产胶原蛋白酶菌株的构建及性质分析北大核心

使用聚合酶链式反应(PCR)法扩增了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens TCCC11319)的胶原蛋白酶基因col,并在枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtillis WB600)中进行表达。收集重组菌株的发酵酶液,以此来分析胶原蛋白酶性质。酶学性质研究表明:酶的最适反应温度为40℃,在30~40℃具有良好的温度稳定性;最适反应p H值为8.0,在pH值7.0~8.0的条件下稳定,表明是一种中性酶;金属离子Ca^(2+)、Mg^(2+)对酶有明显的激活作用,而Mn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)对酶有明显的抑制作用,其中Cu^(2+)对酶的抑制作用最显著。酶学性质的研究结果对胶原蛋白酶在制革固体废弃物处理应用中具有很好的指导意义。     

产过氧化氢酶淀粉液化芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学性质研究

为了得到过氧化氢酶高产菌株,从江苏省土质属碱性地区的土壤中分离的102株菌株进行筛选,获得1株高过氧化氢酶活性的菌株,命名RU-22,酶活值达到189.2 U/mL。16S rDNA序列测定,为淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过对RU-22酶学性质的研究,确定该菌株的最适温度为40℃,热稳定性在40～50℃较好;最适pH为7,pH在6.0～8.0时酶的稳定性较好;Cu~(2+)、Mg~(2+)和Fe~(2+)对酶活没有影响,Zn~(2+)和Mn~(2+)则对酶活有一定的抑制作用;经紫外照射2 h后酶活有明显的提高,为下一步淀粉液化芽孢杆菌、过氧化氢酶的实际应用奠定了一定的基础。     

凝结芽孢杆菌RY237 β-半乳糖苷酶酶学性质研究

为研究乳品中具有应用价值的乳糖酶,以乳糖为唯一碳源,用邻硝基苯酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)法,从产乳酸的细菌中筛选出了产乳糖酶活力高的菌株RY237,其活性达4.98 U/m L,鉴定为凝结芽孢杆菌。研究了乳糖酶的酶学性质,该酶最适反应温度和最适p H分别为50℃和6.0。该酶在温度40~50℃具有良好的稳定性;p H5.5~8.0表现稳定,p H7.0出现酶活峰值。金属离子Ca~(2+)、K+、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Na+、Mg~(2+)对酶活具有抑制作用,Cu~(2+)对酶活具有完全抑制作用,EDTA对酶活具有激活作用。凝结芽孢杆菌RY237乳糖酶活性高、性能优良,具有应用价值。     

保加利亚乳杆菌异源表达纳豆激酶的性质研究

目的:研究保加利亚乳杆菌中异源表达来自纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶酶学性质及其体外溶栓作用。方法:从纳豆激酶的最适温度、热稳定性、最适pH值、pH值稳定性和金属离子及化学试剂等方面研究该酶的酶学性质,通过体外试验研究其溶血栓作用,并通过灭活纤溶酶原的方法分析其溶解纤维蛋白的作用方式。结果:保加利亚乳杆菌异源表达纳豆激酶的最适温度为40℃,在低于40℃时热稳定性较好,最适pH 7.0,pH值在6.0~8.0范围内较稳定。Ca~(2+)、Mn~(2+)、Fe~(2+)促进酶活的效果随浓度的变化而不同,其中Cu~(2+)、Hg~(2+)对该酶起明显的抑制作用,Ag+随浓度的增加抑制效果逐渐显著,而蛋白抑制剂PSMF对纳豆激酶具有明显的抑制作用,说明纳豆激酶为丝氨酸蛋白酶。体外试验表明:该酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而非通过激活纤溶酶原,且该酶具有明显的体外溶栓作用。结论:为纳豆激酶的应用及开发新型功能性乳制品提供了理论基础。     

一株高温酸性淀粉酶产生菌的筛选、鉴定及其酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16SrRNA基因序列分析,将其初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的一株菌,命名为Bacillus thuringiensis Amy-55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应pH值为5.0。在25℃以下,能保持良好的稳定性,Zn~(2+)和Mn~(2+)对该酶有一定的抑制作用,Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)均对该酶活力起到促进作用,其中Fe~(2+)的促进效果最为明显。     

