采用改良SDS-聚丙烯酰胺电泳对酱油成曲蛋白酶的分析

用改良的SDS-聚丙烯酰胺电泳对酱油成曲中的蛋白酶进行了分析研究，结果表明：酱油成曲里有多种不同分子量的蛋白酶，分子量21kDa-200kDa，主要集中在21.6kDa-38．4kDa和N52．3kDa-200kDa。同时通过在电泳时不加酪蛋白而在培育液中加酪蛋白的方法证实了结果的可靠性。     

牦牛乳酪蛋白酶解产物清除DPPH自由基活性分析

以牦牛(Bos grunniens)乳酪蛋白为原料,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶制备酪蛋白酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除活力,发现碱性蛋白酶酶解产物的清除活力显著高于其他酶解产物(P<0.05).测定不同水解时间点酪蛋白酶解产物的DPPH自由基清除活力,发现第7h酶解产物的清除活力显著高于其它水解时间点的样品(P<0.05).还分析了碱性蛋白酶7h酶解产物的理化指标,发现其水解度、三氯乙酸氮溶解指数和蛋白质回收率均较高,表明此时大部分酪蛋白已降解,且酶解产物中短肽段的含量较高,用碱性蛋白酶制备具有DPPH自由基清除能力的酪蛋白酶解产物时得率较高,而其氨基氮含量相对较低,适宜作为保健食品功能性基料.     

凡纳滨对虾蛋白酶对酱油渣蛋白质的降解作用

从凡纳滨对虾加工副产物虾头中提取蛋白酶,并对其所含酶种类及NaCl质量分数对酶活力的影响进行研究。对虾粗蛋白酶主要由胰蛋白酶、组织蛋白酶及氨肽酶构成。在25%NaCl质量分数下,胰蛋白酶、组织蛋白酶B+L、组织蛋白酶K保留约10%的相对酶活力,苯丙氨酸氨肽酶的相对酶活力为30%,而高NaCl质量分数(25%)对丙氨酸氨肽酶和甲硫氨酸氨肽酶具有激活作用,相对酶活力分别达到131%和191%。应用对虾粗蛋白酶对酱油渣中的残留蛋白进行酶解,并研究酶解效果及产物抑制血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)的活性。结果表明,对虾粗蛋白酶在高NaCl质量分数下仍具有酶解酱油渣蛋白的能力。酶解产物中,多肽质量浓度从酶解前的96.16μg/mL增加至1 049.55μg/mL;分子质量大于5 kDa的蛋白占比从酶解前的43.78%降低至16.85%,小于1 kDa的多肽组分占比从酶解前的28.50%增加至58.96%;游离氨基酸质量浓度从酶解前的3.01 mg/100 mL增加至97.16 mg/100 mL。利用对虾粗蛋白酶酶解酱油渣蛋白可使大豆蛋白利用率提高11.82%。酶解液对ACE的抑制活性(IC50值)为90.02μg/mL。本研究为高值化利用对虾和酱油加工副产物提供了理论依据。     

改良甲醛法测定酱油成曲的蛋白酶活力

通过缩短反应时间和添加反应底物,对蛋白酶活力甲醛测定法进行了修改,并且通过实验证明经修改的方法(简称改良甲醛法)的检测结果和福林法具有很好的相关性(r=0.992)。改良甲醛法的酶解条件为:成曲量<6g,大豆粉12g,去离子水100mL,55℃水浴酶解30min。采用甲醛滴定法检测氨基酸态氮的含量。蛋白酶活力规定为:1g曲在55℃、自然pH条件下,1min之内水解大豆粉产生1μg氨基酸态氮定为1个活力单位。     

刺参低聚肽的质量评价和抗疲劳作用研究

研究p H渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解猪皮得到的不同分子量胶原蛋白肽的体内外抗氧化活性。猪皮预处理后,采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步进行酶解,酶解液经超滤得到M1 k Da、1 kDaM3 kDa、M3 kDa 3个不同分子量肽段,以福林酚比色法测定各组分肽含量,通过测定各组分肽段对DPPH自由基、ABTS+自由基、O2-自由基及OH自由基的清除实验评价各组分肽的体外抗氧化活性,再以不同分子量肽段酶解液对小鼠进行灌胃,以试剂盒测定小鼠灌胃后血清的总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性、总抗氧化能力和微量丙二醛含量评价各组分肽的体内抗氧化活性。综合体内外抗氧化实验数据,各组分肽的抗氧化能力强弱顺序为:小于1 kDa组分1 k Da～3 kDa组分大于3 kDa组分。pH渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解的各组分猪皮胶原蛋白肽在体内外均有不同程度的抗氧化能力,且分子量越小,抗氧化活性越强,可对机体起到保护作用。     

