土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

目的 克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体.方法 提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-REH,将重组表达质粒pET -REH转化E.coli BL21(DE3).结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达.酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg.结论 初步证实了存在活性包涵体的观点.     

土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体。方法提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-P.EH,将重组表达质粒pET–P.EH转化E.coli BL21(DE3)。结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达。酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。     

绿豆环氧化物水解酶基因的克隆、分析及表达

环氧化物水解酶可催化制备高光学纯度的环氧化物及邻二醇等高价值手性药物中间体。本研究采用RT-PCR和THSO-PCR扩增侧翼未知DNA序列技术从绿豆(Vigna radiata)中克隆了一种新型环氧化物水解酶Vr EH3的基因Vreh3,Vreh3编码区DNA序列长度为1 178 bp,包含2个142 bp和79 bp的内含子,以及957 bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Vr EH3的理论相对分子质量和等电点分别为36.2×103和5.59;保守的催化三联体为Asp101-Asp262-His297。将Vreh3与表达载体p ET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组Vr EH3。该酶可对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷((R,S)-SO)产生(R)-苯基乙二醇,得率高达79.4%,对映体过量值(e.e.值)为94.7%。     

中国传统发酵食品来源典型小分子脂肪酸酯合成微生物及酶的研究进展

小分子脂肪酸酯类物质是具有芳香气味的一类重要挥发性风味成分,广泛存在于传统发酵食品中,对食品感官和风味具有重要影响。微生物源功能酶是小分子脂肪酸酯合成的重要媒介,传统发酵食品来源的微生物具有多样性,其所携带的催化小分子脂肪酸酯合成的功能酶同样呈现多态性。研究表明,具有小分子脂肪酸酯合成功能的微生物包括细菌、霉菌和酵母菌等,微生物源催化酯合成的酶主要来源于α/β水解酶家族,以脂肪酶、酯酶等为典型代表。微生物源功能酶为酯的合成提供了绿色途径,有助于小分子脂肪酸酯在食品领域的更好应用。同时,酯的酶法合成还促进了小分子脂肪酸酯在制药以及精细化学品等方面的应用。本文概述了传统发酵食品源小分子脂肪酸酯合成微生物及酶的多样性,以及微生物酶法小分子脂肪酸酯合成的研究现状和发展方向。     

宇佐美曲霉环氧化物水解酶基因的克隆与生物信息学分析

环氧化物水解酶(Epoxide hydrolase,EH)是酶法拆分消旋体环氧化物,制备光学活性环氧化物和邻二醇的重要酶之一。通过RT-PCR和新构建的THSO-PCR侧翼未知DNA序列扩增技术,克隆了一种来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的EH基因,命名为Aueh2(GenBank No.KF061095),并对该基因进行了相关生物信息学分析。Aueh2的DNA序列长度为2 481 bp,其中包含了5′端和3′端侧翼调控序列,6个内含子序列和编码cDNA序列。开放阅读框序列长度为1 188 bp,编码395个氨基酸,对应的蛋白质命名为AuEH2;该蛋白质为无信号肽的亲水蛋白质,其理论相对分子质量44.6 kD;其三维结构包含EH典型的"α/β"核心催化结构域和"帽子"结构域,活性中心由催化三联体Asp191、His369和Glu343组成。本课题研究成果为深入研究AuEH2及其应用奠定了基础。     

微生物水解酶类生物合成的模式

当前在食品、发酵工业和医药领域应用的酶,大多数是由微生物产生的水解酶类。本文综述了与微生物水解酶的生产有关的微生物生理学、发酵动力学和酶合成的调节等方面的研究进展。 通过分析、比较微生物生长与水解酶产生的关系,微生物水解酶类生物合成的模式可归纳为四种类型。第一类型为同步合成型:酶的合成与细胞生长同时进行;第二类型为延续后成型:酶的合成伴随着细胞生长而开始,在细胞生长进入平衡期后,酶的合成可延续好几个小时;第三类型为中期合成型:酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始,在细胞生长进入平衡期后,酶合成停止进行;第四类型为滞后合成型:只有当细胞生长进入平衡期以后,酶才开始产生并大量积累。 通过分析、比较微生物水解酶的生物合成模式,可知影响酶生物合成模式的主要因素有:酶对应的mRNA的稳定性、诱导物的特性、分解代谢物阻遏作用和可同化物阻遏作用等。其中,mRNA稳定性高的,所对应的酶的合成属于第二型或第四型;mRNA不稳定,容易分解时,其对应的酶合成属第一型或第三型,不受分解代谢物阻遏和可同比物阻遏的,属第一型或第二型;受分解代谢物阻遏和可同化物阻遏的,属第三型或第四型。根据这些分析和结论,本文还讨论了一些提高酶产率的措施。     

微生物几丁质酶的研究进展

几丁质酶的用途非常广泛,综述了几丁质酶的底物--几丁质,以及其分布和来源,重点讲述了微生物几丁质酶的分类、合成条件、应用、研究进展和前景.     

生物法在制备抗癌药物紫杉醇中的应用

紫杉醇是一种新型高效的抗癌药物,传统的从植物中直接提取法已不能满足人们对紫杉醇的需求.本文综述了生物法在紫杉醇生产中的应用,重点介绍了微生物直接发酵法、酶-化学半合成法制备紫杉醇的研究.     

清香型大曲淀粉水解酶系解析

对清香型大曲中可能存在的淀粉代谢相关酶类及各自催化作用进行全面分析,并从Brenda数据库中搜索酿酒相关的淀粉水解酶,了解不同来源淀粉水解酶类的酶学特征,并从基因组角度分析酿酒微生物合成的淀粉代谢酶类,对酿酒微生物有更深入的认识,为选育理想的酿酒微生物提供理论依据。     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶研究进展

β-1,3-1,4-葡聚糖酶（EC 3.2.1.73）是一类内切型糖苷水解酶,广泛存在于各类微生物及植物中,对谷物β-1,3-1,4-葡聚糖的水解具有重要作用。在食品工业及饲料工业有着广阔的应用前景。目前已有GH16、GH17及GH26 3 个糖苷水解酶家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶结构得到解析。本文针对β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源、性质、结构、功能及应用的国内外研究现状进行综述。