表面铺展技术在联会复合体电镜研究中的应用

本文较详细地介绍了本室改进的表面铺层－硝酸银染色制备联会复合体（SC）电镜样品技术。取小鼠睾丸组织制成细胞悬液，取少量悬液滴在0．4％KCl液珠表面上以通过表面张力使SC铺展开，用涂有Formvar膜的载玻片蘸取细胞，干燥后用多聚甲醛固定，硝酸银染色，光镜下找到要观察的细胞，然后转移到50目铜网上，电镜下既可看到整个SC核,,地可观察同源染色体的联会过程，SC的超微结构及各种类型的SC畸变，该技术可广泛应用于细胞遗传学，遗传毒理学，生殖生物学等诸多学科。     

微波技术在诊断电镜标本制备中的应用

电镜作为某些疾病的病理检查手段 ,已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品的常规制备方法周期较长 ,影响及时诊断。近年来 ,我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备 ,进行了大量的工作。结果表明 ,该方法不仅大大缩短了样品制备时间 ,而且用这种方法制备的样品的超微结构完全可以满足电镜诊断要求 ,现已成为本室诊断样品的常规技术。材　　料选用 National NN- 6 80型微波炉 ,分 HI,DEF,MEDHI,MED档 ,样品包括各种肿瘤组织 ,肝 ,肾 ,肺 ,软骨 ,及游离细胞 (血细胞 ,培养细胞 )。1 .标本固定固定液用 4%多聚甲醛 ,或 3%戊二醛 …     

高压冷冻及冷冻替代样品制备方法在体扫描电镜中的应用

高压冷冻及冷冻替代技术是一种利用高压和低温对含水组织样品进行瞬间冷冻固定和低温脱水的电镜样品制备技术,它因可以保存更加真实的细胞超微结构而常应用于透射电镜观察和分析。本文利用模式动物小鼠为材料,将这种技术应用于体扫描电镜的样品制备,并与常规化学固定的样品制备进行比较。结果显示在小鼠心肌组织中,高压冷冻及冷冻替代技术可以有效避免常规制备样品中的细胞器膜结构皱缩、细胞质分布不均匀、细胞核膜收缩形成锯齿状、甚至局部断裂等现象,使细胞超微结构更接近其生活时的状态。     

适合光镜和电镜诊断肾小球疾病的固定剂选择

目的：为了使已经石蜡包埋的肾穿组织脱蜡后进行电镜观察,关键是选择适当的固定剂。方法：在石蜡包埋前,肾穿组织分别用甲醛、戊二醛及戊二醛、锇酸双固定。根据光镜和电镜观察结果,选择能兼顾光镜和电镜的固定剂。结果：甲醛固定不能有效保存肾穿组织的超微结构,锇酸的固定能有效地保存超微结构,但严重影响了光镜切片的染色;而戊二醛与甲醛相比,较好地保存了肾穿组织的超微结构,同时又不影响光镜切片的染色。结论：在石蜡包     

微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快,我们采用在炉室内四角放置四个盛有     

综述：免疫电镜技术中包埋剂的应用

免疫电镜技术中包埋剂的使用直接影响到研究结果,实验室常用的环氧树脂类包埋剂对组织抗原的保存有一定影响,在其处理过程中要损害生物系统。丙烯类树脂包括近年来发展起来的低温包埋剂Lowicryl是属极性包埋剂,粘度低,可迅速浸透组织,而且在进行免疫组化反应时对抗原系统保存较好,能得到较强的阳性结果。本文综述了各种包埋剂的理化特性,应用于免疫电镜技术时的优缺点,及在实际工作中如何选用适当的包埋剂。     

透射电镜神经组织制样包埋剂比较

为探讨两种常用包埋剂Epon 812和Eponate 12对神经组织透射电镜样品的影响,本文采用多聚甲醛-戊二醛溶液对wistar大鼠进行全身灌流固定后,取材海马、脊髓及坐骨神经,按常规透射电镜样品技术制作超薄切片.电镜观察显示,经Eponate 12包埋后的样品,在切片的透明度及超微结构的清晰度上均优于Epon 812包埋的超薄切片样品.由于Eponate 12的浸透效果好,有效地避免了有髓神经纤维髓鞘上出现孔洞结构的制样问题.本实验小组的实验结果表明:对于神经组织,尤其是周围神经组织的超薄切片样品,使用Eponate 12作为包埋剂,效果会更好一些.     