不同蛋白酶和水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰蛋白酶分别对酪蛋白进行酶解,发现碱性蛋白酶水解酪蛋白的水解程度最大。当酪蛋白经不同的酶水解至相同水解度(DH)时,酶解物的分子量分布存在显著差异。随后选定碱性蛋白酶以考察水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响,采用p H-stat法控制水解过程p H恒定(8.5±0.02),制备DH8%和12%的酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除率,TCA可溶性氮含量,采用SE-HPLC测定分子量分布。结果表明,不同酶解条件下,DH 8%和DH 12%水解产物的DPPH自由基清除率分别为32.76%~34.02%和39.87%~41.02,DH 8%和DH 12%水解产物的TCA可溶性氮含量值分别为58.98%~60.43%和69.69%~70.34%。方差分析显示水解度相同,不同产物的DPPH自由基清除率无显著性差异,TCA可溶性氮含量的结果亦如此(p0.05)。HPLC的结果进一步证明尽管水解条件不同,水解至相同DH时,水解产物的分子量分布一致。     

一种测定酱油曲中蛋白酶活力方法研究

以底物Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA(琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-亮氨酰-对硝基苯胺)在蛋白酶催化下生成显色基团对硝基苯胺为基础,结合多功能酶标仪检测显色基团对硝基苯胺(pNA)含量,建立酱油曲中蛋白酶活力的新检测方法。在单因素试验的基础上,选定底物浓度、反应pH值、反应温度3个因素的3个水平进行中心组合试验,通过响应面分析得出酶活测定最优条件。结果表明,底物浓度、反应温度对酶活有显著影响,酶活测定的最佳条件为:底物浓度2.23mmol/mL,反应温度40.6℃,反应pH值为8.7。同时与GB/T23527-2009《蛋白酶活力的测定福林法》的方法进行了比对,新建立方法与国家标准方法检测结果具有显著相关性(R2=0.903)。     

海参肽的提取分离及其体外抗氧化活性

以水解度为指标,试验研究了复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对海参蛋白的水解能力,确定以复合蛋白酶为最佳用酶。以料液比、加酶量、酶解时间为试验因素,水解度为响应值,通过响应面法对提取工艺进行优化,结果表明该酶最佳酶解条件为:加酶量0.79%、料液比1︰5.35 (g/mL)、酶解时间3.93 h。在此条件下,海参蛋白水解度为21.38%。分别用截留分子量3 kDa和1 kDa超滤膜对海参肽进行分级分离,得到分子量大于3 kDa, 1～3 kDa和小于1 kDa 3种海参肽,将不同分子量海参肽分别在ABTS+·清除活性、还原力、DPPH·清除活性、O_2~-·清除活性4种体系下比较三者体外抗氧化能力。结果显示:分子量小于1 kDa海参肽对ABTS+·、O_2~-·清除活性最强, 1～3 kDa海参肽次之,大于3 kDa海参肽最弱;分子量大于3 kDa海参肽还原力以及对DPPH清除活性最强。     

源于不同菌种的谷氨酰胺转胺酶的特性研究

本文对TG-K和TG-N的特性进行对比研究发现:TG-K和TG-N粗酶酶活分别为11.32、9.41U/ml;对酶进行分离纯化的步骤越多,酶活力和蛋白含量就损失的越多,但是TG-K降低的幅度比TG-N小;经SDS-PAGE凝胶电泳可知TG-K的分子量为41.5kDa,而TG-N的分子量为39.6kDa,不同离子对TG-K和TG-N交联酪蛋白的影响不尽相同;经扫描电镜对酸奶凝块的超微结构进行观察,证实TG-K比TG-N更适合催化交联酪蛋白。     

豌豆蛋白深度酶解制备咸味肽的研究

以水解度、蛋白回收率和感官评价为指标,探究不同蛋白酶、酶解温度、pH及时间对豌豆蛋白酶解效率的影响,并对其酶解工艺进行优化,同时对最优酶解条件下获得的豌豆蛋白酶解产物的肽分子量分布和氨基酸组成进行分析。结果表明:豌豆蛋白最优酶解条件为采用风味蛋白酶酶解,温度50℃,pH 7.0,酶解时间24 h,在此条件下,豌豆蛋白水解度为22.63%,蛋白回收率为58.08%,且该酶解产物中小分子肽(1 kDa)约为65.60%。豌豆蛋白酶解产物中必需氨基酸含量为39.16%,鲜味氨基酸含量为36.79%,甜味氨基酸含量为15.03%。     

