细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441 深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441 菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6 种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3 倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7 和9 倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。     

4种虫草无性型真菌中核苷类成分比较分析

以已知核苷为标准品,并与冬虫夏草生药作对比,采用反相高效液相色谱法对蝉拟青霉RCEF1081、蛹草拟青霉RCEF0845、戴氏绿僵菌RCEF0772、长座被毛孢RCEF0717菌丝体中主要核苷类化学成分进行了比较分析。结果表明,蝉拟青霉中虫草素和鸟苷含量较高,分别为0.5752mg/g、0.2225mg/g;长座被毛孢中尿苷和肌苷含量较高,分别为3.8024mg/g、4.5146mg/g;戴氏绿僵菌中胸苷和腺苷含量较高,分别为4.9514mg/ g、3.9360mg/g,且均远远高于对照品冬虫夏草生药中的同种核苷含量。     

古尼拟青霉小孢变种的主要有效成分分析

对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864的深层发酵产物进行了有效成分分析,结果表明,菌丝体和发酵液中氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中粗蛋白、总糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0864深层发酵菌丝体和发酵液中均含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等元素,尤以Ca的含量最高;用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对RCEF0864菌丝体和发酵液冻干粉甲醇提取物中的清除自由基活性物质进行了分析,发现2种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0 mg/mL,37℃下保温10 min时,2种提取物对0.4 mg/mL的DPPH自由基的清除率分别为53.86%和59.66%。     

冬虫夏草及其无性型菌株发酵液中核苷类成分的HPLC法定量分析

以已知核苷为标样,利用高效液相色谱法对冬虫夏草生药及冬虫夏草无性型菌株———中国被毛孢RCEF0273发酵液中核苷类化学成分进行定量分析比较,结果表明,中国被毛孢RCEF0273发酵液中含有3种核苷标样,分别为腺苷、尿苷、鸟苷,其含量均高于对照品冬虫夏草生药。因此,RCEF0273发酵液是一个具有极大开发价值的资源,值得深入研究。     

蜂头虫草无性型——蜂头层束梗孢活性成分分析

测定了蜂头虫草无性型——蜂头层束梗孢(Hymenostilbe sphecophila Kob)HS01胞外多糖含量、5种核替代谢量和氨基酸含量。结果表明,胞外多糖含量最高可达1.75 g/L,胞内多糖含量最高可达2.423%;发酵液与菌丝体中均含有尿苷、鸟苷、肌苷、胸腺嘧啶核苷和腺苷5种核苷,其含量均高于对照品冬虫夏草生药;HS01发酵菌丝体与天然虫草生药在氨基酸种类上一致,但氨基酸总量和人体所必须氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药,氨基酸总量为8.330 mg/g。     

细脚拟青霉活性成分分析及清除自由基活性研究

以冬虫夏草生药为对照品,对细脚拟青霉RCEF0441的深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉进行活性成分分析。结果表明：RCEF0441 菌丝体和发酵液冻干粉中粗蛋白和氨基酸总量均明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中多糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0441 深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉中还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca 等元素。用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC 法和DPPH 酶标仪法对RCEF0441菌丝体和发酵液冻干粉的甲醇- 乙酸乙酯混合液提取物清除DPPH自由基活性进行分析,发现两种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/ml,于37℃下保温10min 时,两种提取物对0.4 mg/ml 的DPPH自由基的清除率分别达到61.28% 和81.12%。     

泰山虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分的TLCS分析

以腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、虫草素及次黄嘌呤为指标,测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中相应成分的含量,探索泰山虫草代替天然冬虫夏草开发药物或保健食品的可能性。采用80%乙醇超声提取,在GF254硅胶板上点样后,以薄层色谱扫描法(TLCS)测定上述各种成分的含量。首次证明泰山虫草菌丝体核苷类及次黄嘌呤等有效成分含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤含量分别是冬虫夏草的8.25倍、3.76倍、11.8倍和1.55倍。2种虫草中有效成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤>虫草素。说明泰山虫草可以作为冬虫夏草代用品进行综合开发利用。TLCS法简捷快速,重现性、稳定性良好,能有效地对虫草中的有效成分进行定性定量分析。     

球孢虫草(CCordycepa bassiana)活性威分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较.结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0.球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草.通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据.     

