G-CSF促进造血功能恢复及其机理的研究

研究了粒细胞集落生长因子（Ｇ－ＣＳＦ）受辐射小鼠造血功能恢复的作用，并对机理进行了实战探讨。结果表明：Ｇ－ＣＳＦ不仅可以促进受辐射小鼠外周血细胞的恢复，促进脾脏内源性脾结节的形成，而且可以增加骨髓细胞含量和促进骨髓细胞巨噬系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的形成，提高受辐射小鼠的生存率，其促进辐射后机体造血功能恢复的机理是通过刺激照射后残余造血干细胞的增殖、分化，该过程需要一段较长的时间，而不是抑制照射     

胎肌条件培养液对急性辐照小鼠造血损伤的防护和促恢复作用研究

观察了人胎肌条件培养液（ＦＭＣＭ）对６．５Ｇｙ６０Ｃｏ亚致死量照射小鼠造血损伤的保护和促恢复作用。结果证明：照射前小鼠腹腔注射ＦＭＣＭ２．５～５．０ｍｌ／ｋｇ·ｄ×５ｄ，能有效地预防和延缓因辐射所致的造血于细胞（ＣＦＵ－Ｓ）和外周血细胞的降低，照射后给予同样剂量的ＦＭＣＭ，对辐射所致的小鼠外周血细胞的减低有明显的促恢复作用，能显著促进辐射损伤小鼠的髓外造血重建。表明ＦＭＣＭ对照射造成的造血损伤具有良好的保护和治疗作用。     

小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对受致死剂量照射小鼠造血重建的影响

为观察小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）及骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）混合输注对受致死剂量照射 小鼠造血重建的影响,给予受致死剂量照射的 Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠输注同基因 ＢＭＣ１×１０７个及经体 外扩增的同基因原代 ＢＭＳＣ ２×１０５个,并与单纯骨髓移植组进行了比较。结果表明,移植后第 １４天外周血白细胞、血小板回升较快,第 １５天、第 ２０天粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系 祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、 ＣＦＵ－Ｅ）、造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）明显高于后者,第 ２０天已达正常。说明原 代ＢＭＳＣ不仅可以移植,而且能够加快造血重建;提高移植效果。     

放射损伤对骨髓基质细胞支持小鼠粒-巨噬系祖细胞生长的影响

为阐明放射损伤时骨髓造血基质细胞支持粒－巨噬系祖细胞造血能力的变化。采用小鼠骨髓基质细胞体外融合培养和粒－巨噬系祖细胞集落（CFU－GM）培养法,观察5Gy照射对基质细胞支持小鼠CFU－GM生长的影响。结果表明,经5Gy照射后,骨髓基质细胞支持正常粒－巨噬系祖细胞造血的能力明显下降,以伤后3－5d最为显著,伤后10d仍未恢复至正常;当骨髓基质细胞和粒－巨噬系祖细胞均受到致伤因素作用时,照射组的CFU－GM形成能力下降更为明显,至正常对照组的10％以下。说明放射损伤后骨髓基质细胞的功能受到了不同程序的损伤,因此,在治疗由此所引起造血功能障碍的同时,应加强促进基质细胞修复的措施,可能会取得更满意的疗效。     

骨形成蛋白对小鼠造血型急性放射损伤治疗作用的研究

小鼠经^60Coγ射线6．5－7．5Gy照射后,分别于肌袋内植入纯化牛BMP,或腹腔内注入可溶性rhBMP-2m,或移植Pbk-hBMP-2/NIH3T3人腹腔内,观察动物的30d活存情况,并检测几种造血参数。结果表明,pbBMP（纯化牛骨形成蛋白）、hBMP-2m(重组骨形成蛋白－2多肽）Pbk-BMP-2/NIH3T3 cell line(PBKhBMP-2转基因细胞株）对小鼠6．5、7．0、7．5Gyγ射线照射后急性放射造血损伤有治疗作用：GM－CFU集落形成率、各项造备参数和30d活存率均较对照组有显著性差异（P＜0.01)。本工作结果提示,BMP对成年动物放射所致造血损伤具有治疗作用,其机理与促进已损伤的造血功能的修复作用有关。     

