基于PCR-DGGE技术的四川麸醋固态发酵过程中微生物群落分析

为了解四川麸醋固态发酵过程中微生物群落变化规律,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术对其固态发酵过程中真菌和细菌的多样性进行分析。结果表明,四川麸醋固态发酵过程中优势真菌主要有酿酒酵母(Sac.cerevisiae)、扣囊复膜孢酵母(Sac.fibuligera)、伊萨酵母(Iss.hanoiensis)、黑曲霉(Asp.niger)、草青霉菌(Pen.oxalicum)以及不可培养真菌(Uncultured fungus);主要细菌有嗜酸乳杆菌(Lac.acidophilus)、葡萄糖醋杆菌(Glu.oboediens)、巴氏醋杆菌(Ace.pasteurianus)、甲醇酸单胞菌(Aci.methanolica)、不可培养细菌(Uncultured bacterium)、不可培养芽孢杆菌(Uncultured Bacillus sp.)和不可培养乳杆菌(Uncultured Lactobacillus sp.)。PCR-DGGE技术可鉴别醋醅中多种不可培养微生物,四川麸醋固态发酵过程优势微生物种类多、丰度高,菌系十分复杂,多种微生物交替生长,但整体群落结构变化不明显。     

普洱茶发酵产茶多糖菌株的筛选与鉴定

以不同阶段的普洱茶发酵样为实验材料进行真菌的分离纯化,将分离纯化出的优势真菌在理想条件下和自然状态下分别进行茶叶接种发酵,筛选出产茶多糖的优势菌。结果表明,在普洱渥堆发酵中共分离纯化出22株菌株,其中5株菌株在渥堆发酵的不同阶段频繁检出,可用于接种发酵实验。在接种发酵中,茶多糖均有显著增加(p0.05)。其中PEZJ-1菌株提高茶多糖含量最为显著,在理想条件下和自然状态下的接种发酵中茶多糖含量分别达到23.57%和27.85%。通过菌落形态、分生孢子显微特征、18S r DNA序列,对PEZJ-1进行鉴定,确定该菌株为Aspergillus niger(Gen Bank登录号为JX863374),属于曲霉属。在普洱茶渥堆发酵中接种外源微生物能显著提高茶多糖含量,Aspergillus niger能大幅度提高茶多糖含量,为茶多糖的开发应用提供了微生物菌种。     

鸡血发酵工艺条件的优化

以鸡血为原料,利用从发酵鸡血中筛选出的优势菌株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、希瓦氏菌(Shewanella sp.)、青霉菌属(Penicillium citreonigrum)和塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)发酵鸡血液体肥料,以游离氨基酸态氮含量为评价指标,采用单因素试验和响应面优化试验确定鸡血发酵的最佳工艺条件。结果表明:根据所建立模型得到发酵鸡血的最佳工艺条件为摇床转速160 r/min、接种量10%、培养温度32℃、培养时间5 d,在此条件下发酵鸡血中的游离氨基酸态氮含量最高。     

黑曲霉HS-5高产β-葡聚糖酶发酵条件的优化

利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定酶活,优选黑曲霉(Aspergillus niger)HS-5发酵产β-葡聚糖酶的发酵条件。在单因素试验的基础上,采用中心组合试验原理设计响应面法优化工艺条件,得到最佳发酵条件为接种量3.11%,初始p H值为6.09,发酵时间60.02 h。在此最佳条件下,测得β-葡聚糖酶的酶活力为20.03 U/m L,比初始酶活力12.98 U/m L提高了154%。     

柿子原浆果醋加工工艺研究

对柿子原浆果醋的加工技术进行了研究,并分析了柿果醋加工过程中酒精、糖及醋酸含量的变化规律.结果表明:在柿果浆加水量为30%的条件下,酒精发酵的工艺参数为酵母菌接种量0.1%,发酵温度30℃,发酵周期4 d;醋酸发酵的工艺参数为发酵温度34℃、醋酸菌接种量为0.5‰,每天搅拌3次.使用该技术生产的柿果醋风味良好,具有一定保健功能.     