产β-内酰胺酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

该文对上海临港地区分离的1株产β-内酰胺酶的菌株的酶学性质进行研究,并初步提高了酶液保存稳定性。通过结合抗生素平板法初筛和碘量法(定性)复筛,获得产β-内酰胺酶的菌株。通过形态学、生理生化试验和16S rRNA序列分析确定该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),命名为Bacillus cereus B03。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,该酶在4～20℃、pH 5.0～7.5内稳定性较好。Mg~(2+)、Fe~(2+)和Mn~(2+)对酶有不同程度的激活作用,其中Mg~(2+)对酶的激活作用最强。Cu~(2+)、Al~(3+)和Fe~(3+)对酶有不同程度的抑制作用,其中Al~(3+)对酶的抑制作用最强。K~+、Ca~(2+)、Zn~(2+)对酶活力的影响作用不是很大。在无菌粗酶液中添加50 g/L NaCl或100 g/L甘油后,由原酶液的保存5 d剩余相对酶活力93%左右延长到了30 d,稳定性效果提升了6倍。菌株B03所产β-内酰胺酶的酶学性质初步研究表明,该酶具有进一步研究和应用的价值。     

一株地衣芽孢杆菌产凝乳酶酶学性质研究

目的:对地衣芽孢杆菌所产凝乳酶的酶学特性进行研究。方法:在不同的温度、pH值、底物浓度、不同金属离子等条件下测定地衣芽孢杆菌产凝乳酶相对酶活力。结果:地衣芽孢杆菌所产凝乳酶最适凝乳温度为70℃;40℃以上热处理后凝乳活性有不同程度的损失,75℃热处理10min后凝乳酶活性丧失;pH值为5~8时凝乳活性随乳pH值的降低而增强,pH值为7时凝乳酶最稳定;Ca~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)、Al~(3+)对酶活性有一定的促进作用;Li~(2+)、Na~+、Cu~(2+)、Zn~(2+)对酶活性有抑制作用;底物浓度最适为250 g/L、Ca~(2+)的最适浓度为0.014 g/L。     

嗜热地衣芽孢杆菌植酸酶的原核表达及酶学性质研究

将地衣芽孢杆菌SR01(Bacillus licheniformis SR01)的植酸酶phy基因重组于表达载体p GEX-4T-3中,导入大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)构建工程菌p GX1143,并得到了高效表达。对其酶学性质的研究表明:该酶最适反应p H为5.0,最适反应温度为55℃,具有广泛的p H稳定性和较好的热稳定性;Co~(2+))、Li~+、Mg~(2+))和Ba~(2+)对酶活性有促进作用,Cu~(2+)、Pb~(2+)、Fe~(2+)、Ag~+、SDS对酶活性有不同程度的抑制作用,并且Pb~(2+)、Fe~(2+)和SDS对酶活性的抑制作用较强烈;此外,该酶还具有非常好的抗胰蛋白酶水解能力和部分抗胃蛋白酶水解的能力。     

1株产高温糖苷酶菌株的筛选鉴定及酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温葡萄糖苷酶的高产菌株,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的1株菌,命名为Bacillus sp.Gly﹣55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为45℃;所产葡萄糖苷酶最适酶活温度为65℃,最适反应pH值为4.0,该酶在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、K~+、Fe~(2+)、Cu~(2+)对该酶有一定的抑制作用。     

牦牛酸奶酪中高产乳糖酶菌株分离鉴定及其酶学性质

为获得藏区牦牛酸奶酪中的产乳糖酶活力高的菌株,采用含X-gal的培养基进行初筛,从购买的10份样品中筛选到10株产乳糖酶细菌;发酵复筛后,发现其中RTM-111菌株的产酶活力最高。综合形态学特征、生理生化实验及16S rDNA序列分析,确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对该菌株所产乳糖酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为50 ℃,最适pH为7.5。稳定性实验表明,该酶在温度40~50 ℃、pH6.5~8.0时具有较高稳定性。金属离子Na+、Mg2+和Mn2+对酶活性具有较强的激活作用,而Cu2+、Zn2+和EDTA对酶活有显著的抑制作用。枯草芽孢杆菌RTM-111产乳糖酶活力高、酶的性质稳定,具有潜在应用价值。     

