温州市食品中沙门菌污染状况及特征分析

目的了解温州市食品中沙门菌的污染状况,分析分离的沙门菌血清型分布、耐药性及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行菌株分离鉴定及血清学分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,PFGE法进行分子分型。结果 6类食品2 039份样品中,37份样品检出沙门菌,检出率为1.8%,其中生禽肉和生畜肉检出率较高,分别为6.9%(20/290)和3.4%(10/290)。37株沙门菌分属16种血清型,居前三位分别为鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌和肠炎沙门菌。81.1%(30/37)的菌株对17种抗生素产生不同程度的耐药,呈现24种耐药谱,多重耐药率为56.8%(21/37)。PFGE图谱分为31种PFGE带型,呈多态性。结论沙门菌在温州市食品中存在一定的污染率,耐药情况形式严峻,PFGE图谱的聚集性与沙门菌的血清型有一定的联系,与耐药谱之间的关联性并不明确。     

2005—2012年宁波市食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因和多位点序列分型研究

目的了解宁波市食源性金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素基因分布和分子分型特征。方法收集2005—2012年宁波市食品中金黄色葡萄球菌菌株,利用聚合酶链式反应(PCR)检测肠毒素A、B、C和D基因(sea,seb,sec和sed),对肠毒素基因阳性菌株利用多位点序列分型(MLST)进行分子分型。结果 2005—2012年共分离菌株190株,肠毒素基因阳性菌株为41株,阳性率为21.58%。4种肠毒素基因阳性率分别为7.37%(14/190)、5.26%(10/190)、8.95%(17/190)和5.79%(11/190),其中13株菌株具有两个及两个以上肠毒素基因。41株菌株可分为12个序列型(ST),以ST5、ST6、ST188和ST1为主,共占75.61%(31/41),在进化树上主要形成4个分支。结论 2005—2012年宁波市食品中金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因频率较高,需加强监测。肠毒素基因阳性菌株与中国其他地区食品株在分子分型上存在较大差异。     

北京市朝阳区食物中毒相关金黄色葡萄球菌病原学分析

目的 了解2017年北京市朝阳区11株食物中毒相关金黄色葡萄球耐药性、耐药基因、毒力基因及分子分型。方法 依据GB4789.10-2016对甲、乙饭店留样食品、餐具及厨师手涂抹样品进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;荧光定量PCR法检测耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see;纸片法与微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行溯源分析。结果 甲、乙饭店留样食品、餐具涂抹及厨师手涂抹样品共检出11株金黄色葡萄球菌;耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see均未检出;青霉素100%耐药,四环素、氯霉素耐药率分别为27.3%、9.09%,未发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株;PFGE分型显示：甲饭店餐具涂抹菌株、手涂抹菌株、乙饭店所有菌株为3种带型。 结论 甲乙饭店分别为两起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件,皆为携带菌株的厨师污染餐具及食品引起,菌株具有较高耐药性。     

苏州市食源性金黄色葡萄球菌耐药分析及基因分型

目的 对苏州市2014~2017年分离的食源性金黄色葡萄球菌进行耐药谱和分子分型分析, 初步建立PFGE(pulsed-field gel electrophoresis)分型数据库。方法 采用微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, SAU)对19种常用的抗生素的耐药性, 采用Sma I进行酶切, 脉冲场凝胶电泳进行分子分型。菌株指纹图谱用BioNumerics v6.6软件进行分析。结果 81株SAU中检出10株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistance Staphylococcus aureus, MRSA), 检出率12.3%。有72株菌存在不同程度的耐药, 耐药率达到88.9%, 其中对青霉素的耐药率最高(82.7%), 其次是氨苄西林(66.7%), 其后是克林霉素和红霉素(均为50.6%)。耐受3种和3种以上药物的多重耐药菌株共38株, 多重耐药率达46.9%。MRSA的多重耐药率高于甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(methicillin-sensitive Staphylococcus aureus, MSSA), 差异具有统计学意义(P<0.05)。除8株菌不可被PFGE分型外, 其余73株菌可以被分为37个不同型别, 其中有4个优势型别共27株菌, 在可分型菌株中占比达37.0%。这些同源菌株分离自不同时间和地点, 有些还存在一定程度的变异。结论 食源性金黄色葡萄球菌耐药现象普遍存在, 多重耐药率较高, PFGE型别较为多样但有优势型别存在, 耐药谱和PFGE型别关联性较差。     