持续性小剂量率γ射线照射妊娠中期母鼠对子鼠造血组织的影响

造血组织是辐射高敏感组织，胚胎动物的造血组织对辐射更为敏感。本文观察了持续性小剂量率γ射线照射妊娠中期母鼠，对出生子鼠股骨骨髓有核细胞数（ＢＭＣ）、造血干细胞（ＣＦＵ＿Ｓ）数及其在股骨骨髓腔中分布状况的改变，和对造血组织基质（ＣＦＵ－Ｆ）的变化。本实验观察到正常小鼠股骨骨髓ＣＦＵ－Ｓ分布，接近骨髓骨皮质的ＣＦＵ－Ｓ浓度最高，约为４１／１０＾５ＢＭＣ，近骨髓中心静脉窦ＣＦＵ－Ｓ浓度最低，大约是２２／     

白细胞介素-6及肿瘤坏死因子对受照小鼠造血恢复的影响

采用PHILIPS－SL18型电子直线加速器产生的6MV高能X射线照射Balb/c小鼠（剂量为6．5Gy)，照后不同时间皮下注射不同剂量的白细胞介互－6（IL－6）和／或肿瘤坏死因子（TNF），观察外周血白细胞，血小板，骨髓有核细胞计数和脾集落形成单位（CFU－S）的变化，以探讨IL－6对放射损伤后造血恢复的影响，结果表明，照射后应用IL－6组较对照组外周血白细胞，血小板和骨髓有核细胞计数恢复快，且呈量依赖关系，CFU－S则在TNF与IL－6协同作用时数量多，体积大，提示IL－6和TNF有利于放射损伤后的造血恢复。     

不同给药条件下白细胞介素-8对受照小鼠作用特点的初步探讨

采用Phlips SL18型直线加速器发射的6 MV高能X射线照射BALB/c小鼠（吸收剂量分别为6.5和8.5 Gy）,于照射前后不同时间（照前24 h、12 h、6 h、20 min和照后即刻）腹腔注射不同剂量（10、30 μg/鼠）的人重组白细胞介素-8 （rhIL-8）,观察动物的存活情况及造血功能指标.结果表明：（1）8.5 Gy照后30 d内,rhIL-8 10 μg给药各组的小鼠全部死亡,其中照前24 h给药小鼠的平均存活时间明显短于单纯照射组,照前6 h给药小鼠的平均存活时间明显延长;rhIL-8 30 μg给药各组中,照前20 min给药组小鼠存活率达40%左右,其余各组均死亡,其中照前12 h给药小鼠的平均存活时间明显短于单纯照射组.（2）受6.5 Gy照后第6 天,各组小鼠的外周血白细胞（WBC）计数均在正常对照组的10%以下,各组受照小鼠外周血WBC计数未见明显差别;骨髓细胞粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）计数与受8.5 Gy照射小鼠的平均存活时间在变化规律上有内在联系.以上结果说明,rhIL-8在一定的给药剂量和给药时间的条件下,对受到急性放射损伤的小鼠具有一定的保护作用.     

60Co γ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞IL-6表达的影响及机制研究

观察了^60Coγ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞（BMSCs)的白细胞介素－6（IL－6）mRNA及蛋白表达的影响。采用Dexter方法体外培养小鼠BMSCs,8.0Gy^60Coγ射线照射后用放射免疫法测定培养上清液中IL－6的浓度,应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）的方法检测IL－6的mRNA表达,同时与NF－KB抑制剂PDTC或地塞米松预处理的BMSCs相比较。结果表明,培养小鼠BMSCs在正常情况下低表达IL－6,辐射后2h时其mRNA水平表达升高,4h时达峰值,之后开始下降;其蛋白表达在2h时开始升高,8－12h时达峰值,24h时基本恢复正至正常水平;而BMSCs在受照射前2h用PDTC或地塞米松预处理后,辐射并不引起IL－6mRNA表达的改变。结果显示,^60Coγ射线照射能够激活培养小鼠BMSCs细胞IL－6基因的转录,使细胞分泌IL－6增多,其机制可能与照射引起的NF－KB活化有关。     

