基于超声预处理的脱脂玉米胚芽ACE抑制肽的制备

为了研究超声辅助酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的较优工艺,通过三种超声设备对脱脂玉米胚芽预处理,碱性蛋白酶酶解,酶解液体外模拟胃肠消化,以消化液ACE抑制率和酶解过程中玉米胚芽水解度(DH)为指标对超声预处理和酶解的参数进行单因素逐级优化。实验结果表明,最佳超声工作模式为20~40 kHz聚能式逆流双频交替超声模式;超声工作参数为功率密度120 W/L,超声预处理时间15 min,初始温度30℃,物料浓度5%;酶解条件为加酶量3000 U/g,酶解时间30 min,pH9.0,酶解温度50℃。在此条件下,酶解液的IC₅₀为4.166 mg/mL,比对照组降低了5.08%;胃肠消化液的IC₅₀为3.986 mg/mL,比对照降低了4.44%。制备的酶解产物,经模拟胃肠消化后具有较强的ACE抑制活性。优化获得的制备脱脂玉米胚芽ACE抑制肽的工艺是可行的。     

英红九号茶蛋白ACE抑制肽的制备、氨基酸组成及不同超滤组分的活性评价

以英红九号红茶渣经碱溶酸沉提取的茶蛋白为研究对象,血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验和响应面优化得到茶蛋白ACE抑制肽的最佳制备工艺,并对酶解物进行氨基酸组成分析、超滤膜分离和不同分子量组分的ACE抑制活性分析。结果表明,英红九号茶蛋白ACE抑制肽的最优酶解工艺为酶解温度37℃、3.20 h、p H值7.20、底物质量分数3%、酶底质量比0.40%,在此条件下进行的验证试验ACE抑制率为83.38%,与理论值84.48%较相符。英红九号茶蛋白ACE抑制肽酶解物富含必需氨基酸(33.03%)和对ACE抑制活性有重要意义的疏水性氨基酸(47.20%),且经超滤膜分离所得<3ku组分的ACE抑制活性(IC₅₀=0.85 mg/mL)要显著强于酶解物(IC₅₀=1.37 mg/mL)和>3 ku组分(IC₅₀=2.81 mg/mL)。该研究为食源性ACE抑制肽的研究开发和英红九号茶蛋白的高值化利用提供了理论依据。     

超声辅助酶法制备海参性腺ACE抑制肽及其模拟体内消化稳定性的研究

该研究利用超声波技术（0～500 W,0～35 min）辅助中性蛋白酶（0.5%～5%,1 h～6 h,1 500 U/g～7 500 U/g）水解海参性腺制备血管紧张素转化酶（angiotensin convert enzyme,ACE）抑制肽,再经过模拟体内消化试验分析海参性腺ACE抑制肽的消化稳定性。试验结果表明：随着超声功率、超声时间、底物浓度、酶解时间和酶添加量的增加,ACE抑制率先增加后降低。随超声功率、超声时间和底物浓度的增加,水解度具有相同的变化趋势;随着酶解时间和加酶量的增加,水解度逐渐上升后趋于平稳。根据水解度和ACE抑制率得出可以高效制备海参性腺ACE抑制肽的超声预处理和酶解反应条件：超声预处理功率200 W,时间15 min,底物浓度2%,酶添加量4 500 U/g,酶解时间2 h,海参性腺酶解液的水解度和ACE抑制率均较高,分别为7.81%和73.81%。此条件下制备的海参性腺ACE抑制肽经超滤后进行胃肠模拟消化试验,消化前后海参性腺ACE抑制肽的活性无显著性差异（P＞0.05）,表明其在体内能够表现出良好的稳定性,具有稳定的降血压功效。     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。     

