甘草黄酮对大气细颗粒物PM2.5引起肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

目的:研究甘草黄酮对大气细颗粒物PM2.5(SRM 2786)导致的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)损伤的保护作用。方法:实验分为对照组、模型组(125 μg/mL SRM 2786)与不同浓度甘草黄酮给药组(3.125、6.25、12.5、25 μg/mL+125 μg/mL SRM 2786),药物作用24 h后分别用MTT法检测细胞存活率、细胞形态观察、酶联免疫法(Elisa)检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及白介素1β(IL-1β)的含量、各组细胞NO和ROS释放及细胞中SOD活性和GSH-PX含量。结果:相较于对照组,125 μg/mL SRM 2786诱导可减少细胞贴璧生长且显著降低细胞存活率、SOD活性和GSH-PX含量、提高TNF-α、IL-6及IL-1β三种细胞因子的释放及细胞ROS和NO释放(p<0.01);而3.125~25 μg/mL甘草黄酮可使大部分悬浮细胞重新贴璧且显著提高下降的细胞存活率,显著抑制SRM 2786诱导的炎症细胞因子的释放和ROS释放、显著提高SOD活性及GSH-PX含量(p<0.05或 p<0.01),6.25~25 μg/mL甘草黄酮可显著降低SRM 2786导致的NO释放(p<0.05或p<0.01)。结论:甘草黄酮可显著提高由细颗粒物SRM 2786降低的细胞存活率和提高抗氧化酶活性、抑制炎性因子释放及氧化应激,其机制可能与其抗炎性损伤和氧化损伤有关。     

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的 研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法 以巨噬细胞RAW264.7为研究对象, 设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400 μg/mL), 用CCK-8法测定细胞增殖活性, 中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果 与空白组比较, 不同浓度(25~400 μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01), 干预24 h和48 h的增殖活性明显高于干预6 h和12 h的增殖活性(P<0.05); 锁阳多糖(25~ 400 μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05); 干预48 h后, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05); 与空白组和LPS组相比, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论 锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

虎杖苷对四氧嘧啶诱导的大鼠胰岛细胞损伤的保护作用

目的:研究虎杖苷(Polydatin)对四氧嘧啶(Alloxan)诱导的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞损伤的保护作用。方法:利用细胞增殖实验分别检测四氧嘧啶或虎杖苷对INS-1细胞增殖的影响,确定给药浓度;实验分为空白组、模型组(18 mmol/L四氧嘧啶)和不同浓度虎杖苷保护组(分别给予25、50 μg/mL虎杖苷,同时给予18 mmol/L四氧嘧啶),检测细胞存活率、LDH释放、胰岛素分泌、凋亡相关Caspase-3和Caspase-9的活性、活性氧簇ROS、一氧化氮NO、丙二醛MDA的含量及抗氧化相关超氧化物歧化酶SOD、还原型谷胱甘肽GSH水平。结果:10~30 mmol/L四氧嘧啶处理使INS-1细胞存活率显著降低(P<0.05),18 mmol/L四氧嘧啶处理细胞贴壁数目减少,LDH释放升高,胰岛素分泌量降低,凋亡相关Caspase-3和Caspase-9的活性显著升高(P<0.05),氧化应激相关ROS、NO和MDA含量显著提高(P<0.05),抗氧化相关SOD和GSH水平显著降低(P<0.05)。5~100 μg/mL虎杖苷对INS-1细胞无毒性作用,相较于模型组,25和50 μg/mL虎杖苷能显著提高四氧嘧啶诱导INS-1细胞存活率,改善细胞形态,降低LDH活性,增加胰岛素分泌量,抑制凋亡相关Caspase-3和Caspase-9酶活性,抑制四氧嘧啶诱导的氧化损伤,提高抗氧化相关酶活力(P<0.05)。结论:虎杖苷对四氧嘧啶诱导的INS-1细胞损伤有显著保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激及凋亡有关。     

三七冻干粉及其活性组分对小鼠1型辅助性T细胞分化和活性的影响

目的:观察三七冻干粉及其有效成分对小鼠CD4+T细胞向1型辅助性T(Th1)细胞分化的影响,探究三七作为药食同源药物改善机体免疫力的可能作用机制。方法:提取C57BL/6小鼠脾细胞并分选出CD4+T细胞进行培养;分为空白对照组,三七冻干粉低、中、高剂量组(160、320、640 μg/mL)和三七总皂苷低、中、高剂量组(5、10、20 μg/mL),加入对应药物48 h后,采用CCK-8法筛选三七冻干粉及三七总皂苷的最佳给药浓度并检测二者对细胞活力的影响,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中 IFN-γ的变化。结果:与对照组相比,三七冻干粉组和三七总皂苷组的细胞因子IFN-γ水平,IFN-γ mRNA和T-bet mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:三七冻干粉及其活性成分均能抑制CD4+T细胞向Th1细胞分化。     

