PHA、Con A和PWM激活的人血淋巴细胞的辐射敏感性比较

采用~3H-TdR掺入法和羟基磷灰石层析法,比较了~(60)Coγ射线照射后PHA、ConA、PWM激活的人血淋巴细胞的转化、DNA链断裂及其修复。结果表明,受照后这3种细胞转化受抑,在0～8Gy范围内,剂量效应呈双相线性关系,其中PWM细胞对射线敏感程度最低。3种细胞受照后DNA发生链断裂,在0～30Gy范围内,与剂量呈线性关系,三者之间无显著差异。受15Gy照射后,3种细胞在37℃条件下能修复DNA断链,10min内修复很快,30min修复到高峰,但修复不完全,修复后DNA分子发生再断裂。PWM细胞DNA修复率最高。淋巴细胞转化对辐射的敏感性可能与DNA断链的修复能力有关。     

γ线照后PHA、ConA和PWM激活的人血淋巴细胞转化、DNA单链断裂及其修复比较

本文采用~3H-TdR参入法和羟基磷灰石层析法,比较了~(60)Coγ射线照射后PHA、ConA、PWM激活的人血淋巴细胞的转化、DNA单链断裂及其修复,结果表明:受照后淋巴细胞转化受抑,在0—8Gy剂量范围内,剂量效应呈双相线性关系,其中PWM激活的细胞对射线的敏感性最低。三种细胞受照后DNA发生单链断裂,在0—30Gy范围内,与剂量呈线性相关,三者之间无显著差异。受15Gy照射后,细胞在37℃条件下能重接DNA断链,但重接不完全,重接后如经较长时间保温仍会发生再断裂,PWM激活的细胞重接修复率最高。淋巴细胞转化对辐射的敏感性可能与DNA断链的重接修复能力有关。     

~(60)Co γ射线对肿瘤细胞DNA损伤与修复的效应研究

应用碱洗脱法研究了~(60)Coγ射线及其联合高温对L_(5178y)细胞DNA链断裂与修复的影响。结果表明:43℃加温30min能显著抑制γ射线引起DNA断链后的修复,照前比照后加温的增敏效果更好。又应用羟基磷灰石层析法分析得知:HL-60细胞和HL-60(VCR)细胞受照后两者DNA单链断裂程度无显著差异,而DNA断链的修复能力有非常显著的差别,这反映了HL-60(VCR)细胞的重接修复能力强。且细胞的DNA合成功能对γ射线的抗性也较HL-60细胞大,即照后~3H-TdR掺入的受抑制程度低,揭示耐药的白血病细胞对辐射的抗性较大。     

~(60)Coγ射线对肿瘤细胞DNA损伤与修复的效应研究

应用碱洗脱法研究了~(60)Co γ射线及其联合高温对L_(5178y)细胞DNA链断裂与修复的影响。结果表明:43℃加温30min能显著抑制γ射线引起DNA断链后的修复,照前比照后加温的增敏效果更好。又应用羟基磷灰石层析法分析得知:HL-60细胞和HL-60(VCR)细胞受照后两者DNA单链断裂程度无显著差异,而DNA断链的修复能力有非常显著的差别,     

~(60)Coγ射线诱发的中国田鼠V_(79)细胞和小鼠胸腺细胞DNA单链断裂及其修复的研究

本文对~(60)Co γ射线诱发的中国田鼠肺成纤维细胞(V79)和小鼠离体胸腺细胞 DNA 单链断裂及其重接修复进行了实验研究。实验结束表明,两种细胞 DNA 单链断裂的程度分别在30Gy 和10Gy 剂量范围内与剂量呈线性相关;V79细胞 DNA 单链断裂的重接修复包含有快修复和慢修复过程;在不加血清的 TC199培养液中 V79细胞 DNA 断链仍能重接修复,而离体小鼠胸腺细胞在不加血清的 TC199或 RPM11640培养液中其 DNA 断链均不能重接修复,表明不同细胞 DNA 断链的重接修复所要求的细胞培养条件不同。     

哺乳动物细胞DNA辐射损伤与修复的研究Ⅱ 羟磷灰石离心-荧光法检测γ-线所致鼠血淋巴细胞DNA链断裂与重接

我们改进了能用于检测不分裂细胞DNA链断裂与重接的羟磷灰石离心—荧光法。证明了鼠血淋巴细胞能将γ—线引起的DNA断链重接。但受30Gy损伤的细胞修复不完全,继续保温至8小时又发生断裂,同时细胞活力下降,再次肯定我们以前提出的观点:即重接DNA分子的再断裂是一种不可逆的生化变化,它可能是细胞死亡的预兆。     