超声预处理辅助酶解玉米胚芽ACE抑制肽的研究

旨在研究不同工作模式的超声预处理对玉米胚芽蛋白酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。以蛋白转化率和高活性肽占比为指标,利用聚能逆流双频、发散三频和对振双频的超声设备,对玉米胚芽粕进行预处理,得到最优的超声预处理模式;采用单因素逐级优化法来确定最佳超声预处理参数;在最优超声处理条件下,优化酶解反应条件。结果表明分子量在300~1000 Da的多肽ACE抑制活性最高,IC₅₀值为0.78 mg/mL;最优的超声模式为20/40 kHz交替双频,最佳超声预处理参数为功率密度100 W/L、底物浓度为8%、超声时间20 min、超声温度30 ℃,酶解条件为加酶量2000 U/g蛋白、酶解时间2.5 h。在最优条件下,蛋白转化率为85.00%,相比于未超声组的73.01%提高了16.42%;高活性肽占比为29.63%,相比于未超声组的26.00%提高了13.96%。因此,逆流双频超声波辅助酶解法能有效提高蛋白转化率和产物ACE抑制活性,有利于ACE抑制肽的制备。     

酶法制备鱼降血压肽的工艺优化及其组分分析

为了开发鲬鱼蛋白,以体外血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过适宜酶酶解鲬鱼蛋白质制备降血压活性肽。根据供试酶的水解进程筛选适宜水解酶,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化水解条件,凝胶过滤层析法测定活性肽相对分子质量分布。结果表明,Alcalase是供试酶中最适的水解酶,最优水解条件为:温度48.9℃,pH7.93,加酶量为32396.6 U/g·pro,固液比1:5 g/mL,水解时间2.5 h。在此条件下,酶解液的ACE抑制率IC₅₀=0.269 mg/mL;酶解物经Sephadex G-15凝胶过滤层析得到三个组分,相对分子质量分别为635、258、67,其中的2号组分(C=0.74 mg/mL) ACE抑制活性相对较高,达到89.09%。     

坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及分子质量测定

用AS.1398 中性蛋白酶酶解制备坛紫菜(Porphyra haitanesis)ACE 抑制肽,并经超滤膜、Sephadex G-15 凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,纯化产物测定其氨基酸组成,并运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子质量。结果显示：坛紫菜酶解液经超滤分离获得分子质量小于2000D 的组分ACE 抑制活性最高,IC50 为0.73mg/mL;该组分进行Sephadex G-15 凝胶层析分离得6 个组分,组分E 的IC50 最小,为0.67mg/mL。组分E 经RP-HPLC 分离得峰6 对ACE 的抑制率最高,达到89.54%;峰6 再次过RP-HPLC,又洗出2 个蛋白峰,说明峰6 并不是单一物质,还需进行多次反复纯化。测定峰6 的氨基酸组成主要含有Tyr、Val 和Phe,同时采用MALDI-TOF-MS 分析发现有8 个主要的质子峰,信号最强的质子峰为m/z 861.17,有4 个峰聚集在m/z 860 左右,说明峰6 平均分子质量大约为860D,推算出紫菜降血压肽含有3 个Val、2 个Phe、1 个Tyr,N 端为Val,可能的排序顺序有18 种。     

超声波预处理酶解制备茶渣蛋白ACE抑制肽及其活性分析

血管紧张素转换酶（Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE）在血压调节中扮演重要角色,抑制其活性有利于维持血压平衡。食源性ACE抑制肽具有安全、易吸收的特点,受到广泛关注。本研究旨在从茶渣蛋白中获得一种具有高ACE抑制活性的新肽。以ACE抑制率为指标,通过对三种超声方式的比较,确定最佳超声方式;以单因素实验为基础,进行响应面优化确定最佳超声波预处理参数;酶解液分离纯化运用超滤的方法,并对截留分子量小于3 kDa组分进行稳定性分析。结果表明,超声波预处理为最佳处理方式,得最优条件为超声功率300 W、超声温度45 ℃、超声时间25 min。在最佳超声波预处理条件下,ACE抑制率为64.8%,相比于未超声组54.1%提高了10.7%;当截留分子量小于3 kDa时,ACE抑制肽的抑制率为82.3%,相比于原始酶解液提高了17.5%。当温度30 ℃升温至90 ℃,ACE抑制肽的抑制率从82.3%降低至78.3%,减少了4.3%;酸碱度、盐溶液变化其对ACE抑制率表现稳定;模拟消化环境中8 h后,ACE抑制率从82.3%降为62.3%。     