不同蛋白酶添加量对酱油成曲酶活的影响

酱油制曲是米曲霉生长、分泌各种酶并且通过这些酶分解原料的过程。蛋白酶是米曲霉分泌的最重要的一种酶,它将大豆蛋白质水解成多肽及氨基酸,使酱油营养丰富、鲜味独特。在制曲过程中添加的蛋白酶量对成曲酶活的影响各不相同,其中加入原料重量0.008%的蛋白酶效果最好,使成曲酶活提高了2.2%。而其他浓度的添加量则对成曲酶活的提高产生了抑制作用。     

菌种接种方式对黄豆酱品质的影响

以沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉、AS 3.324甘薯曲霉、沪酿3.130毛霉、AS 3.972红曲霉、米根霉和枯草芽孢杆菌为菌种进行制曲、发酵,通过测定发酵7 d后蛋白酶活力和氨基酸态氮含量,研究单菌种制曲发酵、曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵方式对黄豆酱品质的影响。结果表明:曲料混合发酵产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量效果最好,其次为多菌种混合制曲发酵和单菌种制曲发酵。曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵中,2菌种和3菌种组合产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量整体较高,其中曲料混合发酵5号(沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉和枯草芽孢杆菌)产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量最佳,分别达到713 U/mL和0.89 g/100 g。研究发现,沪酿3.042米曲霉成曲、AS 3.35黑曲霉成曲和枯草芽孢杆菌成曲按照曲料混合发酵方式接种更有利于得到品质较优黄豆酱。     

耐盐米曲霉制曲及复合酶分泌条件的研究

该文研究了耐盐米曲霉制曲的产酶特性,并且通过对耐盐米曲霉在不同作用条件下制得的曲料的蛋白酶活力和淀粉酶活力的变化分析,探讨了不同原料配比、水分添加量、制曲温度和蒸料时间等因素对耐盐米曲霉制曲效果的影响,为米曲霉在工业生产中的研究和应用提供理论依据.研究表明,耐盐米曲霉制曲产生的中性蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活较高,酸性蛋白酶和淀粉酶酶活较低.复合酶分泌的最佳工艺条件为:原料配比为豆粕:麸皮=2:3,加水量为120％,蒸料时间为30min,30℃制曲42h,此条件下酸性蛋白酶和淀粉酶活力有明显的提高.     

Changes in selected physical property and enzyme activity of rice and barley koji during fermentation and storage

Koji are solid-state fermentation products made by inoculating steamed grains with the spores of fungi, particularly Aspergillus spp. This research was undertaken to identify the fermentation and storage conditions optimal for the production and maintenance of selected hydrolytic enzymes, such as α-amlyase and protease, in koji. Steamed rice and barley were inoculated with 2 × 10 (11) Aspergillus oryzae spores per kilogram of grains and fermented for 118 h in a growth chamber at 28 to 32 °C with controlled relative humidities. Samples were drawn periodically during fermentation and storage at -20, 4, or 32 °C, and α-amylase and protease activity, mold counts, a(w), moisture contents, and pH of collected samples were determined. It was observed that the a(w), moisture contents, and pH of the koji were influenced by the duration of fermentation and temperature of storage. The α-amylase activity of both koji increased as the populations of A. oryzae increased during the exponential growth phase. The enzyme activity of barley koji was significantly higher than that of rice koji, reaching a peak activity of 211.87 or 116.57 U at 46 and 58 h, respectively, into the fermentation process. The enzyme activity in both products started to decrease once the mold culture entered the stationary growth phase. The protease activities of both koji were low and remained relatively stable during fermentation and storage. These results suggest that rice and barley koji can be used as sources of α-amylase and desired enzyme activity can be achieved by controlling the fermentation and storage conditions. PRACTICAL APPLICATION: Amylases and proteases are 2 important hydrolytic enzymes. In the food industry, these enzymes are used to break down starches and proteins while reducing the viscosity of foods. Although amylases and proteases are found in plants and animals, commercial enzymes are often produced using bacteria or molds through solid state fermentation, which is designed to use natural microbial process to produce enzymes in a controlled environment. A properly produced and maintained koji with a high hydrolytic enzyme activity can serve as an important source of the enzymes for the food industry.     