电离辐射对人血淋巴细胞的损伤效应

不同剂量即~(60)Co γ线、中子及X射线照射正常人血后,以丝裂原PHA、ConA、LPS及PWM诱导血内淋巴细胞体外培养转化实验,研究淋巴细胞亚群的辐射损伤效应。实验用~3H-TdR、~(14)C-UR及~(14)C-缬氨酸放射性核素标记化合物示踪技术,观察不同丝裂原诱导人血淋巴细胞的增殖分化动态;电离辐射对细胞内DNA、RNA及蛋白质合成的抑制作用,并比较其辐射损伤效应。结果:(1)不同丝裂原诱导的正常人血淋巴细胞增殖分化特性各异,分属不同的淋巴细胞亚群。(2)实验以DNA及蛋白质合成中,放射性同位素参入CPM值为指标,观察到ConA、PHA诱导的T淋巴细胞亚群,其辐射损伤效应大于LPS、PWM诱导的B淋巴细胞。(3)淋巴细胞受中子照射后的损伤效应大于γ射线及X射线照射。(4)不同丝裂原诱导的正常人血麻巴细胞亚群,受照射后其细胞DNA链断裂修复能力愈强,该细胞的辐射敏感性就愈低。     

抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致DNA链断裂的影响

观察不同剂量γ射线、不同细胞数量和不同浓度的LexA蛋白对DNA链断裂与修复的影响。结果表明,在2—10Gy范围内,照射剂量与DNA断裂程度之间存在良好的线性关系,r=0.881,当细胞浓度为(OD600=0.4—0.6,相当于2×108细胞/mL),细胞液体积为0.1—0.5mL时,细胞DNA含量与相对荧光强度成正相关,结论抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致细胞DNA链断裂无明显的保护作用。     

电离辐射对人血淋巴细胞的损伤效应

不同剂量~(60)Coγ线、中子及X射线照射正常人血后,以丝裂原PHA、ConA、LPS及PWM诱导血内淋巴细胞体外培养转化实验,研究淋巴细胞亚群的辐射损伤效应。实验用~3H-TdR、~(14)UR及~(14)C-缬氨酸放射性核素标记化合物示踪技术,观察不同丝裂原诱导人血淋巴细胞的增殖分化动态;电离辐射对细胞内DNA、RNA及蛋白质合成的抑制作用,并比较其辐射损伤效应。结果:(1)不同丝裂原诱导的正常人血淋巴细胞增殖分化特性各异,分属不同的淋巴细胞亚群。(2)实验以DNA及蛋白质合成中,放射性同位素参入CPM值为指标,观察到ConA、PHA诱导的T淋巴细胞亚群,其辐射损伤效应大于LPS、PWM诱导的B淋巴细胞。(3)淋巴细胞受中子照射后的损伤效应大于γ射线及X射线照射。(4)不同丝裂原诱导的正常人血淋巴细胞亚群,受照射后其细胞DNA链断裂修复能力愈强,该细胞的辐射敏感性就愈低。     

荧光法检测辐射所致肿瘤细胞DNA链断裂与3-氨基苯甲酰胺对重接修复的抑制

采用简化的DNA解旋荧光法(FADU),检测HeLa S3细胞在受到γ射线照射后的DNA链断裂,在10 Gy以内,剂量效应曲线呈线性。ADP-核糖基转移酶特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3AB),在无毒浓度下可以抑制HeLa S 3细胞DNA链断裂重接,并可降低H3La S3细胞照后活存率。3AB单独与HeLa S 3细胞保温,不造成DNA链断裂,同时未见对细胞有毒性反应。3AB可以作为有希望的放疗增敏剂深入研究。     

