菌的SPA型别,共包括4?种结果,优势型别为t701（81.9%,86/105）,其次是t441（16.2%,17/105）,t127和t796占比最少均为1.0%（1/105）。最终,发现该地区所售凉皮除学校餐厅外,其余3?种销售渠道的检出率均较高,且菌株具有较高的肠毒素基因携带率和耐药性,优势SPA型别为t701和t441,为相应监管部门提供一定理论指导。     

市售猪肉金黄色葡萄球菌的分离及菌株耐消毒剂基因的检测

研究市售猪肉源金黄色葡萄球菌的污染情况,测定季铵盐类消毒剂对分离菌株MIC范围,以及耐消毒剂基因携带情况。采集春夏季与秋冬季市售生猪肉样品576份,采用肉汤稀释法测定苯扎溴铵对分离菌株的MIC,采用PCR技术对分离菌株5种耐消毒剂相关基因(qacA/B、qacC/D、qacG、qacH、qacJ)进行检测。576份样品中分离得到297株金黄色葡萄球菌,总分离率为51.56%;其中,春夏季样品374份,分离出158株;秋冬季样品202份,分离出139株。苯扎溴铵对分离菌株的MIC在0.00125~0.01μg/mL,297株中168株检出携带耐消毒剂基因,总检出率为56.6%,qacA/B、qacC/D、qacG、qacH、qac J的检出率分别为2.36%、19.86%、40.74%、6.73%、0.67%。结果表明猪肉源金黄色葡萄球菌的分离率和菌株消毒剂抗性基因携带率较高,猪肉中分离的金黄色葡萄球菌对季铵盐类消毒剂敏感。本研究为市售猪肉金黄色葡萄球菌的防控及消除提供参考。     

金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因分布及分型研究

目的 对2006-2009年上海市Staphylococcus aureus(S.aureus)食品分离株进行肠毒素基因检测和基因分型研究,以了解肠毒素基因的分布规律及S.aureus的流行特点.方法 利用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因,包括5种传统肠毒素基因(SEA-SEE)和4种新型肠毒素基因(SEG-SEJ);利用脉冲场凝胶电泳法对49株食品分离株进行基因分型.结果 本研究发现49株食品分离株中有19株含有肠毒素基因,16株含有传统肠毒素SEA和SEC,且SEC占93.8％,并检测到新型肠毒素SEG、SEI、SEJ和SEH.PFGE法基因分型显示5株菌不能被分型,其余44株可分为28个基因型,表现为基因型的多样性,且分离自不同时间的菌株具有相同的带型.结论 应加强食品中S.aureus的监测分析,为其引起的食物中毒的预防和控制提供科学依据.     

Occurrence and characterization of Staphylococcus aureus isolated from raw milk for cheesemaking

Fifty-four samples of raw milk for cheesemaking were tested for the presence of Staphylococcus aureus . Multiplex polymerase chain reactions were performed to identify presumptive isolates and the presence of enterotoxin-coding genes sea-see . The strains were tested for antibiotic resistance. Eighty strains were identified as S. aureus and 31 of these carried one or more enterotoxin genes ( sea-see ). Resistance to eritromycin, penicillin and ampicillin was widespread among isolates . Staphylococcus aureus in raw milk for cheesemaking may constitute a risk with respect to staphylococcal food poisoning from raw milk products.     

牛奶源金黄色葡萄球菌血清型、毒力基因及PFGE分型

目的：研究生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌分离、荚膜多糖血清型分布、毒力基因携带及脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）分型情况。方法：从河南省4?个地区奶牛养殖场采集生鲜牛奶样品按照国标法进行分离,扩增耐热核酸酶基因nuc鉴定金黄色葡萄球菌,利用聚合酶链式反应方法测定荚膜多糖血清型和毒力基因携带情况,采用PFGE分析菌株间的相关性和遗传关系。结果：从350?份生鲜牛奶样品中分离鉴定到80?株金黄色葡萄球菌,分离率为22.86%。荚膜多糖血清型测定发现,cap5（60%）是流行血清型。从这些阳性菌株中,发现有62?株（77.5%）携带有毒力基因,毒力基因set、hlb、hld、lukED、ebp、clfA和clfB,检出率分别为40.00%、51.25%、57.50%、60.00%、58.75%、57.50%和58.75%。此外,47?株（58.75%）菌携带不少于6?个毒力基因,流行的毒力基因谱型为set-hla-hlb-hld-lukED-cna-ebp-clfA-clfB。PFGE结果显示,获得72?株菌的PFGE图谱,按90%的相似性可分为12?个簇和46?种PFGE型。D簇（3?种PFGE型）、G簇（3?种PFGE型）和J簇（5?种PFGE型）菌株中均检出一定基因类型的毒力基因,表明河南地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌毒力基因广泛存在于多种PFGE型别中。结论：生鲜牛奶均有一定程度的金黄色葡萄球菌污染,多数菌株携带毒力基因,且毒力基因的类型较为复杂,这对消费这些牛奶的人群构成潜在的健康威胁。PFGE分型菌株主要以克隆形式进行传播,且克隆型具有多样性和差异性,故临床应加强生奶及乳品血清型、毒力基因检测及分子分型研究。     

Characterization of Staphylococcus aureus isolates from white-brined Urfa cheese

The aim of this study was to investigate the presence of Staphylococcus aureus and staphylococcal enterotoxin (SE) genes in Urfa cheese samples and to characterize the enterotoxigenic potential of these isolates. From a total of 127 Urfa cheese samples, 53 isolates (from 41.7% of the samples) were identified by a species-specific PCR assay as S. aureus. Of these isolates, 40 (75.5%) gave positive PCR results for the 3' end of the coa gene. The coa-positive S. aureus strains were characterized for their population levels and enterotoxigenic properties, including slime factor, β-lactamase, antibiotic susceptibilities, production of the classical SEs (SEA through SEE), in both cheese and liquid cultures by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and for the presence of specific genes, including classical SE genes (sea through see), mecA, femA, and spa, by PCR. The genetic relatedness among the coa-positive S. aureus isolates was investigated by PCR-based restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis and the 23S rRNA gene spacer. The 23S rRNA gene spacer and coa RFLP analysis using AluI and Hin6I revealed 14 different patterns. SEB, SEC, and SEA and SEE were detected by ELISA in three cheese samples. Fourteen S. aureus strains harbored enterotoxin genes sea through see, and three strains carried multiple toxin genes. The most commonly detected toxin gene was sec (25% of tested strains). Of the 40 analyzed S. aureus strains, 3 (7.5%) were mecA positive. Based on tandem repeats, four coa and spa types were identified. The results of this study indicate that S. aureus and SEs are present at significant levels in Urfa cheese. These toxins can cause staphylococcal food poisoning, creating a serious hazard for public health.