校园周边熟食中金黄色葡萄球的分离及肠毒素基因检测

了解校园周边熟食中金黄色葡萄球菌的污染及其肠毒素基因的分布情况。采集校园周边农贸市场及其路边小摊的熟食样品89份,采用国家标准GB4789.10-2016和PCR方法进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌株进行21种肠毒素基因检测。结果表明共分离出71株金黄色葡萄球菌,样品中金黄色葡萄球菌的污染率为79.78%,其中,农贸市场和路边小摊的熟食污染率分别为80.70%(46/57)和78.12%(25/32);检测的21种肠毒素基因中,sec、see、seh、sel、sep和ses未检出,其他15种基因型被检出,包括3种传统肠毒素基因和12种新型肠毒素基因。71株金黄色葡萄球菌中,46株菌株检出携带肠毒素基因,检出率为64.78%(46/71)。46株携带肠毒素菌株中,sex检出率最高为86.96%(40/46),sei和sem为32.61%(15/46),sen和seo为30.43%(14/46),set为21.74%,seg为13.04%,sea、seb和ser为10.87%,sej和seu为6.52%,sek和seq为4.34%,sed为2.17%。通过本研究发现校园周边农贸市场及路边小摊的熟食中金黄色葡萄球菌污染率和肠毒素基因携带率均较高,新型肠毒素基因检测率高于传统肠毒素基因型,研究结果为金黄色葡萄球菌食品安全提供参考依据。     

鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌污染及耐药性和毒力基因分析

目的 了解鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌的检出情况、耐药性以及毒力基因分布特征。方法 从湖北省襄阳市、十堰市、随州市三地共采集303份食物样品进行金黄色葡萄球菌筛查,通过聚合酶链式反应(PCR)法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的鉴定和毒力基因检测,并用K-B纸片扩散法进行耐药性测定。结果 303份样品中共有41份检出金黄色葡萄球菌,阳性率为13.53%,其中生肉制品检出率最高(23.91%,22/92)。在产肠毒素菌株中以携带产肠毒素基因sea的菌株最多,占87.80%(36/41)。携带表皮剥脱素基因eta和中毒性休克综合征毒素基因tst的菌株分别占97.56%(40/41)和7.32%(3/41)。同时携带3种及以上肠毒素基因的菌株占17.07%(7/41)。同时含有eta和tst的菌株占2.44%(1/41)。药敏结果显示,分离菌株对青霉素、四环素、红霉素和多西环素的耐药率分别为78.05%(32/41)、43.90%(18/41)、31.71%(13/41)和21.95%(9/41),对其他8种抗菌药物的耐药率均<20%。mecA基因检测表明,19.51%(8/41)的菌株为MRSA,且7株MRSA菌株来源于生肉制品和未加调料的素卤菜。结论 鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌具有较高的检出率,而且产毒株较多,并且存在多重耐药现象,相关部门需加强食品安全监测以控制该菌株的流行与扩散。     

