中高温大曲中一株耐热地衣芽孢杆菌耐受性及产酶特性的初步研究

以中高温大曲中分离得到的一株耐热地衣芽孢杆菌为出发菌株,通过对地衣芽孢杆菌进行耐受性分析,发现其耐盐、耐p H能力较强;能耐14%的盐浓度,能耐p H范围为p H3.0~10.5;耐乙醇能力较弱,不能耐6%的乙醇浓度;耐温度能力较好,最高能耐55℃的高温。通过3种酶鉴定培养基对地衣芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力进行定性鉴定,发现在3种酶鉴定培养基上均能形成透明圈。通过对地衣芽孢杆菌的产酶特性研究发现,在液态培养条件下,地衣芽孢杆菌产淀粉酶和蛋白酶的最适时间均为36 h,最适产酶温度分别为45、40℃,最适产酶转速均为240 r/min;地衣芽孢杆菌产FPA酶和CMC酶的最适产酶时间分别为36、48 h,最适产酶温度均为30℃,最适产酶转速分别为120、90 r/min。     

可降解蓖麻饼粕的蛋白酶产生菌筛选及产酶条件优化

利用酪素平板透明圈法初筛和测蛋白酶活力复筛,从分离自蓖麻饼粕和实验室保存的菌株中筛选出1株高产蛋白酶菌株P3-2,对其产酶条件进行了研究。结果表明,最适碳源为麦芽糖,最适氮源为蓖麻饼粕,Na+对产酶具有促进作用,培养基初始p H值为7.5时出现产酶高峰,最适接种量为4%,培养到36 h和84 h时有两个产酶高峰。经正交试验优化,得到较佳产酶培养基组成:2.0%麦芽糖、1.0%蓖麻饼粕及1.0%Na Cl。     

高产蛋白酶根霉菌株的筛选及酶学性质研究

试验以实验室保存的12株根霉菌为研究对象,通过平板初筛、发酵复筛筛选出产蛋白酶活力强的菌株,并对其蛋白酶的最适反应温度、最适p H值以及金属离子对酶活力影响等酶学性质进行研究。平板初筛中选出了R8、R9和R12三株HC值大的菌株进一步复筛。发酵复筛中测定三株菌的蛋白酶活力依次为R8>R9>R12。进一步对三株菌的蛋白酶性质进行研究,结果表明,几株菌所产蛋白酶的最适温度都在40℃左右,p H值对三株菌蛋白酶活力影响较大,R8和R9在p H5.5~6.0酶活力强,R12在p H6.0~6.5酶活力强。K+、Ca2+、Mg2+对酶促反应有一定促进作用,Cu2+、Zn2+对酶促反应有抑制作用,Na+对酶促反应的影响不大。     

浓香型酒醅中一株高产蛋白酶菌株的鉴定及产酶条件的优化

菌株J-1为实验室保存的高产蛋白酶菌株，分离自浓香型发酵酒醅。经过形态学及分子生物学鉴定菌株J-1为解淀粉芽孢杆菌。以蛋白酶活力为指标，通过单因素实验优化产酶条件得出：选用牛肉膏蛋白胨培养基、摇床转速200 r/min、培养温度37℃的实验条件，解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶活力最高，可达到39.6 U/mL。在最优条件下测定蛋白酶最适p H值和最适温度，结果显示：解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶的最适p H值为4.0、最适温度为30℃，并在此条件下蛋白酶活力为45.3 U/mL。结果表明：通过对解淀粉芽孢杆菌产酶条件的优化，提高了菌株蛋白酶活力。期望通过对糟醅中蛋白酶及其产酶条件的研究，能够为白酒酿造生产提供科学理论指导。     

产蛋白酶酵母菌的选育及酶学特性

在葡萄酒自然发酵过程中,在发酵初期非酿酒酵母菌占主导地位,蛋白酶可将葡萄汁中的蛋白质水解成可溶性肽和氨基酸,利于葡萄酒的澄清和稳定,同时对陈酿期间的酵母自溶也有着重要的作用。本研究通过对新疆赤霞珠葡萄酒发酵过程中非酿酒酵母菌的筛选,得到1株产蛋白酶能力较强的菌株;紫外-微波复合诱变后,酶活力增加1.47倍;经26S r RNA基因序列分析鉴定为葡萄汁有孢汉生酵母XYN162(H.uvarum XYN162);酶学性质研究表明:所产蛋白酶最适p H为8.0,在p H为7.0~8.0时酶活性保持在90%以上;酶的最适作用温度为37℃,在35℃酶活力保持较好;Fe2+、Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Mg2+、Cu2+对酶有明显的抑制作用,说明此菌株所产的蛋白酶对金属离子具有依赖性。以上数据确认该菌为产蛋白酶葡萄汁有孢汉生酵母。     