柿子果酒的酿造技术研究

研究以柿子为原料酿造生产柿子果酒,采用冷冻法保藏柿子,温水脱涩后加纯净水打浆,用0.8 mL/L液体果胶酶酶解,压榨制得柿子汁,用山楂浆调整酸度。针对柿子果酒甲醇超标的问题,采用脱甲醇后发酵技术,将柿汁泵入循环脱气系统中,在65℃、-0.08 MPa条件下处理5 h～8 h,得除醇柿汁。选取安琪酵母RV171、酵母1450、安琪酵母BV818发酵柿汁做对比,发酵结束后测酒度、残糖。结果表明:对柿汁的发酵能力为安琪酵母BV818酵母1450安琪酵母RV171。选取安琪酵母BV818作生产用菌种,最佳工艺为:发酵温度为26℃、接种量8%、pH4.0、SO_2添加量为80 mg/L。     

利用麸皮和木薯渣生产饲用木聚糖酶的黑曲霉固态发酵条件优化

利用产木聚糖酶的黑曲霉(Aspergillus niger)GXH-1菌株对木薯渣和麸皮发酵,通过单因素和响应面试验优化产酶条件。最佳发酵条件为15.99%的木薯渣与84.01%的麸皮组成发酵基料;以1.60%的(NH_4)_2SO_4为氮源;含水量为56.27%,KH_2PO_4和NaOH质量分数分别为0.12%和0.20%,接种量为4.0%;36.23℃发酵68h。在此条件下,木聚糖酶酶活力最高为1 258.74U/g,是优化前的3.26倍,优化效果显著。     

基于高通量测序和可培养方法的勐海发酵普洱茶真菌多样性分析

通过高通量测序技术和传统可培养方法跟踪分析了勐海百中堂茶厂普洱茶发酵过程不同阶段的真菌多样性,采用多相鉴定方法准确鉴定了可培养真菌的分类学地位。可培养方法共分离到真菌107株,包括11个属,16个种,优势种为琉球曲霉(Aspergillus luchuensis)、新黑曲霉(Aspergillus neoniger)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、青霉(Penicillium sp.)、枝孢菌(Cladosporium sp.)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)、伞枝横梗霉(Lichtheimia corymbifera)、食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)、法布里德巴利酵母(Debaryomyces fabryi)、布兰克假丝酵母(Candida blankii)。高通量测序共分析到真菌69个属,189个OTU,优势属包括枝孢菌属(Cladosporium)、芽生葡萄孢酵母属(Blastobotrys)、假丝酵母属(Candida)。结果显示,普洱茶发酵过程中前期真菌多样性较后期高,研究结果为发酵普洱茶微生物安全性评价及功能性分析奠定了基础。     

基于培养鉴定法和高通量测序技术分析郫县豆瓣微生物群落结构演替

结合传统培养鉴定法和Illumina MiSeq测序技术分析郫县豆瓣不同发酵阶段的微生物群落演替。结果表明,辣椒发酵阶段细菌以Gracilibacillus sp.,Bacillus sp.,Staphylococcus sp.,Oceanobacillus sp.为主,真菌以Candidasp.,Zygosaccharomyces sp.,Aspergillus sp.为优势菌属;蚕豆发酵阶段具有较高的微生物菌落总数,混合发酵阶段展现了丰富的微生物多样性,这两个阶段细菌均以Bacillus sp.丰度最高,而真菌以Candidasp.,Zygosaccharomyces sp.为优势菌属。研究结果可为郫县豆瓣的控制发酵和品质提升提供科学支撑。     

响应面优化微泡菌ALW1产褐藻胶裂解酶的发酵条件

采用单因素和响应面法对产褐藻胶裂解酶菌种Microbulbifer sp.ALW1发酵产酶的培养条件进行优化.通过单因素实验,得到发酵条件如下:培养基初始pH 7.5,接种量5％,装液量50 mL,温度25℃,最大酶活力达到117.1 U/mL.在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken设计和响应面分析,得到最佳的发酵培养条件:培养基初始pH 8.0,接种量6.5％,装液量50mL,温度23℃,褐藻胶裂解酶活力达到130 U/mL,比基础培养条件下提高16.5％.     