免疫复型技术的应用

自Faulk和Taylor(1971)报导应用胶体金电镜免疫金染色研究细胞表面抗原的分布以来,许多学者进一步证实了胶体金作为特异细胞成份的标记物具有许多独特的优点。近年来金探针标记技术得到了飞速发展。在电镜下定位各种抗原准确而不遮盖超微结构,可以说已发展成为常规技术。但是对于不同的样品,不同的实验要求,细胞表面或细胞内标记等,还需要摸索出各自的理想的制样方法才能达到预期目的。     

新鲜何首乌组织的电镜制样技术及其超微结构观察

新鲜何首乌组织的电镜制样技术及其超微结构观察张玉英李向印宋春凤雷建章（河北医科大学电镜实验中心，石家庄０５００１７）本研究的目的有二，其一是探索新鲜植物制备成电镜观察样品的技术流程；其二是观察中草药的超微结构。中药材料选用新鲜何首乌，取其块根、茎、叶...     

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。     

免疫活性细胞的超微结构与功能研究

机体在免疫反应过程中,有多种具有免疫活性细胞参与,如各种淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞和肥大细胞等,它们各司其职,形成完整的免疫系统。本文对免疫反应中起重要作用的淋巴细胞和转化型淋巴母细胞的超微结构和功能进行比较研究。应用密度梯度离心法收集人外周血中的淋巴细胞,并稀释至每毫升含50万个细胞,按体积2比1加入植物血凝素(PHA)免疫刺激剂,培养72小时,使小淋巴细胞转化成母细胞型淋巴细胞;另一部份加PHA培养48小时后,再加入0.1mlDNA前体3~H—胸腺嘧啶脱氧核苷(3~HTdR),进行光镜和电镜放射自显影观察。同时在麻醉下取大鼠和家兔的淋巴小结、脾脏和胸腺。上述样品均用环氧树脂618按电镜     

一种简单方便的生物组织导电法

用扫描电镜观察的样品要求表面能导电,惯用的方法是在样品表面蒸涂导电层,对于表面起伏大而又容易变形的生物样品,这种方法效果不太好。近年来采用组织导电技术处理生物样品取得了比较好的效果,但一般对镜体污染大增加了仪器维护的麻烦。我们使用多种导电液处理样品在S—100电镜上面进行比较,觉得用四氯化锡导电液处理方法简单对镜体污染小。方法如下:把待观察样品按常规固定后保存在70％酒精中,把SnCl_4放入75％的酒精溶液中配制成5％的酒精四氯化锡导电液。把保存在酒精中的样品捞放入导电液中适当浸泡取出胶合即可观察。如果经过乙腈干燥后再     

微波辐射电镜生物样品制备方法研究

本文报道一种快速微波辐射电镜样品制备方法──水浴法，以及这个方法在动植物样品超薄切片制备中的应用。实验结果表明，水浴法使得样品可以接受相对较长时间的微波辐射而不致造成任何损伤，浸泡液和样品的温度控制简单而且准确，样品处理的结果内外均匀一致，超微结构保存优秀，完全可与常规制样法和Ｌｏｇｉｎ法的结果相媲美，而且在某些方面水浴法要优于常规法和Ｌｏｇｉｎ法。     

人卵巢粘液性肿瘤来源的再确认

本文研究人卵巢粘液性肿瘤上皮细胞的超微结构特征,试图从形态学角度再确认其起源。取人卵巢粘液性肿瘤组织6例(良性3例,交界性1例,恶性2例)。经2．5％戊二醛及锇酸先后固定后,按常规电镜样品制做程序处理,电镜观察。     