一起由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的实验室诊断

目的对一起食物中毒进行相关样品的实验室检测,针对分离病原菌进行分子分型溯源和耐药分析。方法对可疑食品(冰激凌、牛奶)样品、患者呕吐物和粪便标本使用国家标准或其他方法进行沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌和诺如病毒检测。对检出的金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和抗生素敏感性检测。结果从生产冰激凌剩余牛奶及冰激凌样品中检出金黄色葡萄球菌12株,患者呕吐物和粪便标本中检出4株,菌株均产生A+C+E混合型肠毒素,PFGE显示患者呕吐物、粪便、中毒同批冰激凌样品、生产冰激凌用牛奶中检出的金黄色葡萄球菌菌株同源性为100.0%;药敏结果显示,这16株菌株均对青霉素和红霉素耐药。结论本起事件是由冰激凌加工点使用了被金黄色葡萄球菌污染且产生大量肠毒素的牛奶生产冰激凌所致。建议监管部门加强对农村食品小作坊、牛奶供应站等生产经营场所的监管,预防类似事件的发生。     

广州市白云口岸航空食品中金黄色葡萄球菌凝固酶基因分型及肠毒素基因研究

目的对2013—2015年从广州市白云口岸航空食品中分离的金黄色葡萄球菌进行基因分型研究,为食源性金黄色葡萄球菌分子溯源提供基础数据。方法以血浆凝固酶和肠毒素为目标基因,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对9株金黄色葡萄球菌进行基因分型,其中6株为航空食品分离株,1株为配餐车间大门手拭分离株,2株为标准菌株。肠毒素基因检测包括5种传统肠毒素基因(sea、seb、sec、sed、see)和6种新型肠毒素基因(ser、seg、seh、sei、sej、sep)。结果 6株航空食品分离株的血浆凝固酶基因扩增分型结果为2个PCR型,酶切后得3种亚型;肠毒素基因检测结果显示有2株航空食品分离株含有肠毒素基因,检出率为33.3%(2/6),检出的基因为2种传统肠毒素基因(sec、sed)和4种新型肠毒素基因(ser、seg、sei、sej),均同时携带2种以上肠毒素基因。结论血浆凝固酶基因扩增分型结果显示,不同时间、不同采集地点存在相同的基因型,提示金黄色葡萄球菌存在交叉污染的可能性;航空食品分离株共检出6种肠毒素基因,提示金黄色葡萄球菌基因型多样性,应加强其他新型肠毒素基因检测。     

广州市售生猪肉中金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

了解广州市某区猪肉中金黄色葡萄球菌的污染情况、分子分型及其耐药性特征。根据GB 4789.10-2010对样品进行金黄色葡萄球的分离及鉴定,用多位点序列分型法进行分子分型,纸片扩散法进行抗生素敏感试验,采用PCR法验证MRSA并筛选检测I类整合子及相关耐药基因盒。110份生猪肉样品中有34份样品检出金黄色葡萄球菌(30.9%),得到34株该菌,所有菌株共可分成7种序列分型(sequence types,STs),分别为ST6(1/34)、ST7(16/34)、ST9(9/34)、ST59(1/34)、ST239(4/34)、ST2259(2/34)及一株等位基因谱为5-4-1-4-4-6-53的新型ST,34株金黄色葡萄球菌对12种抗生素耐药率分别为对青霉素100%耐药,对四环素、甲氧苄胺嘧啶、红霉素、克林霉素的耐药率分别为88.2%、76.5%、64.7%、61.8%,MRSA检出率为38.3%(13/34),I类整合子的检测率为14.7%(5/34),其中2株菌携带相应基因盒。本次实验显示生猪肉中金黄色葡萄球菌污染比较严重且具有严重的抗生素耐药现象,ST7为主要的序列型号,I类整合子存在于食源性金黄色葡萄球菌中,相关基因盒对菌株耐药发挥作用。     

鲜湿米粉中金黄色葡萄球菌污染状况研究

监测市售鲜湿米粉中的金黄色葡萄球菌的污染情况,并进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA)鉴定和肠毒素分型,为预防湿米粉中金黄色葡萄球菌中毒及食品安全风险积累数据。监测结果为139份样品中有38个样品检出金黄色葡萄球菌。在分离出的38株分离株中,21株鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA),32株携带肠毒素基因。结果表明:湿米粉中金黄色葡萄球菌检出率高,菌株产肠毒素能力较强,存在的食品安全隐患不容忽视。     