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

【目的】从不同来源的样品中筛选产木聚糖酶的菌株,并对其进行菌种鉴定和酶学性质研究。【方法】以自制木聚糖为唯一碳源,采用平板透明圈方法筛选产木聚糖酶的菌株,结合菌株的形态特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,并对菌株所产木聚糖酶进行酶学性质研究。【结果】筛选到的44株有透明圈的菌株中27株具有产木聚糖酶能力,其中B659菌株产酶能力最高;经鉴定B659菌株为同温层芽孢杆菌;B659菌株所产木聚糖酶的最适反应温度55℃,最适反应p H值6.5,在37℃、p H 8~10的条件下保温2 h,仍具有78%以上的酶活力以及较好的耐碱性。10 mmol/L K+和1mmol/L Fe~(2+)对该酶具有促进作用,Mn~(2+)、Cu~(2+)和Co~(2+)对该酶具有明显的抑制作用。【结论】筛选到具有较好耐碱性的木聚糖酶高产菌株——同温层芽孢杆菌B659。     

地衣芽孢杆菌角蛋白酶kerA基因的异源表达及性能研究

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) ATCC16580中克隆得到角蛋白酶基因kerA,将其构建在芽孢杆菌表达载体p LIYU-2上,再转化到解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) TCCC111018中,构建出高产角蛋白酶重组菌株TCCC111018/p LIYU-2-kerA。重组菌株在羽毛发酵培养基中12h内即可将羽毛全部降解,在摇瓶发酵培养基中36h酶活力达到1 361. 54U/m L。重组角蛋白酶最适温度为65℃,最适p H值为9,在40～60℃和p H值9～11范围内具有良好的稳定性。蛋白电泳(SDS-PAGE)分析表明,重组角蛋白酶分子质量约为31kD。Na~+,K~+、Ca~(2+)及Mg~(2+)能显著促进角蛋白酶活力,Cu~(2+)和Fe~(3+)对重组角蛋白酶有明显的抑制作用。高效液相色谱(HPLC)分析显示,羽毛酶解液中以缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸为主,另外也含有较多的酪氨酸和胱氨酸,游离氨基酸浓度为14. 59μmol/m L。     

解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的条件优化及酶学性质研究

为了优化解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的条件,在单因素试验的基础上,利用响应面法分析发酵条件,并研究葡甘聚糖酶的酶学性质。结果表明,解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的最佳培养基成分为葡萄糖40 g/L、酵母粉9 g/L、硫酸铵0.8 g/L;最佳发酵条件为温度30℃、发酵时间80 h、接种量8%(体积分数)、装液量100 m L/250 m L,在此条件得到的葡甘聚糖酶活力可达2 509 U/m L。该葡甘聚糖酶的最适反应条件为50℃、pH 7;在30～40℃、p H 3～7酶活力稳定; Al~(3+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)等离子对葡甘聚糖酶有抑制作用,Mn~(2+)有激活作用。     

产α-L-鼠李糖苷酶细菌Bacillus velezensis的筛选及酶学性质研究

L-鼠李糖苷酶广泛应用于食品加工、医药及医药前体的制备。研究从海洋样品中筛选产α-L-鼠李糖苷酶的细菌,对菌株进行鉴定,并对α-L-鼠李糖苷酶粗酶性质进行测定。通过透明圈平板筛选法从海州湾海域海泥样品中筛选获得一株产α-L-鼠李糖苷酶的细菌菌株DTC03。通过形态学特征、生理生化特性,以及16SrDNA序列的扩增与分析,将菌株DTC03鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。对菌株DTC03α-L-鼠李糖苷酶粗酶液酶学性质进行测定,该酶最适催化温度和pH分别为40℃和pH7.0;在50℃范围内保持1h后,剩余酶活力高于50%;在pH6.0～8.0的缓冲液放置12h后,仍有60%以上酶活。金属离子Ba~(2+)和Al~(3+)对酶有显著激活作用,而Ni~(2+)、Cu~(2+)和Cd~(2+)对酶有显著抑制作用。目前尚未见Bacillus velezensis产α-L-鼠李糖苷酶的报道,研究结果为该酶的进一步研究奠定实验基础。     

白酒酒糟中产纤维素酶细菌的分离筛选和酶学性质研究

从白酒酒糟中获得产纤维素酶细菌,利用刚果红平板初筛、摇床发酵复筛等手段进行分离筛选,结合形态学、分子生物学鉴定及生理生化特征对菌株进行分类鉴定,并对其酶学特性进行了研究。结果表明,从酒糟中共筛选得到16株产纤维素酶菌株,其中YS10-2酶活力最高,羧甲基纤维素(carboxy methyl cellulose,CMC)酶活力为36. 73 U/m L,经鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。其胞外纤维素酶最适反应温度为50℃、最适p H值为5. 0,具有一定的热稳定性,在弱酸性的条件下较稳定,金属离子Ca~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)对酶活力有促进作用,而Cu~(2+)和Ba~(2+)则抑制酶活性,纤维素酶的最适反应底物为CMC。     

