烟草品种对镰刀菌根腐病的抗性鉴定

采用盆栽烟株带菌麦粒接种法测定12个烟草品种（系）对烟草镰刀菌根腐病的苗期抗病性,结果表明,中烟98、贵烟6号、云烟87、7478、NC89和豫烟13号对镰刀菌具有较高抗性,KRK26、中烟100和中烟205中等抗病,小黄金1025、豫烟10号和长脖黄对镰刀菌易感,在所有测试样品中,长脖黄抗性最低。长脖黄、小黄金1025和豫烟10号可作为对镰刀菌根腐病检测预警材料及镰刀菌根腐病的感病对照样品应用于相关研究中。      

烟草叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以烟草品种K326旺长后期叶片为材料,用IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术对5种蛋白质提取方法(TCA/丙酮沉淀法、Mg/NP-40法、苯酚法、TCA-苯酚法和可溶性蛋白质提取法)进行比较,并对自制管胶pH范围进行探索。结果表明:苯酚法图谱中蛋白质条带最多、最清晰,并可获得较高纯蛋白质得率,为0.0420%,且图谱中蛋白质条带数最多、最清晰。自制管胶pH范围优化试验结果表明,以两性电解质pH 3-10与pH 5-8比例为1:3的2-DE图谱质量最佳,蛋白质可得到较好的分离。     

烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响

为了探讨烟草品种对黑胫病的抗性机制,以抗黑胫病品种Florida 301、L8、Beinhart1000-1和革新3号,以及感黑胫病品种中烟100、贵烟13、红花大金元和小黄金1025的盆栽烟苗为试验材料,采用生长速率法测定了抗感黑胫病烟草品种根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响。结果表明,抗病品种Florida301、L8、Beinhart1000-1和革新3号的根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长具有较明显抑制作用,抑制率为5.93%～20.78%;4个抗病品种根系分泌物处理的菌落直径明显小于对照,且差异达到显著水平(P0.05)。感病品种贵烟13、红花大金元和小黄金1025根系分泌物处理与对照相比对黑胫病菌菌丝生长具有一定的促进作用,菌落直径大于对照,差异达到极显著水平(P0.01),菌丝生长抑制率为-16.47%～-2.15%,但感病品种中烟100没有表现出对黑胫病菌菌丝生长的促进作用。因此,烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的作用与烟草品种的抗性有关。     

啤酒大麦种子蛋白质组的分级制备及初步分析

大麦种子蛋白主要分为清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,它们在大麦种子中起到不同的作用,因此对每个组分的研究具有重要的理论和实际意义。根据4种蛋白质组分的溶解性不同,可利用分级提取的方法获得4种组分的蛋白质溶液;进而利用TCA沉淀和TCA-丙酮沉淀法对4种蛋白质进行除杂和浓缩,获得适用于双向电泳的蛋白质提取液。利用SDS-PAGE和双向电泳检测提取效果,发现所得SDS-PAGE凝胶条带清晰,双向电泳图谱分辨率高,蛋白质点清晰;经PDQuest分析,谱图结果显示检测到450个水溶蛋白质点和100个醇溶蛋白质点。大麦种子中各组分蛋白质组的分级提取方法的构建,为后续对各组分蛋白组进行质谱鉴定及功能分析奠定了基础。     

茭白总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立茭白总蛋白质双向电泳技术体系,研究了TCA/丙酮沉淀法和改良酚抽法两种不同总蛋白质提取方法、蛋白质上样量、pH值范围及凝胶质量浓度等条件对2-DE的影响。结果表明,改良酚抽法更适合茭白总蛋白质的提取,采用17 cm、pH 4~7的胶条、1.0 mg的蛋白质上样量、12 g/dL的凝胶浓度、考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,最终可获得蛋白质点较多,背景清晰,分辨率较高的2-DE图谱,为进一步开展茭白差异蛋白质组学研究奠定了基础。     