辐照红景天乙醇提取物的抗氧化作用及美白作用研究

目的:探讨60Co-γ射线辐照处理对红景天乙醇提取物抗氧化及美白作用的影响。方法:本试验所用红景天经不同剂量(5、10、20、30 kGy)的60Co-γ射线辐照处理后,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、2,2'-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除率及铁离子还原能力(FRAP)、酪氨酸酶抑制实验、小鼠B16黑色素瘤细胞实验,评价辐照红景天提取物的抗氧化活性及美白活性。结果:与未辐照组相比,辐照组红景天提取物的抗氧化活性及美白活性均增加,其中20 kGy辐照组红景天提取物效果最佳,清除DPPH自由基的IC₅₀值为3.75 μg/mL、清除ABTS自由基的IC₅₀值为44.88 μg/mL、铁离子还原能力FRAP值为(1.90±0.05) mmol/mg、抑制酪氨酸酶的IC₅₀值为244.10 μg/mL、能够有效降低小鼠黑色素瘤细胞中黑色素的合成,并在浓度为0.50%以下时无细胞毒性。结论:20 kGy的60Co-γ射线辐照处理红景天乙醇提取物的抗氧化活性最强,并具有良好的美白功效。     

油茶皂苷提取物对HepG2细胞凋亡的影响

探究油茶皂苷提取物对肝癌组织细胞(HepG2)的凋亡的影响,以进一步促进油茶皂苷资源的高值化利用。以油茶粕中油茶皂苷提取物为试材,以体外培养的HepG2细胞为对象。实验分为对照组、阳性对照组(30 μg/mL 5-氟尿嘧啶)、处理组(油茶皂苷5、30、50 μg/mL),以细胞存活率(凋亡率)和细胞内SOD、GSH-PX、MDA及其相关凋亡基因水平为综合评价指标,评价其抗癌效果的强弱。结果表明:当加入油茶皂苷对细胞处理12 h后,50 μg/mL浓度的油茶皂苷对细胞的存活率只有28.61%,较空白对照组降低了71.39%;此时细胞凋亡率为10.73,较模型组提高了157.93%。细胞内SOD水平(13.13 U/mg)、GSH-PX水平(44.03 U/mg)较对照组降低了64.40%、47.71%,且存在明显差异(P0.05);而MDA含量显著升高,与对照组(1.28 nmol/mg)相比增加了201.20%。此时细胞Bcl-2、Cdkl、P13K、mTOR、VEGF基因的相对表达量较模型组降低了57%、65%、55%、37%、49%,细胞Bax、P53、caspase-3基因的相对表达量较模型组升高了51%、76%、74%。上述各指标均与阳性对照30 μg/mL 5-氟尿嘧啶处理组的效果基本一致。这说明油茶皂苷对HepG2具有较好的凋亡作用,且效果与常用抗癌药物5-氟尿嘧啶相近,可进一步将其开发成天然有效的抗癌产品并应用于市场中。     

阿里红多糖对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症 反应的影响

目的 探讨阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide, FOPS)及多糖组分(FOP-a)对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用。方法 采用Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)炎症细胞模型, 将BV-2细胞分为空白组、炎症模型组(加40 μg/mLAβ25-35)、不同浓度的FOPS及FOP-a干预组(6.25、12.5、25 μg/mL)。在倒置显微镜下观察细胞形态, 酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞上清中IL-6及单核细胞趋化因子(MCP-1)分泌量; Western blotting法测定NF-κB及IκBα蛋白表达量。结果 Aβ25-35诱导后小胶质细胞出现阿米巴样状态, 通过不同剂量FOPS及FOP-a干预, 能明显改善Aβ25-35对BV-2细胞造成的损伤, 与模型组比较, FOPS及FOP-a可提高细胞存活率。ELISA实验结果显示与空白组比较, 模型组IL-6及MCP-1的分泌量增加, 与模型组比较, FOPS及FOP-a均能减少IL-6及MCP-1的分泌量, 差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示, 与空白组比较, 模型组细胞上调NF-κB-p65蛋白表达、减少IκBα的蛋白表达, 与模型组比较FOPS及FOP-a均能减少NF-κB-p65和上调IκBα的蛋白表达。结论 阿里红粗多糖及多糖组分均能减轻Aβ25-35诱导的BV-2细胞的炎症作用, 其中FOPS浓度为12.5 μg/mL、FOP-a浓度为25 μg/mL时效果最佳。     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。     