免疫电子显微技术载网处理方法

本文介绍免疫电子显微技术中载网的清洁处理以及与载网相关因素对免疫标记效果的影响。在免疫电子显微技术中 ,能否获得低背底高特异性标记结果 ,其影响因素较多。如在生物样品制备时 ,既要考虑不使组织细胞内抗原受损 ,又要使细胞超微结构保存良好。因此 ,样品制备过程中应合理选择固定液种类及浓度、包埋剂类型及包埋方式。在免疫细胞化学标记实验中 ,高特异性抗体以及抗体的稀释度、温育的温度和时间也是关键。但对载网处理的重要性容易忽视 ,因载网不洁净而导致非特异性高背底标记或切片脱落现象屡屡发生。为此 ,对载网进行彻底的去污处…     

缺钙对白菜根尖细胞超微结构和ATP酶活性的影响

钙是植物生长发育必需元素之一,缺乏时引起严重的生理病害,首先是根生长的抑制和伤害。已证明白菜“干心病”是由于体内钙不足引起的。本文应用溶液培养技术研究白菜“干心病”与钙素营养的关系,结合电镜研究缺钙对根尖细胞超微结构的影响,应用磷酸铅沉淀法对ATP酶活性进行超微结构定位,比较正常钙水平和缺钙培养下的活性反应。选用杨柳青小核桃纹白菜,以修改的岩田正利营养液培养。设正常钙水平组(含钙160ppm)和缺钙组。处理三天和十天后取根尖2—4mm,放入2％多聚甲醛加1％戊二醛固定液中常规圆定、温育、包埋     

冷冻电镜含水切片技术观察胰岛β细胞的三维超微结构

冷冻电镜含水切片技术(CEMOVIS)作为冷冻厚生物样品制备技术，对高压冷冻的样品直接进行冷冻切片，能够获得完全含水状态的生物样品的超微结构，更好地反映出细胞接近其生理条件的真实状态。本文应用冷冻含水切片技术结合冷冻电子断层扫描和三维重构技术观察到了小鼠胰岛β细胞内细胞器的高分辨超微结构。     

温度对制备超薄切片的影响

保存生物样品的生活状态和制备出完整而清晰的超微结构，是保证电镜观察效果的前提，而近几年的样品制备中，同批样品常伴有结构模糊、反差弱的现象发生，究其原因，只有前固定不是本实验室所为，是否与固定温度有关，香港大学徐是雄博士认为：过低温度会造成细胞内微管的消失。但传统的固定温度是0℃～4℃，有关动、植物样品的常规固定最佳温度及如何利用冰箱固定保存样品，-18℃冷藏样品怎样处理才能得到接近生活状态的超微结构，到目前为止，研究报道的甚少。本文仅就作者多年来，常规制样中发现的值得同仁注意的现象设计了不同的实验方案，探讨温度在样品制备中的作用，以增加优质超薄切片高重复率。     

电镜酶细胞化学技术及其应用

电镜酶细胞化学是在超微结构水平上研究酶的活性定位和变化的新技术。用此技术,有利于综合分析细胞的超微结构特征与酶活性分布之间的相互联系,对研究各种生理病理情况下酶的定位和代谢特征有很重要的意义。近年来,我们摸索、引用或改进了十八种酶(5′—核苷酸酶、核苷二磷酸酶、钠—钾—ATP酶、Mg~(++)-ATP酶、Ca~(++)-ATP酶、细胞色素氧化酶、腺苷酸环化酶、糖原合成酶、LDH、MAO、ALP、ACP、AChE、SDH、CMP酶、TPP酶、G-6-P酶、NADP酶)的电镜细胞化学方法,并应用于高压氧医学和脑肿瘤酶活性定位研究。在应用中我们体会到:(1)用2％多聚甲醛—0.5％戊二醛(0.1M二甲砷酸缓冲液或PBS配成,加6.5％蔗糖)混合固定液固定对大多数酶是合适的。少数酶如SDH不耐固定,须用     

植物钙调素的免疫金标记电镜技术

本文用玉米根尖作为实验材料,建立了植物钙调素免疫胶体全电镜定位技术。采用Epon812常规包埋方法;以脱脂奶粉作为封闭试剂;用过碘酸钠处理切片,使之恢复抗原性。所用的兔抗小麦钙调素抗体对植物钙调素具有较高的亲和力和专一性。本方法具有操作方便。标记特异性较强,超微结构保存较好等特点。