酱香大曲中产香细菌HMZ-D的分离鉴定及GC-MS产物分析

从茅台镇当地酱香酒厂中筛选出2种酱香高温大曲,通过细菌培养基平板划线分离菌株,再以闻香记录、蛋白酶测定、发酵液酸酯分析为依据,筛选出1株放香好、蛋白酶活力高、酸酯含量较优的菌株HMZ-D,对该菌株进行相关实验分析。结果表明,菌株HMZ-D最适生长温度为30℃,最适生长p H值为7;菌株HMZ-D的固态、液态发酵粗酶液蛋白酶酶活具有不同的最适温度及p H值,金属离子对其的促进及抑制作用也各异;HMZ-D菌株在两种发酵方式下所得产物种类较为相似,但液态发酵所产各化合物含量及各类物质总量要低于固态发酵,从含量上看具有一系列主要特征性产物;通过鉴定,菌株HMZ-D归属为巨大芽孢杆菌。     

海水养殖凡纳滨对虾肠道产蛋白酶菌株的筛选、鉴定

为开发海洋来源的微生物蛋白酶,本文以海水养殖凡纳滨对虾肠道为原料,利用蛋白酶水解圈法初筛得到27株产蛋白酶菌株,测定菌株的透明圈直径与菌落直径比值(即D/d)初步估计其产酶能力,通过发酵液酶活测定复筛得到一株高产蛋白酶菌株,编号为xc10,通过形态学观察、生理生化鉴定、16S r DNA基因序列分析及系统发育树分析进行菌种鉴定,并对其发酵液粗蛋白酶的酶学性质进行了初步探讨。结果表明:菌株xc10为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),蛋白酶的最适温度为50℃;最适p H为7.5;Fe3+、Cu2+、EDTA对该酶有抑制作用,但Zn2+对该酶有激活作用。因此,从海水养殖的凡纳滨对虾肠道中分离得到的产蛋白酶的菌株xc10为一株中性、中温蛋白酶菌,为开发利用海洋微生物蛋白酶在水产品加工的应用提供了理论基础。     

耐高温蛋白酶产生菌的筛选及酶学特性的初步研究

为了提供可用于水产饲料添加剂用途的蛋白酶,从玛珥湖环境中筛选出耐高温蛋白酶产生菌株。通过牛奶平板筛选的方法从土壤中分离获得30株产蛋白酶菌株,并通过摇瓶发酵复筛的方法筛选产酶最高的菌株HL-3,其发酵液的蛋白酶活性高达399.2 U/m L。通过生理生化特征鉴定、16S r DNA基因序列和系统发育分析,初步鉴定菌株HL-3为地衣芽孢杆菌。菌株HL-3所产蛋白酶的最适作用温度为70℃,最适p H为7.0,在90℃保温10 min后酶活力仍可保留75.12%。在离子浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,Cu~(2+)和Mn~(2+)对该酶有较强的抑制作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)对该酶有激活作用,Mg~(2+)和K~+对该酶活性几乎没有影响。预期该菌株产的蛋白酶具有用于水产饲料添加剂的潜力。     

菌株BWL232产蛋白酶特性及生物被膜形成能力研究

蛋白酶是一类重要的水解酶,被广泛应用于皮革加工、洗涤剂等多个领域。分离到一株蛋白酶高产菌株BWL232,经16S r RNA序列分析发现其与Pseudomonas aeruginosa具有99%的同源性。发酵条件优化表明其最适产酶时间为48 h,最适发酵起始p H值为5.08,最适碳源为酵母膏和牛肉膏的复合碳源,最适氮源为胰蛋白胨,蛋白酶活最高可达到245 U/m L,同时该菌株还可以形成生物被膜,在全细胞固定化连续发酵或生物膜法处理含蛋白质类污染物的废水中具有很好的应用前景。     

汾酒曲醅中产高温蛋白酶芽孢杆菌的分离

从汾酒厂的酒醅、酒糟、曲粉、曲块和湿曲5种样品中,分离纯化出42株芽孢杆菌.通过在酪蛋白平板上测定透明圈筛选得到1株在高温下产蛋白酶能力很强的菌株,编号为W20.W20的产酶最适温度为55℃,产酶能力随pH值的升高先增大后减小,在pH值为7时产酶能力最强.蛋白酶标准测定法结果也证明W20是1株高产高温蛋白酶芽孢杆菌菌株.55℃时测得的蛋白酶活力高达708.33U/mL.     