猪皮胶原ACE抑制肽的纯化与鉴定

采用超声协同稀碱对猪皮实施预处理后,酶解30 min制得的高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性水解液为原料,采用Sephadex G-15、半制备高效液相色谱分离纯化其中胶原ACE抑制肽并对其序列进行鉴定。结果表明,Sephadex G-15分离胶原ACE抑制肽的最佳分离条件为:样品浓度100 mg/m L;上样量2 m L;流速2 m L/min;洗脱剂为蒸馏水;层析柱为1 m×10 mm的层析柱。在该分离条件下,混合肽被分成AP-I、AP-II两个组分,IC50值分别为19.50、1.01 mg/m L。对抑制活性较强的AP-II进一步采用半制备高效液相色谱进行分离,得到8个组分峰,其中峰2、峰5和峰6的IC50值最小,分别为0.73、0.44和0.4 mg/m L。结合IC50值的大小及半制备收集到样品的量,对峰2和峰6采用LC-MS/MS进行序列分析。结果显示峰2的多肽序列为QGPPGPAGPR(P为Hyp),峰6的序列为AGPPGPPGPA,这两个序列位于胶原蛋白α1链中526?535、730?739位。     

超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响

以水解度、ACE抑制率为指标,并通过电泳、HPLC、红外光谱(FTIR)、热稳定性分析(DSC)研究不同超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响。结果表明,酶解5 min后,超声预处理组酶解液的水解度与未处理组呈现显著性差异(p<0.05),并且ACE抑制率均高于未处理组,说明超声预处理可改变金枪鱼皮胶原酶解模式,加快短时酶解过程中ACE抑制肽的快速释放。电泳和HPLC分析表明,随着酶解过程的进行,10 kDa以下小分子组分含量呈现往复增减变化,超声预处理会加速该过程进行,从而提高其释放效率。FTIR和DSC分析可知,超声处理会破坏鱼皮胶原蛋白内部氢键的平衡,使其三螺旋结构松散,更多酶切位点暴露,说明超声处理能促进短时酶解过程ACE抑制肽的快速释放。     

金枪鱼粉的酶解工艺及其酶解产物功能活性研究

为了对金枪鱼粉进行深加工开发,本文研究金枪鱼粉的酶解工艺,并对其酶解液进行功效性评价。以水解度为指标筛选酶制剂,运用响应面试验优化酶解工艺参数,并对酶解液的总还原力、自由基清除率、酪氨酸酶抑制率、以及对大肠杆菌的抗菌性进行测试。结果表明以碱性蛋白酶酶解金枪鱼粉的最佳条件为料液比1:5(g:mL)、加酶量1×104 U·g-1、温度55℃、时间8 h、pH10.5,在此条件下水解度为29.20%±0.08%、氨基酸态氮含量为7.57 mg·mL-1。酶解液对羟自由基有较好的清除率,且清除率随氨基态氮浓度增加而增强;当氨基态氮浓度为7.57 mg·mL-1时,酶解液的总还原力与0.4 mg·mL-1维生素C接近;酶解液对酪氨酸酶的抑制作用随氨基态氮浓度增加其抑制作用增强,且IC₅₀=3.44 mg·mL-1。酶解液对大肠杆菌也有一定的抑制作用。本研究结果为金枪鱼粉的高值化开发提供了实验基础。     

超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用

为了探索超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用,分别以超声波和微波对芝麻饼粕预处理,超声波辅助酶解,研究了超声波功率、超声波时间、微波功率、微波时间和加酶量对ACE抑制率的影响。结果表明:超声波预处理功率为4 W/m L、预处理10 min、添加1 300 U/g碱性蛋白酶时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。超声波辅助酶解过程中超声功率选择0.5 W/m L、添加1 700 U/g碱性蛋白酶、酶解15 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.96 mg/m L。微波预处理功率为1.33W/m L、微波预处理5 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。     

富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究

以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征.结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23％、底物浓度5.97％、温度39.2℃.该条...     