西青果多酚对甲基苯丙胺诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究西青果多酚对甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及机制。方法:实验分为对照组、模型组(3 mmol/L METH)和不同浓度西青果多酚组(25、50、100、200 μg/mL西青果多酚+3 mmol/L METH),给药处理24 h后检测细胞存活率、细胞凋亡、细胞DNA损伤、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力以及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等。结果:与对照组相比,3 mmol/L METH能极显著降低PC12细胞存活率(P<0.01),显著降低SOD和GSH-Px活力(P<0.05),显著增加胞内MDA含量(P<0.05),极显著增加细胞凋亡率、ROS含量和DNA损伤(P<0.01);与模型组相比,50~200 μg/mL西青果多酚能极显著抑制METH诱导的PC12细胞存活率和SOD活力的降低(P<0.01),显著抑制GSH-Px活力下降(P<0.05),极显著抑制METH导致的细胞凋亡、DNA损伤、胞内MDA和ROS含量增加(P<0.01)。结论:西青果多酚对METH诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与西青果多酚抑制METH诱导的氧化应激,缓解DNA损伤相关。     

金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1 μg/mL)CMC和低浓度(0.1 μg/mL)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。     

原花青素B2诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

本研究旨在探讨原花青素B2（procyanidin B2,PCB2）对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及其机制。采用噻唑蓝法分析PCB2在不同浓度和不同处理时间下对MCF-7细胞存活率的影响;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2＋浓度变化并观察Hoechst 33342染色后的细胞凋亡形态;采用流式细胞分析仪检测PCB2对MCF-7细胞凋亡率、周期、胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及线粒体膜电位变化的影响;通过Western blot检测PCB2对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果表明,当浓度在10～80 μmol/L范围内时,PCB2能显著降低MCF-7细胞的存活率（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,处理24、48、72 h时对MCF-7细胞存活率的半抑制浓度分别为114.82、57.15 μmol/L和55.64 μmol/L。PCB2能显著增加MCF-7细胞凋亡率、胞内ROS水平（P＜0.05）、细胞核荧光强度,并破坏Ca2＋平衡,同时显著降低线粒体膜电位（P＜0.05）,并将细胞周期阻滞在G0/G1期进而诱导细胞凋亡。PCB2可上调Bax、细胞色素c、Caspase-12和Caspase-3蛋白的相对表达水平,下调Bcl-2蛋白相对表达水平。综上可知,PCB2具有抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体和内质网介导的凋亡通路、周期阻滞和细胞内ROS水平增加有关。     

Differential effects of polyphenols-enriched extracts from hawthorn fruit peels and fleshes on cell cycle and apoptosis in human MCF-7 breast carcinoma cells

This study was to investigate the anticancer effects of the peel polyphenolic extract (HPP) and flesh polyphenolic extract (HFP) from hawthorn fruit in human MCF-7 breast cancer cells. It was found that the polyphenol and flavonoid contents of HPP were significant higher than that of HFP. Both HPP and HFP inhibited cell growth in a dose-dependent manner with the IC₅₀ of 88.6 μg/mL and 175.5 μg/mL, respectively, suggesting that HPP was more effective against MCF-7 cells than HFP. Flow cytometric analysis revealed that both HPP and HFP mediated the cell-cycle arrest at the S-phase, and also dose-dependently led to apoptosis of MCF-7 cells via the mitochondrial pathway, as evidenced by the activation of caspase-3 and caspase-9 and the elevation of intracellular ROS production. All these findings indicate that hawthorn fruit, especially its peel, is an excellent source of natural chemopreventive agents in the treatment of breast cancer.     

蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的：探讨蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法：体外培养人 乳腺癌细胞MCF-7,采用噻唑蓝比色法和平板克隆实验检测蒲公英萜醇对MCF-7细胞增殖的影响;Hoechst 33342荧 光染色法检测细胞凋亡的形态变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果：蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞 MCF-7有明显的增殖抑制作用（P＜0.05）;Hoechst染色结果显示,给药后细胞核内染色质凝集,核固缩,可见凋 亡小体;Western blot结果显示,蒲公英萜醇可极显著提高Bax/Bcl-2的比值（P＜0.01）以及上调活化型Caspase-3/9 的表达（P＜0.01）,下调PARP的表达（P＜0.01）。结论：蒲公英萜醇能够明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖, 并通过线粒体途径诱导其凋亡。     

姜黄素对H2O2诱导血小板凋亡的抑制作用及分子机制

目的：血小板凋亡在心血管疾病发生发展过程中发挥重要作用，姜黄素（curcumin，Cur）是存在于姜科植物根茎中的一种多酚类化合物，具有多种生物学活性，但是Cur对血小板凋亡是否具有调控作用尚鲜见报道，本研究通过体外实验探讨Cur对H2O2诱导血小板凋亡的影响及其潜在的机制。方法：用不同浓度（0、1、10、100 μmol/L）的Cur与健康人纯化血小板在体外共同孵育30 min，然后加入H2O2（100 μmol/L）干预血小板60 min，用流式细胞术检测血小板磷脂酰丝氨酸的暴露水平和线粒体膜电位（ΔΨm）去极化水平；用酶联免疫吸附法测定血小板凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9活化水平、胞内总活性氧以及超氧化物生成水平；用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板促凋亡蛋白Bax、Bak和细胞色素c的表达水平。结果：与对照组相比，10、100 μmol/L Cur显著抑制H2O2诱导的血小板磷脂酰丝氨酸暴露和ΔΨm去极化（P＜0.05）；同时，Western blot结果显示，Cur能显著降低H2O2诱导的血小板促凋亡蛋白Bax、Bak和细胞色素c的表达水平的升高（P＜0.05）；酶联免疫吸附测定结果表明，H2O2诱导的血小板Caspase-3和Caspase-9的活化可被10、100 μmol/L Cur显著抑制（P＜0.05）；此外，H2O2处理时，血小板内总活性氧水平和超氧化物水平显著上调，Cur干预可显著抑制胞内总活性氧和超氧化物生成（P＜0.05）。结论：Cur具有显著抑制H2O2诱导的血小板凋亡的作用。     

草苁蓉多糖对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：研究草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡 的抑制作用。方法：利用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）损伤人脐静脉血管内皮细胞制备细胞 氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）比色法检测细胞存 活率,分光光度法检测细胞内丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）水平。采用二氯荧光乙酰乙酸盐（dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用JC-1荧光染色法观察 细胞线粒体跨膜电位（mitochondrial membrane potentials,ΔΨm）水平,采用Hoechst染色和原位末端标记（TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法观察细胞凋亡情况。Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、细胞色素c （cytochrome c,Cyt c）、Bid片段（truncated Bid,tBid）、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。 结果：BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,提高SOD活性与GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制细胞凋亡。Western blot结果显示,BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平,减小细胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有 抑制作用,机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。     

阿魏酸拮抗PM2.5对A549细胞线粒体的损伤作用

研究阿魏酸是否具有拮抗PM2.5致线粒体损伤作用及拮抗机制。实验分为空白对照组、PM2.5(240 μg/m L(损伤组和阿魏酸(80 mmol/L)保护组。通过Mito SOX Red特异性探针和流式细胞仪测定细胞线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Annexin-V/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;JC-1染色法流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;活体细胞线粒体膜通道孔荧光检测试剂盒检测细胞线粒体膜通道孔(mitochondrial permeablity transition pore,m PTP)的开放情况;Western blot法检测caspase-3、caspase-9、含锰金属辅基的超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)和过氧化物酶增殖体激活受体γ共激活因子-1α(subunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γ-coactivator-1α,PGC-1α)相关蛋白表达量。结果显示,与空白对照组比较,PM2.5损伤组的细胞ROS含量、caspase-3和caspase-9表达量及细胞凋亡率升高,线粒体膜电位和m PTP活性及PGC-1α、Mn SOD的表达量降低;阿魏酸预处理后,显著降低了PM2.5造成的A549细胞ROS的含量、细胞凋亡率及caspase-3和caspase-9表达量的升高,显著升高了PM2.5致A549细胞线粒体的膜电位、m PTP的活性及PGC-1α和Mn SOD表达量的降低。阿魏酸对PM2.5致A549细胞线粒体损伤具有明显的保护作用。     