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。     

碳离子束与X射线对女性恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群的影响

分析女性乳腺癌及宫颈癌患者外周血在接受不同剂量碳离子束与X射线辐射前后淋巴细胞亚群数值的变化。抽取5例宫颈癌、5例女性乳腺癌患者的外周静脉血,经照射后(设未接受辐射组、1、2 GyE碳离子束组、及1、2 Gy的X射线组)进行淋巴细胞亚群检测。采用独立样本t检验,分别对两组离体血样本进行CD3~+、CD8~+、CD4~+、NK细胞、B细胞、CD4~+/CD8~+两两组间对比,分析数值变化情况。结果显示:两组离体血在接受不同射线、不同剂量照射后,淋巴细胞亚群检测结果差异无显著性的意义(p0.05);接受高线性传能密度(Linear energy transfer,LET)碳离子照射时,乳腺癌组中CD4~+值随剂量增加而升高,宫颈癌组数值则表现出相反的趋势;接受6 MV-X射线照射时,宫颈癌组中NK细胞数值随剂量增加而下降,而乳腺癌组则相反;接受碳离子束照射时,两病种受到1 GyE照射后NK细胞数值均较未照射组数值升高,2 GyE则均较未照射组数值下降。结果提示:女性生殖系统最常见两种恶性肿瘤离体外周血对高LET碳离子和低LET的6 MV-X射线照射表现出了不同的免疫应答反应。     

铜紫红素18对小鼠红系造血作用的研究

为了寻找再生障碍性贫血治疗药物,从四吡咯人合物中设计合成了铜紫红素１８,观察铜紫红素１８对受照射昆明种小鼠红系造血的作用。结果表明：铜紫红素１８能明显促进造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）优先向红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）转人;在恢复期也有提升ＷＢＣ和骨髓有核细胞计数的作用。本结果提示。铜紫红素１８作为再生障碍性贫因防治药物具有良好的发展前景,值得进一步研究 。     

N-乙酰基-S-烯丙基-L-半胱氨酸的合成及其抗辐射活性

以L-半胱氨酸为原料,经取代和酰化两步反应合成目标产物N-乙酰基-S-烯丙基-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-allyl-L-cysteine,NAc-SAC)。以~(137)Csγ射线照射至不同剂量的ICR小鼠作为研究对象,通过30 d存活率实验、血相和免疫系统实验、各项脏器指数以及外周血淋巴细胞彗星实验,研究目标化合物分别在200、400、600 mg/kg给药剂量下的抗辐射活性。ICR小鼠经伽马射线照射至致死剂量7.5 Gy后,其存活率由单纯照射对照组的41.6%,分别提高到NAc-SAC给药组的58.3%、50.0%和66.7%,平均存活天数明显延长。~(137)Csγ射线照射至亚致死剂量6.0 Gy后,NAc-SAC在不同程度上增加了受照小鼠的脾指数、脾结节数(CFU-S)、骨髓DNA含量和白细胞数。彗星实验中7.0 Gy伽马射线照射联合NAc-SAC给药组小鼠外周血淋巴细胞的尾长、尾矩、Olive尾矩和尾部DNA百分含量明显低于7.0 Gy伽马射线单纯照射组(p0.01),提示NAc-SAC可明显降低辐射导致的DNA损伤。本研究表明,目标化合物NAc-SAC具有一定的抗辐射损伤作用。     

切尔诺贝利事故清理工作者淋巴细胞的尾核

为了研究切尔诺贝利事故清理工作者和其他受照射人员外周血淋巴细胞,选取切尔诺贝利事故清理工作者和其他受照射人员作为试验组,采用常规方法取指尖外周血制备涂片,空气干燥,对氨基苯甲酸混合,Giemsa法染色,光镜下计数每人500个细胞样本,观察记录具有尾状突起细胞核发生率,进行统计学处理.未照射对照组的外周血淋巴细胞尾核发生率在0%～0.6%,平均值0.16.而大多数受照射对象都出现较多具有尾核的淋巴细胞.照射组的淋巴细胞出现尾核最大值是3.2%,平均值是0.50%.切尔诺贝利事故清理工作者的带尾核的淋巴细胞出现的几率显著高于对照组(p<0.01).外周血淋巴细胞尾核可能是一种有意义的受照射标记物,受照射淋巴细胞尾核的异常出现可能起因于双着丝粒所形成的染色体桥的断裂.对于更加详尽地获取辐射生物效应信息,回顾性研究辐射剂量效应可能具有重要的理论和实践价值.     