美洲商陆丝裂原(PWM)诱导淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞的辐射敏感性

应用人血在体外培养,分别用PWM和LPS诱导淋巴细胞,接受各种剂量~(60)Coγ线照射,两种细胞按各种组合混合再培养,并设有各种单项培养作对照,以~3H-TdR掺入反映淋巴细胞的增殖转化。实验结果说明PWM细胞能够激活LPS细胞转化,当一种细胞受照后单独培养或与另一种正常细胞混合培养,其放射性掺入即下降,并随剂量增加而愈益明显、下降趋势均呈现负相关,并分别得到直线回归方程,差异显著性比较说明PWM细胞受照影响更严重。当PWM细胞接受1Gy以上剂量后与正常LPS细胞混合培养即失去激活作用,LPS细胞受照1—2 Gy仍然可被激活,以上提示电离辐射导致机体免疫缺陷,其中PWM诱导的T辅助细胞受损是较重要的。     

小鼠扁桃体免疫细胞受照射后DNA双链断裂损伤修复的忠实性

观察了受照射小鼠瓦尔代尔扁桃体环（WRE）在体细胞出现DNA双链断裂修复的忠实性，用^60Coγ射线照后观察WRE细胞凋亡的最高峰，在此时间点处死小鼠，取WRE细胞分别有脂质体和电穿孔方法介导的基因转染技术，将双标记基因质粒pPMH16导入细胞。研究WRE细胞DNA双链修复的忠实性。结果表明，未照射WRE细胞的抗G418转化克隆有69．75％的gpt基因表达，说明大部分断裂的gpt基因被忠实性地修复；2Gy、4Gy射线照射的WRE细胞的转化克隆只有36．05％和21．50％的克隆能正确表达gpt基因功能，说明WRE细胞照射后DNA双链断裂的修复显著低于正常细胞，且剂量越大，修复的忠实性质越低。脂质体和电穿孔方法介导的基因转染技术可用于原代细胞基因转染的研究，照射后的WRE细胞易发生DNA双链断裂错误重接。     

小剂量辐射对淋巴细胞DNA的影响及适应性反应

应用DNA解旋荧光测定(FADU)法,研究了小剂量辐射对淋巴细胞DNA的影响及其诱导的适应性反应。结果表明,FADU法测得的γ射线所致的淋巴细胞DNA断裂与剂量 呈线性关系,最小检出剂量为0.3Gy;0.5～8.0cGy γ射线对静止期和丝裂原激活后的淋巴细胞双链DNA百分数无影响;小剂量辐射(2.0 cGy)对15Gy γ射线照射所引起的DNA断裂的修复(37℃,15～60min)有促进作用,但对最终修复程度(37℃,120min)无明显提高。小剂量(0.5～4.0 cGy)γ射线照射,均可诱导出淋巴细胞对15 Gyγ射线所致损伤的抗性,以2.0,4.0 cGy的γ射线为诱导适应性反应的最适剂量;大剂量(5～20 Gy)的照射均可显现出小剂量(2.0 cGy)诱导的适应性反应,以15 Gy照射后适应性反应表现最强;3-AB可明显地抑制小剂量辐射诱导的适应性反应。     

小剂量辐射对淋巴细胞DNA的影响及适应性反应

应用DNA解旋荧光测定(FADU)法,研究了小剂量辐射对淋巴细胞DNA的影响及其诱导的适应性反应。结果表明,FADU法测得的γ射线所致的淋巴细胞DNA断裂与剂量呈线性关系,最小检出剂量为0.3Gy;0.5～8.0cGyγ射线对静止期和丝裂原激活后的淋巴细胞双链DNA百分数无影响;小剂量辐射(2.0cGy)对15Gyγ射线照射所引起的DNA断裂的修复(37℃,15～60min)有促进作用,但对最终修复程度(37℃,120min)无明显提高。小剂量(0.5～4.0cGy)γ射线照射,均可诱导出淋巴细胞对15Gyγ射线所致损伤的抗性,以2.0,4.0cGy的γ射线为诱导适应性反应的最适剂量;大剂量(5～20Gy)的照射均可显现出小剂量(2.0cGy)诱导的适应性反应,以15Gy照射后适应性反应表现最强;3-AB可明显地抑制小剂量辐射诱导的适应性反应。     

哺乳动物细胞DNA单链断裂与重接修复的研究

本文运用羟基磷灰石柱层析法对~(60)Coγ线引起的中国田鼠肺细胞(CHL)和615小鼠离体脾细胞DNA单链断裂和重接进行了研究。在1～10Gy剂量范围内,两种细胞DNA单链断裂的程度均与剂量呈线性关系。两种细胞每单位剂量诱发的DNA单链断裂的数量是相似的。CHL细胞DNA单链断裂能迅速进行重接,其重接速率和程度与剂量呈负相关。同时,单链重接与培养条件也密切相关,CHL细胞在无血清培养液中比在含小牛血清培养液中其DNA断链重接速率慢、程度低,而离体的小鼠脾细胞DNA断链在无血清培养液中甚至未见重接修复。     