Genotype analysis of enterotoxin H-positive Staphylococcus aureus strains isolated from food samples in the Czech Republic

Twenty-eight enterotoxin H-positive Staphylococcus aureus strains isolated from food samples collected in eleven districts of the Czech Republic between 2000 and 2005 were genotypically characterized by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) profiling, spa gene polymorphism analysis, enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence-based PCR (ERIC-PCR) fingerprinting and prophage carriage detection. These strains accounted for about 21% of the food-derived, staphylococcal enterotoxin (SE)-positive isolates. One strain, detected in feta cheese, was implicated in a case of enterotoxinosis. Sixteen of the twenty-eight isolates carried the seh gene alone. The remaining twelve strains harbored the seh gene in combination with other enterotoxin genes, most often the seg and sei genes, followed by the sea, seb, sec and sed genes. Comparison of various genomic profiles resulted in the determination of twenty genotypes designated G-1 to G-20. Two new, to date not defined, spa types (t2000 and t2002) were identified in one strain isolated from raw meat and two strains obtained from prepacked pizza. Evidence has been given that the seh-positive S. aureus isolates from foodstuffs did not originate from a single source or a common ancestor.     

辽宁省2018年食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分子分型及毒力基因的研究

目的 了解辽宁省食源性金黄色葡萄球菌的肠毒素分布情况及基因分型特征。方法 采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)和肠毒素分型方法在不同角度和层次对2018年辽宁省内分离出的18株食源性金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测与PFGE同源性分析。结果 PCR方法及酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法对肠毒素结果显示, 18株菌分别存在SEB、SEC、SED、SEH 4种肠毒素, PFGE聚类分析显示, 18株金黄色葡萄球菌相似系数在60.3%~100%之间。结论 金黄色葡萄球菌均可以用PFGE和PCR进行分型, 都具有较好地分型能力, 辨识度高, 对菌株有很好的溯源性。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因型分布研究

目的 采用PCR法扩增食源性金黄色葡萄球菌中肠毒素基因以了解该菌肠毒素基因携带情况,比较食物中毒和食品监测来源菌株中肠毒素基因检出率差异.方法 合成sea、seb、sec、sed和see五种肠毒素基因特异性引物,用常规PCR方法扩增食物中毒和食品监测来源菌株中各自肠毒素基因,同时采用mini-VIDAS检测食物中毒来源菌株中肠毒素.结果 110株菌株中有30株检出肠毒素基因,检出率为27.3％,肠毒素基因阳性菌株均只检出1种肠毒素基因.其中来自2起食物中毒的14株菌株均检出seb型肠毒素和相关基因,检出率为100％.来源于食品监测样本的96株菌株中有16株检出肠毒素基因,检出率为16.7％,包括sea型4株、seb型2株、sec型4株、sed型6株.结论 在宁波市食品监测中所分离的金黄色葡萄球菌所携带的肠毒素基因主要有sea、seb、sec和sed四型,而seb型肠毒素是引起金黄色葡萄球菌肠毒素所致食物中毒的主要因素.     