交感神经阻断对受辐照小鼠T淋巴细胞的影响

研究交感神经阻断对辐照小鼠的T细胞、T细胞亚群的影响.小鼠受0.5Gy、3Gy、6Gy辐照后,6-羟多巴胺阻断交感神经.阻断两周后小鼠眼眶处取血,利用流式细胞仪检测小鼠外周血中T细胞、T细胞亚群的数量以及它们活化细胞数量.交感神经阻断对受辐照小鼠胸腺指数具有极为显著的降低作用.与正常对照组相比,受辐照小鼠的T、Th和Tc/Ts细胞数量均随辐照剂量的增加而减少,在相同辐照剂量下,虽然阻断组的T细胞数量小于未阻断组,但是Th和Tc/Ts细胞数量均明显大于未阻断组.与正常对照组相比,受辐照小鼠的CD3+CD25+、活化Th细胞和活化Tc/Ts细胞数量随辐照剂量的增大反而有所提高,并且在相同的辐照剂量下阻断组的CD3+CD25+、活化Th细胞和活化Tc/Ts细胞数量均明显大于非阻断组.表明交感神经阻断进一步增强了受辐照机体的免疫抑制作用.     

^60Co辐射对SX1近交系小鼠和昆明种小鼠毒性的比较

SX1近交系小鼠是由昆明种小鼠经过连续的全同胞兄妹交配得到的品种,本试验观察并比较了SX1近交系小鼠和昆明种小鼠对^60Co的辐射毒性,指标包括LD50/30、外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓细胞DNA含量和脾脏结节数。结果表明：与昆明种小鼠相比,SX1近交系小鼠的LD50/30较低,对^60Coγ射线较敏感;外周血白细胞数变化趋势基本相同;骨髓有核细胞数和骨髓细胞DNA含量下降幅度大,并且恢复慢。结果提示,^60Co辐射对SX1近交系小鼠的毒性高于昆明种小鼠。     

X射线照射对人树突状细胞免疫功能的影响

采用免疫荧光标记、流式细胞仪、3^H-TdR掺入和MTT技术,研究χ射线照射对人外周血来源的树突状细胞（DCs）和T细胞免疫功能的影响。结果显示,不同剂量（0．1～0．5Gy）χ射线照射后使DCs的HLA-DR、CD86和CD40分子表达上调,CD80分子表达下调;与其他剂量组相比,O．2Gy照射DCs可调节T细胞CD4／CD8比值,增强T细胞的增殖能力,同时还可提高特异性CTL细胞的杀伤能力。说明0．2Gyχ射线体外照射可一定程度提高受辐射损伤机体的免疫功能,是体外处理治疗性DCs较为合理的剂量。     

超氧化物歧化酶与阿米福汀对小鼠急性放射损伤预防作用的比较

本研究建立了小鼠全身放疗的损伤模型,以比较预给药超氧化物歧化酶(SOD)和阿米福汀对小鼠放射治疗损伤的防护效果。C57BL/6小鼠用6 Gy X射线进行全身一次性照射,在放射后24 h处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,以及肝脏抗氧化活力。结果表明:与放疗对照组相比,放疗前给药SOD组对放疗鼠的外周血白细胞数量和胸腺指数有显著的保护作用,使之分别增加66.7%和19.1%。测得放疗前给药阿米福汀对放射鼠的外周血白细胞数量和脾脏指数有显著的保护作用,使之分别增加106.9%和22.6%。此外,与放疗对照组相比,放疗前给药SOD对放疗鼠的肝脏抗氧化能力也有显著提高,可使肝脏的MDA水平下降12.7%,SOD活力增加10.8%,T-AOC活力增加45.0%,放疗前给药阿米福汀可使放疗鼠肝脏的MDA水平下降22.3%。     