普鲁兰酶的分离纯化及部分酶学性质

对盐球菌(Halococcus sp.)Z1、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)所产的普鲁兰酶粗酶液的耐热耐酸性进行了比较研究,并采用(NH4)2SO4盐析、透析、DEAE-Sephadex A25阴离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤对Halococcus sp.Z1所产普鲁兰酶进行分离纯化,并测定了其部分酶学性质。结果表明Halococcus sp.Z1所产普鲁兰酶在低于65℃和pH4.0~7.5范围内有很好的稳定性,最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0~5.4,相对分子质量为8.17×104,Km值为0.24 mg/mL。     

一株产酯酶海洋细菌的筛选及酯酶性质的研究

在培养基中添加三丁酸甘油酯和橄榄油等特异底物,以罗丹明B作指示剂,从海水中筛选出产酯酶的菌株LJ-7。生理生化鉴定该菌株为芽孢杆菌。发酵Bacillus LJ-7,研究其酯酶的酶学性质表明:此酯酶为碱性酯酶,最适作用温度和pH分别为40℃和8.0,K+和Mn2+对酯酶酶活力有强烈的抑制作用,而Cu2+和Fe2+对酶活的促进作用明显。     

温度、pH及金属离子对大连虾蛄消化酶活性影响

以大连虾蛄为原料,从肌肉及消化腺中提取消化酶(蛋白酶,淀粉酶),研究其酶学性质。实验结果表明,(1)大连虾蛄肌肉中蛋白酶最适温度为50℃,最适p H为8,反应激活剂为Mg~(2+)、Ca~(2+)和Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(2+)。(2)消化腺中蛋白酶最适温度为40℃,最适pH为6,EDTA对其有抑制作用,反应激活剂为Ca~(2+)、Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(2+)。(3)大连虾蛄肌肉中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为7,反应激活剂为Mn~(2+),在浓度为20mmol/L时,激活作用最大,抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+)。(4)消化腺中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为7,EDTA对消化腺淀粉酶有抑制作用,反应激活剂为Mn~(2+)和Ca~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(2+)。     

温度、pH及金属离子对丹东对虾消化酶活性影响

以丹东对虾为原料,从肌肉及消化腺中提取消化酶(蛋白酶和淀粉酶),研究其酶学性质。结果表明:(1)丹东对虾肌肉中蛋白酶最适温度为50℃,最适pH为8,反应激活剂为Mg~(2+)、Ca~(2+)和Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(2)消化腺中蛋白酶最适温度为50℃,最适pH为9,EDTA对其有抑制作用,反应激活剂为Ca~(2+)和Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(3)丹东对虾肌肉中淀粉酶最适温度为30℃,最适p H为7,反应激活剂为Mn~(2+),在浓度为20 mmol/L时,激活作用最大,抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(4)消化腺中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为8,EDTA对消化腺淀粉酶有抑制作用,反应激活剂为Mn~(2+)和Ca~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+)。     

云南莴笋尖酪氨酸酶分离纯化及酶学性质

为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源,为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考,选取云南莴笋尖为实验材料,通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得电泳纯的酪氨酸酶,并对纯化后的酪氨酸酶进行部分酶学性质研究。结果表明,云南莴笋尖中酪氨酸酶的比活力为20.62 U/mg,分子质量约为995.40 k D,亚基分子质量约为65.23 k D。最适反应温度和最适反应p H值分别为60℃和8.0,在p H 6.0~8.0及20~40℃范围内较稳定。最适条件下,以左旋多巴为底物的K_m值为1.567 mmol/L,vmax为0.037 6 μmol/(min·L)。乙醇、异丙醇、正丁醇对该酶活性有不同程度的抑制作用;甲醇、Co~(2+)、Mn~(2+)、Pb~(2+)、Ag~+、Cd~(2+)、Ba~(2+)、Ca~(2+)对该酶活性有不同程度的激活作用,Co~(2+)、Mn~(2+)对该酶具有显著的激活作用,低浓度的Zn~(2+)、Cu~(2+)、草酸、抗坏血酸对该酶有激活作用,高浓度时有抑制作用。尿素、EDTA、Li~+、K~+、Mg~(2+)对该酶活性影响较小。