丝状真菌发酵对小麦营养成分及抗氧化活性的影响

研究两株丝状真菌(米曲霉和黑曲霉)发酵对小麦营养成分及抗氧化性的影响,通过测定发酵小麦中还原糖、氨基酸、总酚和总黄酮含量,发现两株丝状真菌均能显著提高小麦中还原糖、氨基酸、总酚和总黄酮含量,并且黑曲霉发酵小麦中可滴定酸含量也显著增加,而米曲霉发酵小麦中可滴定酸并没有显著变化。利用氧化自由基吸收能力(ORAC)方法对发酵过程中抗氧化性变化的研究发现,两株真菌发酵后,均能显著提升小麦的抗氧化性。因此发酵小麦相对未发酵小麦具有更好的营养价值。     

双菌种酿制酱油工艺研究

通过对采用3.042米曲霉和AS 3.350黑曲霉混合发酵酿制酱油工艺的研究,结果表明:80%沪酿米曲霉和20%AS 3.350黑曲霉混合发酵可使成品酱油中的谷氨酸含量提高30%,原料全氮利用率及氨基酸生成率也有所提高,而且色香味也均比单一米曲霉制曲发酵的酱油好.     

加饭酒大罐发酵过程中真菌群落的动力学研究

采用分离培养法和基于核糖体RNA基因间隔序列的RISA图谱分析技术,研究了绍兴加饭黄酒大罐发酵过程中醪液内真菌群落的动力学变化及所含真菌群落情况。研究结果显示,发酵醪液中共涉及9属13种真菌。它们分别是犁头霉属(Absidiasp.),根毛霉属(Rhizomucor variabilis),曲霉属(Aspergillus oryzae,As-pergillus niger,Aspergillussydowii,Emericellanidulans),青霉属(Penicilliumcitrinum),伊萨酵母属(Issatch-enkia orientalis),毕赤氏酵母属(Pichia anomala,Pichia burtonii),酵母属(Saccharomyces cerevisia),红酵母属(Rhodotorula mucilaginosa),念珠菌属(Clavisporalusitaniae)。其中犁头霉、米曲霉属和异常毕赤氏酵母在整个发酵过程中均出现,既是发酵投料时的原始菌群,也是发酵醪液中的主要菌群。酿酒酵母和黏质红酵母在发酵前期含量较少,在中后期数量逐渐增多,并成为发酵醪液中的优势菌群。     

柿果黑腐病发病情况调查及病原菌的分离鉴定

2010年8月-2012年10月对上海市售的产自广西桂林、江苏东台、广东、山西和浙江杭州的柿子进行调查,发现所有产地的柿子均存在“果肉颗粒状黑腐”或“果顶黑腐”的症状。运用扫描电镜观察,可见果肉黑腐颗粒严重木栓化,部分颗粒有大量菌丝,果顶黑腐组织中均含有大量菌丝。对病害组织进行病原菌的分离,结果显示各个批次柿子果肉中的黑腐颗粒均可分离出枝孢属真菌,检出率达41.27%,应是引起果肉颗粒状黑腐病的重要原因之一。依据柯赫氏法则对果顶黑腐组织中分离到的真菌进行有伤接种鉴定致病性,得到一株致病性最强的病原真菌,应用形态学和真菌rDNA ITS序列分析及多聚半乳糖醛酸酶基因序列分析,确定其为细极链格孢菌（Alternariatenuissima）,为引起柿子果顶黑腐病的重要原因。     

黑曲霉发酵副产物中营养成分分析

为了再利用黑曲霉发酵生产阿魏酸酯酶和阿拉伯木聚糖酶的副产物,通过评价麦麸、玉米麸皮和蔗渣发酵副产物的营养价值,从而探讨它们作为饲料的可行性。研究了硝酸钠、硫酸铵和碳酸铵等氮源对黑曲霉固体发酵所得的水提液和残渣中的可溶性固形物、阿魏酸、低聚糖、氨基态氮、核黄素和蛋白质含量的影响。结果表明,黑曲霉在以麦麸为原料的培养基上生长良好,且以硝酸钠为无机氮源发酵所得水提液的营养价值最佳,但蛋白质含量却比未发酵麦麸减少了36%。另外,蔗渣发酵后其核黄素和蛋白质含量却大大增加,分别是原料的50倍和2.5倍,但在玉米麸皮发酵产物中增加的幅度不大。     

Enhanced antioxidative activity of soybean koji prepared with various filamentous fungi