雅安藏茶茶褐素对~(60)Co γ辐射损伤的防护作用

通过建立~(60)Co γ辐射损伤小鼠模型,探究雅安藏茶茶褐素对~(60)Co γ辐射损伤的防护作用。实验选取48只雄性SPF级小鼠,随机分成正常对照组、辐射对照组、阳性对照组,以及雅安藏茶茶褐素低、中、高三个剂量组,连续灌胃相应受试样品15 d,其中在灌胃第6 d,除正常对照组外,其余各组均进行全身一次性剂量为5 Gy的~(60)Co γ射线照射。第16 d称量体重后,小鼠眼睑取血、解剖后,测定其外周血细胞、骨髓脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)含量、胸脾指数、肝脏组织总抗氧化能力等相关指标。结果表明,与辐射对照组相比,雅安藏茶茶褐素能极显著提高辐射损伤小鼠血液的白细胞(White Blood Cell,WBC)、血小板(Platelets,PLT)、淋巴细胞(Lymphocytes,LYM)数量以及血液超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性(p0.01),极显著增强小鼠肝脏组织的总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)、总超氧化物歧化酶(Total Superoxide Dismutase,T-SOD)活性(p0.01),并使股骨骨髓DNA含量极显著升高(p0.01);同时,使肝脏丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量极显著降低(p0.01),明显缓解了小鼠免疫器官胸脾的萎缩。其效果随茶褐素浓度而提高,其中高剂量茶褐素的效果达到或优于阳性药物的效果。结果表明,茶褐素对~(60)Co γ照射的辐射损伤小鼠的抗氧化系统和造血系统有较好的防护作用,以高剂量的效果最好。     

肠道急性放射损伤机制及防治研究

BALB/c mice and human intestinal epithelial cells were irradiated to different doses by 60Co γ-rays. They were sampled for chromosome pattern analysis, intestinal morphology, and a number of other biomedical tests to investigate mechanisms of acute intestine injury by γ-ray irradiation and its effective treatment methods. The resuits indicated that:( a ) The intestinal epithelium stem cells from the normal mice (including infantility crypt cells ) could survive at intestinal crypt in mice after irradiation.(b) Bell-shaped curves correlating the crypt survival fraction and exogenous nucleic acids (RNA, DNA)doses were obtained, with the optimal doses for different routes of administration estimated.( c ) Comparing the different routes ( regional intestinal lumen, intramuscular, hypodermic, intraperitoneal and intravenous ) of RNA (ribonucleic acid ) administration, the intravenous injection seemed to be the most effective.( d ) The earlier time of RNA administration, the more effective it was. One injection within 6h after irradiation had the same effect as multi-injections.( e ) The intestinal RNA could enhance the crypt survival of all small intestines segmentes in mice after γ-irradiation, increase the number of leucocytes and platelets in the peripheral blood and enhance the formation ability of bone marrow GM-CFU in mice after γ-irradiation.(f) The intestinal RNA could decrease apoptosis and inhibit the expression of P53 in intestinal crypt cell after γ-irradiation.( g ) The intestinal RNA may improve the cell survival by regulating the cell cycle of the irradiated cells.( h ) The change in the gene expression of the irradiated small intestinal tissue could be induced by the intestinal RNA administration, and 18 new gene sequences or fragments which were related with damage recovery of the intestine RNA administration (the registration number was AF240164-240181 in GeneBank) were found.This fact suggests that: (1) Intestine epithelium stem cell of normal mice, including infantile crypt cells, may survive at crypt in mice after irradiation. (2) Exogenous RNA may help recovery of the intestine injury after γ-ray irradiation, and intestine RNA may increase the crypt survival and facilitate damage recovery of hemopoiesis and intestine tissue by gene regulation, changing cell cycle, decreasing apoptosis, and promoting the recovery of damage cells.