Optimization of peptic hydrolysis parameters for the production of angiotensin I-converting enzyme inhibitory hydrolysate from Acetes chinensis through Plackett-Burman and response surface methodological approaches

BACKGROUND: Angiotensin I‐converting enzyme (ACE) plays an important physiological role in regulating blood pressure. The elevation of blood pressure could be suppressed by inhibiting ACE. ACE inhibitory peptides derived from food proteins could exert antihypertensive effects without side effects. Acetes chinensis is a marine shrimp suitable for the production of ACE inhibitory peptides. The principal objective of this study was to screen for the significant variables, and further to optimize the levels of the selected variables, for the enzymatic production of ACE inhibitory peptides from Acetes chinensis. RESULTS: Plackett–Burman design and response surface methodology were employed to optimize the peptic hydrolysis parameters of Acetes chinensis to obtain a hydrolysate with potent ACE inhibitory activity. The peptic hydrolysis variables were subject to a Plackett–Burman design for screening the main factors. The selected significant parameters such as pH, hydrolysis temperature and enzyme/substrate (E/S) ratio were further optimized using a central composite design. The optimized conditions were: pH 2.5, hydrolysis temperature 45 °C, E/S ratio 17 800 U kg^?1 shrimp and substrate concentration 200 g L^?1. The results showed that 3–5 h hydrolysis could result in a hydrolysate with ACE inhibition IC₅₀ of 1.17 mg mL^?1 and a high DH of 25–27%. CONCLUSION: Plackett–Burman design and RSM performed well in the optimization of peptic hydrolysis parameters of Acetes chinensis to produce hydrolysate with ACE inhibitory activity. A hydrolysate with potent ACE inhibitory activity and high degree of hydrolysis was obtained, so that the yield of ACE inhibitory peptides in it was high. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

逆流超声辅助酶解法制备大米ACE抑制肽

研究逆流超声预处理大米蛋白对其碱性蛋白酶酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。首先从米渣中提取大米蛋白,以ACE抑制率为主要指标,水解度为辅助指标,运用单因素逐级优化法对酶解反应的底物浓度、时间、温度、加酶量和pH进行参数优化,在此基础上筛选逆流超声模式的最佳超声参数。结果表明最佳酶解参数为底物浓度30 g/L、加酶量(E/S)7.5%、温度50 ℃、pH8.5和酶解时间60 min,此时酶解产物ACE抑制率为45.59%,水解度为21.49%。最佳超声参数为超声频率20 kHz、功率密度170 W/L、时间12.5 min。此时酶解液ACE抑制率达72.24%,水解度为21.64%,相较于未超声组ACE抑制率提高了57.42%,相较于传统超声组,ACE抑制率提高了11.36%。结果表明逆流超声波辅助酶解法能有效提高酶解效率、减少能耗、促进ACE抑制肽制备。     

Angiotensin I‐converting enzyme inhibitory and Ca‐binding activities of peptides prepared from tuna cooking juice and spleen proteases

Tuna cooking juice is a by‐product from the tuna canning industry. In this study, tuna cooking juice was hydrolysed by proteases extracted from the spleen. Tuna cooking juice showed the highest ACE inhibitory and Ca‐binding activities after hydrolysis for 270 and 180 min, respectively. The hydrolysate was further fractionated by ultrafiltration. The permeate exhibited highest ACE inhibitory and Ca‐binding activities when passed through 1 and 5 kDa cut‐off membranes, respectively. Gel filtration chromatography was used to determine the MW of bioactive peptides that exhibited highest ACE inhibitory and Ca‐binding activities. Those peptides that exhibited highest ACE inhibitory and Ca‐binding activities were the MW range of 238–829 Da and 1355–1880 Da, respectively. These results suggest that the tuna cooking juice and the spleen protease extract are a potential source of bioactive peptides that can be utilised as bioactive ingredients in functional food and nutraceuticals.