蕨菜总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为了建立蕨菜中总蛋白质的双向电泳技术体系,作者以新鲜蕨菜为实验材料,分别比较了不同蛋白提取方法,不同上样量以及不同pH范围IPG胶条对2-DE图谱的影响。结果表明,采用TCA-丙酮结合酚抽法提取蕨菜中的蛋白质,采用IPG胶条pH5-8、蛋白质的上样量为1 200μg、考马斯亮蓝G-250胶体考染法进行染色。在此条件下进行蕨菜全蛋白质的双向电泳所得到的图谱蛋白质点多达719个,且蛋白质点分布均匀、背景清晰、分辨率较高。     

烟草镰刀菌根腐病抗性鉴定方法研究

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法，采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种（小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01）的镰刀菌抗病性进行了研究。结果表明，镰刀菌毒素液胁迫法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系毒素浓度为8%，处理时间6d；镰刀菌孢子悬浮液接种法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系孢子液浓度为107个/mL，处理时间4 d；带菌菌谷接种也可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系菌谷比例为20%，处理时间9 d；离体叶片用菌饼和草酸液处理，能区分品种的抗感性，但不能区分品种的抗感程度。研究结果认为孢子悬浮液接种法和带菌菌谷接种与其他3种方法相比可以准确评价品种对镰刀菌根腐病的抗感性。     

华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

华根霉(Rhizopus chinensis CCTCC M201021)是从我国传统微生物载体——大曲中分离筛选得到的一株丝状真菌,具有重要的工业应用前景。为建立一种适于华根霉胞内蛋白质的双电泳体系以进行蛋白质组学研究,作者对华根霉胞内蛋白质的提取方法及双向电泳流程相关参数进行了考察和优化.确定采用液氮研磨与高速珠磨相结合的方法对华根霉进行细胞破碎,用TCA/丙酮对提取的蛋白质进行纯化,采用被动水化的上样方式上样,24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条,上样量为1 200 μg蛋白质,考马斯亮蓝G-250股体染色法,最终得到了背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。     

干酪乳杆菌蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

采用超声波法和液氮研磨法提取了干酪乳杆菌菌体蛋白质,通过固相pH梯度等电聚焦双向电泳对蛋白质进行分离,并分别利用硝酸银和考马斯亮蓝方法进行染色.对上述不同方法比较结果显示,超声-三氯乙酸/丙酮提取蛋白质方法简便易行,适用于快速制备蛋白质样品,液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法更适合干酪乳杆菌大规模蛋白质提取及组学检测,并且在制备的过程中不发生明显的蛋白质降解的现象.利用液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法制备的干酪乳杆菌蛋白质样品分离效果良好,可获得重复性好和高分辨率的双向电泳图谱,便于后续的质谱及差异蛋白质组的分析,值得同行及相关研究者参考和借鉴.     

油菜不同器官高质量总蛋白提取方法和双向电泳体系的优化

以显性核不育油菜Shaan—GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA（三氯醋酸）-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG（固定pH梯度）胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明,采用理想的蛋白质裂解液（7mol／L尿素,2mol／L硫脲,4％CHAPS（3-[3-（胆酰氨丙基）二甲氨基]丙磺酸内盐）,65mmol二硫苏糖醇,0．5％IPG缓冲液pH3～10或pH4～7,全蛋白酶抑制片剂（片／10mL））裂解蛋白,以150μg上样,按IEF程序Ⅱ（30V,12h;200V,1h;500V,1h;1000V,0．5h;10000V,2h;10000V,8h）进行等电聚焦,10％SDS—PAGE胶浓度进行第二向电泳,银染方法检测,可得到背景清晰、分辨率较高的油菜花蕾、花药及叶片蛋白质电泳图谱。高质量油菜蛋白的提取方法和蛋白质分离双向电泳体系的优化可为油菜蛋白质组学研究奠定技术基础。