In the present study, soybean koji fermented with various GRAS filamentous fungi, including Aspergillus sojae BCRC 30103, Aspergillus oryzae BCRC 30222, Aspergillus awamori, Actinomucor taiwanensis and Rhizopus sp. These organisms are commonly used as starters in the fermentation of many traditional, oriental food products. The growth of starter organisms, total phenolic content, and antioxidative activities of the methanol extract of these kojis are compared with specific reference to alpha-diphenyl-2-picryl-hydrozyl (DPPH) radicals scavenging effects, Fe2+-chelating ability, and reducing power. Depending on starter organism, various extents of mycelia propagation (35.23-86.29 mg/g koji) were noted after 3 days of fermentation. Total phenolic content increased in soybean after fermentation. Koji also displayed enhanced antioxidative activates in comparison with the non-fermented soybean. Among the five kinds of koji tested, those fermented with Asp. awamori exhibited the highest levels of DPPH-free radicals scavenging activity, Fe2+-chelating ability and reducing power. The DPPH-free radicals scavenging activity and Fe2+-chelating ability of this soybean koji was ca. 8.9 and 6.7 fold that of the control. Analysis of the dose-response effect also revealed that before reaching a threshold point, there is a linear relationship between increases in antioxidative activity and increases in the concentration of the koji extract. These results show the potential for developing a healthy food supplement with soybean fermented by the GRAS filamentous fungi.     

人工发酵小麦酱生产工艺的研究

采用米曲霉、黑曲霉混合人工发酵小麦酱,通过单因素以及正交试验对影响小麦酱人工接种发酵工艺的因素,包括菌种接种量、食盐用量、发酵时间、发酵温度、乙醇用量进行优化筛选.最后确定最佳发酵工艺条件为:米曲霉和黑曲霉分开制曲,混合发酵,二者菌株添加比例为8∶1,接种量为0.3％,添加9％的食盐及0.5％的乙醇,在定期揿酱的前提下,28-40℃间歇式控温发酵35天;所得人工接种发酵产品氨基酸态氮值高,且感官评价较好,与传统自然发酵小麦酱风味相似.     

甜橙皮渣发酵蛋白饲料的研制

利用甜橙加工制汁后的废料———甜橙皮渣进行固态发酵制作蛋白质强化饲料。通过对发酵饲料样品的相关营养成分分析测定等方式筛选菌种、优化发酵条件,即经过单菌试验初步筛选出5株优良菌种,进行3种菌的混合固态发酵,找出适宜该皮渣发酵的优势菌种组合,并对发酵条件进行了优化设计,结果为:添加15%左右的麸皮;在温度29℃左右,pH自然下培养4~5d;混菌接种比为黑曲霉(2281)∶康宁木霉(13016)∶产朊假丝酵母(1807)=1∶2∶3。该饲料样品的粗蛋白含量比相应对照高出近80%,是纯皮渣对照样粗蛋白(绝干含量)的3~4倍。此强化蛋白饲料未添加任何无机物或有机氮,全天然,无污染。     

真菌发酵预处理麻疯树籽高效提油初步研究

利用真菌固液态发酵麻疯树籽,通过测定还原糖和氨态氮含量变化,判断真菌对营养成份利用情况与油脂提取效果关系。实验结果表明,经黑曲霉固液态发酵预处理麻疯树籽在发酵48 h得到最大提油量,分别为32.75%(w/w)和31.95%(w/w),比对照组(27.5%,w/w)分别提高19.1%和16.2%;补充适量葡萄糖后有利于提高提油量,经黑曲霉固液态发酵预处理麻疯树籽都在发酵72 h后达最大提油量,分别为35.75%(w/w)和34.65%(w/w),比对照组(27.5%,w/w)分别提高30%和26%。经实验,黄曲霉不适于麻疯树籽发酵,发酵后提油效果没明显提高。     

广东陈香茶渥堆发酵过程中优势微生物群系的演变

对具有地方特色的黑茶品种——广东陈香茶渥堆发酵过程中的优势微生物群系演化进行研究,结果发现其优势种群为黑曲霉(A spergillus niger)、灰绿曲霉(A.gloucus)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、根霉(Rhizopus sp.)和木霉(Trichoderma sp.).开潮渥堆开始发酵时,以产黄青霉为主,占47.9％～91.9％.黑曲霉繁殖迅速,在发酵中、后期其占绝对优势(83.1％～97.9％).开潮渥堆时茶堆的含水量对微生物种群演化有显著影响,当其含水量30％～35％时,黑曲霉和酵母的生长繁殖较含水量20％～25％时快.通过水分调控微生物群系,可以达到提高陈香茶品质的目的.