市场销售大豆的转基因检测

在市场随机购买大豆样品,采用试剂盒法提取基因组总DNA,并通过扩增大豆凝集素参照基因验证基因组总DNA的完整性,进一步通过检测转基因常用的Ca MV35S启动子和NOS终止子,分析检测样品是否为转基因品种。检测结果显示市售大豆80%为转基因大豆。     

黄芪干燥根与鲜品总DNA提取方法评价

以采挖的2份新鲜黄芪根为原料,经干燥处理另制成2份干燥根样品。利用传统SDS法和改良CTAB法对干品和鲜品黄芪总DNA提取,为黄芪中药材资源的分子生物学试验提供基础原料。结果显示:改良的CTAB法提取的干品和鲜品总DNA的A260/A280比值在正常范围值内,而SDS法提取的4个样品比值均低于1.6。对8个样品总DNA进行琼脂糖电泳显示,CTAB法提取的样品条带清晰无拖尾现象,鲜品提取的总DNA浓度和质量高于干品。     

低温脂肪酶产生菌Trichosporon pullulans的脂肪酶基因克隆

以产低温脂肪酶菌株5-1为材料,用酶法和CTAB法分别提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测亮带进行比较,结果表明用CTAB法提取的DNA的完整性更好、浓度更高;该菌株通过18SrDNA基因鉴定,即以待检菌株提取的DNA为模板,以18SF、18SR为引物,进行PCR扩增,由18SrRNA的保守序列分析,鉴定为Trichosporon pullu-lans茁芽丝孢酵母属;利用脂肪酶的同源基因片段来设计引物,以该菌株的DNA为模板,进行PCR筛选,克隆脂肪酶基因;并对模板量、退火温度两个重要因素进行优化,初步确定最佳PCR扩增条件为：模板量为DNA原液,退火温度为55～45℃梯度降低。     

绿色木霉PCR模板的制备方法研究

采用经典CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法对绿色木霉总DNA进行制备。利用依据绿色木霉CBH2基因设计合成的一对引物,以上述方法制备的DNA为模板进行PCR反应,证明简化CTAB法是绿色木霉PCR模板DNA制备的最佳方法。     

碘化钾与酚/氯仿提取外周血基因组DNA方法的比较

目的建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法。方法采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定。结果此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定。结论该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备。     

转基因大豆的安全性与核酸检测技术的进展

转基因大豆通常指通过基因技术获得了抗草甘膦农药外源基因的大豆品种,相对于传统大豆,其核酸组成发生了一定的变化.总结了对于转基因大豆安全性的认识--关于转基因大豆的食品安全性,目前在世界范围内仍然存在部分争议.就转基因大豆和食品核酸检测技术的最新进展作了综述,指出聚合酶链式扩增反应(PCR)技术和改进的PCR技术仍然是主流检测技术,但是基因芯片等技术的发展为快速进行转基因大豆的核酸检测提供了更多的选择.     

实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数

目的建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数。方法以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线。提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数。结果分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6%和91.8%,具有良好的特异性。随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象。结论成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法。     

PCR鉴定麻类纤维基因组DNA提取方法

以汉麻原麻韧皮纤维与汉麻纤维两组特殊样品为材料,比较了传统的CTAB法、试剂盒粗提法及磁珠纯化精提法DNA提取方法对提取此类样品的适宜性。结果表明,采用试剂盒粗提法可从汉麻原麻纤维中提取高品质的可用于下一步PCR检测的DNA样本,而麻类纤维的处理工艺对其DNA的影响很大,随着麻类纤维从原麻被加工为精干麻、纱线与织物的过程中,已很难提出高品质DNA样品,虽然存在一定量的DNA,但通过完整性检测发现这类DNA样品已无法满足下一步的PCR鉴定检测的要求。     

一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分特异性引物的研发

目的研发一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分的特异性引物。方法通过比对NCBI中多种物种的脱氧核糖核酸细胞色素b(mitochondrial deoxyribonucleic acid cytochrome b,Cytb)基因全序列,设计针对鼠源性成分的特异性引物。采用DNA提取试剂盒提取鼠DNA,以其为模板,通过设计的特异性引物进行实时荧光PCR扩增,试验重复3次。同时验证该引物的特异性,并对羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品进行检测。结果通过设计的特异性引物进行3次实时荧光PCR扩增的Cp平均值为16.47,标准差为0.430,熔解曲线具有明显的单一主峰,且重合度良好。仅鼠源DNA模板的PCR产物可见115 bp的目的条带,其他物种DNA模板均未扩增出该目的条带。羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品中均未检测出鼠源性成分。结论本实验设计的引物可用于实时荧光PCR法对肉制品中鼠源性成分的检测,且特异性较好。     

双重荧光定量PCR技术在药品微生物检验中的应用

目的建立快速检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法并在药品微生物检测中应用。方法通过设计特异性引物和探针,扩增金黄色葡萄球菌的femB基因和铜绿假单胞菌的DNA gyrase subunit B基因,建立荧光定量PCR方法。将该方法应用于30批次药品微生物检测。结果建立同时检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法,从DNA提取到检测完毕仅需2 h。检测灵敏度为50 copies/μL,特异性为100%。30批次样品检验结果表明该方法与传统细菌培养方法结果一致。结论该法缩短了检测时间,具有良好的灵敏性和特异性,在药品微生物检验中有很好的应用前景。