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响

目的:研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric?grape?seed?proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂对人肺腺癌细胞A549抗氧化、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:细胞分为对照组、顺铂(5 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)+顺铂(5 mg/L)组。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase,SOD)活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive?oxygen?species,ROS)含量和细胞凋亡率;Western?blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。结果:顺铂导致A549细胞MDA、ROS含量显著升高(P0.05),GSH含量和SOD活力显著降低(P0.05),O-GSP对细胞内MDA含量、GSH含量、SOD活力无显著影响(P0.05)。O-GSP+顺铂组相对于顺铂组,细胞内MDA、GSH、SOD水平无显著性变化(P0.05),而ROS含量明显降低(P0.05)。顺铂、O-GSP以及两者联用均能显著促进细胞凋亡(P0.05),并且能够显著提高Bax及Bax/Bcl-2值,顺铂和O-GSP+顺铂可显著降低Bcl-2的表达(P0.05),同时激活caspase-3。结论:O-GSP联合顺铂可促进A549细胞的凋亡,其机制与O-GSP的抗氧化作用没有显著联系,而是与两者可共同调节凋亡相关蛋白基因表达有关。     

苦荞茶多糖诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体机制

目的：从线粒体调控机制的角度探讨苦荞茶多糖（tartary buckwheat tea polysaccharide,TBTP）对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法：应用水提醇沉法结合超声辅助技术提取的TBTP处理A549细胞,分为空白对照组和不同质量浓度TBTP处理组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平,采用DHE和Mito SOX染色检测细胞和线粒体活性氧簇水平,采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2、剪切型半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、细胞色素c的水平。结果：TBTP呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞增殖。TBTP处理A549细胞24 h可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。TBTP处理能够显著增加A549细胞和线粒体内活性氧水平,降低线粒体膜电位;同时,TBTP能够增加促凋亡蛋白Bax和剪切型Caspase-3的表达、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进A549细胞线粒体细胞色素c外流。结论：TBTP能够促进活性氧簇生成、降低线粒体膜电位,进而抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

山楂原花青素下调Traf6/NF-κB信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的：探讨山楂原花青素（hawthorn procyanidins,HPC）诱导肝癌细胞Huh-7增殖和促进其凋亡的机制。方法：体外常规培养Huh-7细胞株和过表达Traf6基因Huh-7细胞株,配制0、5、10、20、40、80μg/mL不同质量浓度的HPC,采用细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测HPC对Huh-7细胞和过表达Traf6基因Huh-7细胞增殖的抑制作用,并选40μg/mL作为HPC实验质量浓度;利用实时定量聚合酶链反应检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB?p65、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平;利用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB p65、Bax和Caspase-3蛋白表达水平;利用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测HPC对Huh-7细胞凋亡的影响。结果：HPC质量浓度大于20μg/mL时可以明显抑制Huh-7细胞增殖,并随HPC质量浓度升高Huh-7细胞的相对存活率显著降低（P<0.05）;Traf6蛋白过表达可以促进Huh-7细...     

南昆山毛叶茶对tBHP诱导损伤NIH3T3细胞的保护效果

本研究以南昆山毛叶茶为材料,探讨其水提物对叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）诱导小鼠成纤维细胞NIH3T3氧化损伤的保护作用。以tBHP诱导NIH3T3细胞建立氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）检测试剂盒测定细胞膜完整性。同时,检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量,以及过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）抗氧化酶活性,评价其抗氧化能力,荧光探针测定线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）变化,分光光度法和Western blot检测caspase-3、caspase-9、细胞色素c的表达以探究其损伤保护机制。结果表明,与tBHP组相比,南昆山毛叶茶水提物在25~100 μg/mL浓度范围内,细胞存活率由49.68%显著提高至81.69%;LDH活性由520.70 U/L降低至346.42 U/L。同时,可显著抑制ROS、MDA产生,均为tBHP组的0.02倍,增加GSH含量至tBHP组的3.07倍,提高CAT、GSH-Px、SOD等抗氧化酶活性,分别为tBHP组的1.42倍、2.48倍和1.77倍,提高MMP,抑制caspase-3、caspase-9、细胞色素c的表达。说明南昆山毛叶茶水提物能修复抗氧化系统,抑制线粒体细胞凋亡途径,有效减缓tBHP诱导的NIH3T3细胞氧化损伤。本研究初步揭示了南昆山毛叶茶的抗氧化机理,为这一特殊资源的更广泛开发利用提供了抗氧化功能特性的理论研究基础。