耐盐碱性蛋白酶菌株LK-3的筛选及酶学性质

为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）,并命名为B. stratosphericus LK-3。酶学性质研究结果显示,该酶的最适作用条件为温度35℃、p H 8.5、最适接种体积分数7%,该酶在上述条件下发酵72 h的酶活力为（581.74±0.81） U/mL。此外该酶具有较好的耐盐性,即使在40 g/dL的高饱和盐质量浓度下仍然保持22.03%的相对原始酶活力。蛋白酶的耐盐性是一个有价值的特性,可将其纯化后作为洗涤剂的生物添加剂应用于工业生产。     

一株高产淀粉酶扣囊复膜孢酵母的产酶条件优化及酶学性质研究

对筛选自芝麻香型白酒高温大曲中的1株高产淀粉酶扣囊复膜孢酵母的产酶条件和酶学性质进行研究。在单因素实验的基础上,运用响应面分析,优化得到菌株最佳产酶条件:原料添加量20 g,含水量51%,接种量18%,发酵温度24℃,在此条件下,经72 h固态发酵,淀粉酶活力达到12 297 U/g,比优化前提高了约63. 96%;进一步对菌株所产淀粉酶性质进行初步研究,该淀粉酶最适作用温度为50℃,最适作用p H值为4. 0。实验结果表明,所筛选菌株产淀粉酶能力较强,性能优良,且所产淀粉酶能够适应大曲发酵的酸性高温环境,具有应用于高温大曲生产的潜力。     

高温碱性蛋白酶菌株的选育及酶性质研究

从西藏当雄温泉附近土样中分离到1株高温碱性蛋白酶产生菌株LH 2 2 ,其生长温度范围为4 0～6 5℃,生长pH范围5 0～11 0 ,最适生长pH6 0～8 0 ,经初步鉴定为芽孢杆菌。以LH 2 2为出发菌株,用NTG与紫外线复合诱变的方法,筛选到1株碱性蛋白酶活性显著高于出发菌的正突变株CH 17,其产酶水平比出发株提高4 6 1 2 % ,达到2 380U/mL。该酶的最适作用温度为6 0℃,最适pH值为9 5 ,具有良好的热稳定性,并与去污剂有很好的相容性,酶活性受PMSF的强烈抑制。     

产β-葡萄糖苷酶酿酒酵母菌株的化学诱变选育及产酶条件优化

以实验室保存的一株酿酒酵母菌株UV-45为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)诱变筛选及致死率测定,得到一株产β-葡萄糖苷酶稳定,酶活为74.26 U/m L的突变菌株UV-E-16,与出发菌株相比,其酶活提高了22.74%;通过Plackett-Burman方法对该菌株发酵产酶的相关因素进行分析,得出初始p H、培养温度和接种量为显著影响因子;利用Box-Behnken实验设计和响应曲面法获得其最佳产酶条件为初始p H5.62、培养温度29.5℃、接种量6.12%,该条件下,菌株UV-E-16产β-葡萄糖苷酶酶活为90.91 U/m L。经化学诱变及响应面优化产酶条件,出发菌株UV-45产β-葡萄糖苷酶酶活力提高了50.24%,具有工业化应用的潜力。     

一平浪盐矿产蛋白酶嗜盐古菌的鉴定及其酶学性质

从分离自一平浪盐矿的嗜盐古菌中筛选产胞外蛋白酶菌株,并对所产蛋白酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,2株高产胞外蛋白酶嗜盐古菌YPL20和YPL26为盐矿盐古球菌(Halococcus salifodinae)。YPL20胞外蛋白酶最适反应条件为50℃,p H9.0和0 mol/L Na Cl。YPL26胞外蛋白酶最适反应条件为50℃,p H7.0~9.0和2.5 mol/L Na Cl。它们具有良好的热稳定性、酸碱稳定性和盐度耐受性。Mn~(2+)、Ca~(2+)对YPL20和YPL26的蛋白酶活性均有促进作用,而Cu~(2+)、Zn~(2+)均有抑制作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制YPL20和YPL26的蛋白酶活性,说明YPL20和YPL26的胞外蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。     