~(12)C离子辐射对人淋巴细胞端粒长度的影响

目的探讨12C离子辐射对人淋巴细胞端粒长度的影响。方法培养人淋巴细胞Peng-EBV接受12C离子束照射,剂量率0.3~0.5 Gy/min,照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0 Gy。在照射后24、48、72小时收集细胞,提取基因组DNA,采用荧光定量PCR方法检测样本相对端粒长度。结果与对照组相比,照射后48和72小时,各剂量组受照细胞相对端粒长度增加显著。结论12C离子照射可导致培养人淋巴细胞端粒延长,其中1.0 Gy组,照射后24、48、72小时都显著增加,且增加幅度大于0.1、0.5和2.0 Gy组的受照细胞。     

双标记碱性洗脱法研究电离辐射引起的细胞DNA单链断裂与修复

本文应用双标记碱性洗脱法对X射线照射引起的正常人纤母细胞、毛细血管扩张性共济失调症(AT)纤母细胞、AT肿瘤突变细胞DNA单链断裂及重接修复进行了研究。结果提示10GyX射线照射对三种不同类型纤母细胞DNA的单链断裂与各自的不照射对照组比较有显著差别。而三种不同细胞株之间比较则无明显差别。细胞接受10GyX射线照射后在37℃孵箱中孵育15、30和60min可见三种细胞株DNA单链断裂都能立即进行重接修复,60min内大部分已重接,细胞在10Gy照射后加5×10~(-4)mol/L aphidicolin/皿抑制聚合酶α,经37℃孵育60min也有一定程度的修复。     

~(60)Coγ射线单次和分次照射对兔外周血T淋巴细胞DNA合成影响的动态观察

本文报道长耳白兔受单次与分次~(60)Coγ线不同剂量照射后一个月外周血 T 淋巴细胞 DNA 的合成能力。结果表明,单次照射各剂量组均在照后第1天 DNA 合成受抑最严重,照后第3天各组开始恢复,第7天各组都恢复到照前水平。当剂量率、累积剂量均相同,仅分次照射的次数不同时,0.05Gy/d 组受抑恢复比0.10Gy/d 组慢。     

DNA聚合酶β在受照H_(22)肝癌细胞核DNA修复中的作用

本文采用DNA聚合酶α或/和β酶专一性抑制剂(NEM或/和d_2TTP),观察了小鼠腹水型H_(22)肝癌细胞核DNA聚合酶α、β在40Gy γ线照后DNA修复合成中的作用。结果表明:在α酶被完全抑制条件下,照射组在37℃保温60、120min后DNA修复合成均明显高于未受照组(P<0.05、P<0.01);当β酶被完全抑制条件下,照射组与未受照组在37℃保温30、60和120min后DNA修复合成无明显差别(P>0.05);当α及β酶均被抑制时,照射组与未受照组DNA修复合成亦无明显差别(P>0.05)。上述结果证明了在本实验条件下,β酶参与了受γ线照射后肝癌细胞核DNA的修复作用,而α酶则不参与。作者并对上述结果进行了讨论。     

~(60)Coγ线对美洲商陆(PWM)和脂多糖(LPS)诱导的淋巴细胞的效应

应用放射性标记化合物掺入法研究PWM和LPS诱导的淋巴细胞亚群的相互关系,以及在体外或整体受照后的变化规律,进行了三组实验:其一,PWM诱导的淋巴细胞在体外受照后的功能变化;其二,PWM和LPS诱导的淋巴细胞在体外受照后的功能变化,以及鼻咽癌病人接受~(60)Coγ射线治疗后PWM和LPS诱导的淋巴细胞的功能变化实验。以上三组实验都肯定了健康人PWM细胞能够激活LPS诱导的B淋巴细胞的转化,反映了PWM细胞具有T辅助细胞的功能,在整体和体外受照,PWM细胞比LPS细胞对辐射更敏感,都受到显著抑制,而且在两种细胞的协同作用中,PWM细胞占有更重要的地位。