Molecular biological characteristics of Staphylococcus aureus isolated from food

A survey was conducted to detect the distributing situation of Staphylococcus aureus in 6 kinds of food and the molecular biological characteristics of the isolates, so as to provide theoretical basis for our food risk monitoring. A total of 205 samples of 6 kinds of food were collected and examined for S. aureus. The GB 4789-2010 (food hygienic inspection method of China), mini VIDAS auto analysis, KB method and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) method were used to detect S. aureus, enterotoxin, drug sensitivity and homology analysis, respectively. The positive rates of S. aureus in the 205 samples were 15.6 % (32 samples), and the positive rates in raw milk were highest (30.0 %), with raw meat and aquatic products next and third (25.0and 12.0 %), cooked meat and milk products (10.0 % and 7.5 %, respectively). No S. aureus was detected in ice creams. With shock culturing in 37 °C for 24 h, 14 strains (43.7 %) produced enterotoxin in the 32 strains of S. aureus. In the drug sensitive tests, in the 32 isolates, 87.5 % were resistant to penicillin; 84.4 % were resistant to ampicillin; 26 (81.3 %) were resistant to tetracycline; 20 (62.5 %) showed resistance to erythromycin. All of the 32 strains were sensitive to trimethoprim sulfamethoxazole, oxacillin, cefoxitin, gentamicin, and vancomycin. No methicillin-resistant S. aureus was isolated from our food samples. PFGE typing showed that S. aureus genotypes profile had significant difference between the strains, indicating diversity contamination of foodborne S. aureus.     

金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因分布及分型研究

目的 对2006-2009年上海市Staphylococcus aureus(S.aureus)食品分离株进行肠毒素基因检测和基因分型研究,以了解肠毒素基因的分布规律及S.aureus的流行特点.方法 利用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因,包括5种传统肠毒素基因(SEA-SEE)和4种新型肠毒素基因(SEG-SEJ);利用脉冲场凝胶电泳法对49株食品分离株进行基因分型.结果 本研究发现49株食品分离株中有19株含有肠毒素基因,16株含有传统肠毒素SEA和SEC,且SEC占93.8％,并检测到新型肠毒素SEG、SEI、SEJ和SEH.PFGE法基因分型显示5株菌不能被分型,其余44株可分为28个基因型,表现为基因型的多样性,且分离自不同时间的菌株具有相同的带型.结论 应加强食品中S.aureus的监测分析,为其引起的食物中毒的预防和控制提供科学依据.     

北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究

分析北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药情况及其分子分型特征,预防和控制由该菌引起的食源性疾病,为临床合理用药提供依据。方法 收集2010—2012年北京地区食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌187株,采用微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对8种常用抗生素的敏感性。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 116株金黄色葡萄球菌表现出对抗生素耐药,耐药率为62.03%,对抗生素的耐药率为红霉素(ERY)45.45%、苯唑西林(OXA)27.81%、克林霉素(CLI)20.86%、四环素(TET)13.90%、氯霉素(CHL)11.76%、环丙沙星(CIP)6.42%、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(TPM/SMZ)5.88%。其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)52株、对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)135株。分离到的MRSA中34株菌表现出多重耐药。全部菌株共分为129种PFGE带型,优势带型不明显。结论 食源性金黄色葡萄球菌的耐药和多重耐药普遍存在,PFGE带型分布分散与耐药谱的关联性较差。     

同一肇事地不同餐次食物中毒现场流行病学调查及肠毒素基因鉴定

目的查明本次食物中毒发生的原因,确认致病危害因素及其来源,控制暴发的扩散和蔓延。方法采用现场流行病学调查方法,开展病例搜索和个案调查,并采集相关样本进行实验室检测及肠毒素基因鉴定。运用流行病学曲线推算潜伏期范围,确定中毒餐次和中毒食品。结果共搜索确诊中毒病例27例,主要临床特征为恶心、呕吐、腹泻,部分病例伴腹痛、头痛、头晕等。中毒餐次为2014年12月10日的午餐和晚餐,中毒食品为烤肉拌饭,致病因子为金黄色葡萄球菌A型肠毒素。烤肉中分离的金黄色葡萄球菌菌株间PFGE图谱相似度100%,具有同源性;RT-PCR鉴定毒素基因为A型肠毒素。结论发生在同一肇事地不同餐次由金黄色葡萄球菌A型肠毒素引起的食物中毒,交叉污染是金黄色葡萄球菌污染来源最重要的传播方式,应加强餐饮行业监管和关键环节控制,防止类似事件的再次发生。