短蛸产蛋白酶菌的鉴定、发酵条件优化及酶学性质

采用生理生化特征、16S r DNA分析的方法对分离自短蛸胃肠道产蛋白酶菌株S-3进行鉴定。通过单因素试验、正交设计优化发酵产生蛋白酶条件,对产蛋白酶的粗酶性质进行研究。结果表明,菌株S-3与灿烂弧菌最相似,在以淀粉0.5%,蛋白胨0.5%,酵母膏0.1%,磷酸高铁0.1%为最佳培养基,初始p H 8.0,接种量7%,20℃发酵3.5 d时产蛋白酶活性最高,即121.1 U/m L。所产粗蛋白酶最适作用p H 9.0,最佳作用温度50℃,具有较高的热稳定性及p H稳定性,这为蛋白酶的工业应用提供了理论依据。     

传统发酵酸牛奶中产蛋白酶酵母菌的筛选及产酶条件优化

从新疆哈萨克族传统发酵酸牛奶中分离筛产蛋白酶酵母菌菌株,并确定了各菌株的产酶能力。试验从新疆塔城地区采集酸牛奶样品,以蛋白酶活性作为筛选指标进行初筛、复筛,得到5株高产蛋白酶菌株并对其产酶条件进行优化。经形态观察及26S rDNA序列分析鉴定菌株D1-3为Pichia kudriavzevii,E1-5为Issatchenkia orientalis,S1-7为Kluyveromyces marxianus,W1-10为Candida parapsilosis,S1-16为Saccharomyces cerevisiae。对其产酶条件优化得出:在最佳产酶发酵液条件下,菌株D1-3最佳产酶活力达78 U/m L、S1-7为79 U/m L、S1-16为55 U/mL、E1-5为82 U/mL、W1-10为64 U/mL,其最适产酶温度为28℃,W1-10为37℃;菌株最适产酶初始p H、接种量和时间分别为5.0、3%、48 h。     

产耐热蛋白酶乳酸菌的筛选、产酶条件及其酶学性质的研究

从内蒙古部分传统发酵乳样品以及酸菜汤中分离到105株乳酸菌,用检测蛋白酶产生水解圈和福林酚蛋白酶活性测定相结合的方法,从中筛选出一株耐热蛋白酶产生菌株WH29-3-1,该菌株经初步鉴定为Enterococcus faecium.同时,对其产酶条件及酶学性质进行研究.结果表明,菌株WH29-3-1是在以葡萄糖为碳源、蛋白胨 牛肉膏 酵母粉为氮源、碳氮比为0.8、pH7.0的最适产酶培养基中45℃、接种量为4%的条件下发酵培养30h,具有最大产酶量13.13U/ml.且K2HPO4、MgSO4有促进蛋白酶产生的作用.由菌株WH29-3-1产生的耐热蛋白酶的最适作用pH值为7,最适作用温度为50℃.结果表明,该菌是一株具有进一步改造利用价值的产蛋白酶菌株.     

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

【目的】从不同来源的样品中筛选产木聚糖酶的菌株,并对其进行菌种鉴定和酶学性质研究。【方法】以自制木聚糖为唯一碳源,采用平板透明圈方法筛选产木聚糖酶的菌株,结合菌株的形态特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,并对菌株所产木聚糖酶进行酶学性质研究。【结果】筛选到的44株有透明圈的菌株中27株具有产木聚糖酶能力,其中B659菌株产酶能力最高;经鉴定B659菌株为同温层芽孢杆菌;B659菌株所产木聚糖酶的最适反应温度55℃,最适反应p H值6.5,在37℃、p H 8~10的条件下保温2 h,仍具有78%以上的酶活力以及较好的耐碱性。10 mmol/L K+和1mmol/L Fe~(2+)对该酶具有促进作用,Mn~(2+)、Cu~(2+)和Co~(2+)对该酶具有明显的抑制作用。【结论】筛选到具有较好耐碱性的木聚糖酶高产菌株——同温层芽孢杆菌B659。     

一株产蛋白酶不动杆菌的分离与酶学性质

以脱脂奶粉或羊毛粉为唯一碳氮源,从环境样品中筛选蛋白酶产生菌,首次获得一株高产蛋白酶的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)E9,初步发酵优化显示,该菌株的最适发酵产酶温度35℃,培养基初始p H 6.0,接种量为质量分数4%,培养时间30 h;发酵培养基:蔗糖10 g/L,牛肉膏15 g/L,K_2HPO_4·3H_2O 7 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgCl_2·6H_2O 1 g/L。酶学性质初步研究表明,不动杆菌E9所产的蛋白酶属于中性蛋白酶,最适作用温度50℃,最适pH 8.0,在p H5.0~8.0及40℃以下时具有良好的稳定性,酶反应动力学参数Km为7.067 mg/m L,Vmax为966.7μg/(m L·min)。