添加剂对成曲酶活力和酱油质量的影响

以提高酱油成曲酶活力为目标,在发酵培养基的基础上,添加不同碳源、氮源、无机盐进行试验。结果表明,在葡萄糖0.25%、NaNO30.1%、ZnSO40.05%的条件下成曲的蛋白酶活力为2 383.83U/g干基,糖化酶活力为117.82U/g干基,分别较对照组提高了36.75%和46.02%。用该优化组和对照组进行酱油低盐固态发酵比较,优化组得到的酱油,总氮含量和氨基态氮含量等各项质量指标均优于对照组。     

花生粕酱油制曲工艺条件优化

以花生粕、小麦麸皮为原料制备花生酱油成曲,研究花生粕与小麦麸皮质量比、米曲霉（Aspergillus oryzae）As3.042接种量、制曲温度和制曲时间4个因素对花生粕酱油成曲中性蛋白酶酶活的影响,并通过单因素试验和响应面试验优化制曲工艺。结果表明,对中性蛋白酶活影响程度从大到小依次为制曲温度＞接种量＞原料质量比＞制曲时间。花生酱油成曲的最佳制曲工艺条件为：花生粕与小麦麸皮质量比8∶2,米曲霉接种量0.65%,制曲温度32 ℃、制曲时间24 h。在此优化条件下,成曲中性蛋白酶活为（2 493.67±7.70） U/g,酸性蛋白酶活为（596.84±23.12） U/g、糖化酶活为（29.91±2.63） U/g、淀粉酶活为（882.85±32.63） U/g、纤维素酶活为（11.72±3.69） U/g。     

带鱼副产物鱼粉对酱醪品质的影响

目的:探讨在酱醪中添加带鱼鱼粉对酱醪品质的影响。方法:在舟山传统酱醪制备基础上添加带鱼鱼粉,测定酱油曲制备过程中酵母菌及米曲霉孢子数的变化,用福林酚法研究带鱼鱼粉对酱油曲蛋白酶活力的影响,采用GC-MS技术探讨带鱼鱼粉对发酵酱醪中挥发性成分的影响。结果:添加适量带鱼鱼粉对制曲过程中(36 h)的酵母菌和米曲霉孢子有一定促进效果,使各组孢子数均达到8.5×108以上;添加带鱼鱼粉后除发酵24 h外,其余发酵时间内各处理组的蛋白酶活力显著高于对照组(P<0.05);各试验组酱醪的氨基酸态氮在发酵30 d时,分别高于对照组14.5%,18.8%和19.4%;各试验组中检出挥发性成分33种,其中4%添加量组挥发性成分含量高于对照组11.55%;虽然低于6%添加量组,但壬醛等鱼腥味成分明显降低。结论:添加适量带鱼鱼粉对酱油曲中各微生物生长及蛋白酶活力具有一定促进作用,对酱醪的色泽、香气、流动性无明显影响,且可提高酱醪中氨基酸态氮的含量,添加鱼粉对酱醪挥发性成分种类基本没有影响,而鱼粉添加量过高会给酱醪带来不良风味。     

外加营养物对酱油种曲孢子数和成曲酶活力的影响

以提高酱油种曲孢子数和成曲酶活力为目标,在麸皮培养基的基础上,对酱油种曲培养基的外加碳源、氮源、无机盐进行优化研究。结果表明：在葡萄糖1.00%、氯化钙0.10%、硫酸锌0.05%、豆粕3.00% 的条件下孢子数可达(15.77 ± 0.49)× 109 个/g 干重,比对照组提高了84.87%。同时对优化种曲和利用该种曲制得的大曲的酶活力进行比较,表明种曲培养基的优劣对酱油发酵有重要影响,其中种曲酶活力提高25.04%,大曲酶活力提高17.40%。     

响应面优化香菇柄发酵酱糕的制曲工艺

为了制备香菇柄发酵酱糕,以糯米、黄豆为原料,选用米曲霉（Aspergillus oryzae）As3.042进行制曲。以蛋白酶活力、淀粉酶活力、纤维素酶活力为评价指标,对原料比（糯米∶黄豆）、接种量、培养时间、培养温度进行单因素试验优化,并在单因素试验的基础上对发酵酱糕的制曲工艺进行响应面优化。结果表明,香菇柄发酵酱糕的制曲最优条件为糯米与黄豆质量比2∶3、米曲霉接种量0.8%、培养时间48 h、培养温度30 ℃,此条件下优化后的成曲蛋白酶活力为2 625.48 U/g。