泰山虫草菌丝体液体发酵培养基的优化及其有效成分含量测定

以（NH4）2SO4作为氮源进行单因素试验,通过改变（NH4）2SO4的含量以构成不同的碳氮比,以菌丝干重为指标,确定最佳碳氮比,得出其最佳碳氮比在3．0到4．0之间。以玉米粉、葡萄糖、黄豆粉、酵母膏添加剂为考察因素进行L,（3。）正交试验,确定最佳培养基配方,得到其最佳培养基配比为：玉米粉3．0％,葡萄糖1．5％,黄豆粉1．O％,酵母膏0．8％,菌丝体的最大生长量平均在1．29g／100ml。以薄层色谱扫描法（TLCS）~定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤成分的含量,结果表明：泰山虫草菌丝体核苷类有效成分及次黄嘌呤含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤的含量分别是冬虫夏草的8．25、3．76、11．8和1．55倍。两种虫草中核苷类成分的含量均表现为尿苷〉次黄嘌呤核苷〉腺苷〉次黄嘌呤。     

中国被毛孢菌丝体核苷化合物的HPLC分析

用HPLC法测定中国被毛孢菌丝体中的5种核苷的含量。采用Hypersil GOLD AQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇:0.01 mol/L:KH2PO4=5∶95(体积比)为流动相,流速1 mL/min,检测波长260 nm。结果发现,液体发酵和静置培养的中国被毛孢菌丝体中胞苷含量分别为266.73μg/g和348.79μg/g,尿苷分别为1 718.23μg/g和1 558.99μg/g,肌苷分别为892.64μg/g和573.31μg/g,鸟苷分别为1 370.78μg/g和1 444.30μg/g,腺苷分别为1 296.68μg/g和1 440.83μg/g。5种核苷测定的精密度RSD值介于0.97%~3.75%间、稳定性RSD值范围为2.91%~3.86%、重现性RSD值范围为1.28%~2.91%、回收率范围为91.07%~102.21%。     

蛹拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)—TLC法和酶标仪法对1株蛹拟青霉RCEF0892摇瓶发酵菌丝体及发酵液甲醇-乙酸乙酯[V(甲醇)∶V(乙酸乙酯)=1∶1]提取物清除自由基活性进行了定性和定量分析,发现该菌株发酵液提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达79.92%。同时,以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现,RCEF0892菌株菌丝体提取物具有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系,其对大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为81.39μg/mL。     

冬虫夏草液体发酵培养的研究进展

冬虫夏草是一种名贵的中国传统药用真菌,因其自身众多且独特的药用价值,已成为国内外学者研究的热点.由于野生虫草生长条件的局限性以及人类的过度采集,目前,野生自然资源已经面临枯竭.利用人工发酵冬虫夏草菌来获得与天然冬虫夏草化学组成成分以及药理作用基本相同的菌丝体,成为当下解决虫草资源短缺的一种最可行的方法.本文介绍了冬虫夏草菌株的分离、发酵条件的控制、发酵菌丝体与天然虫草中活性成分的比较以及发酵滤液的应用,为冬虫夏草的液态发酵培养提供参考.     

一株冬虫夏草菌的液态发酵条件研究

以菌丝体干质量、胞内多糖含量及腺苷含量为评价指标,研究了一株冬虫夏草菌的液态发酵条件。确定利用葡萄糖蛋白胨液体培养基发酵生产菌丝体、胞内多糖及腺苷的最佳条件为装液量100 mL/500 mL,接种量3%,温度24 ℃,培养时间4 d,摇床转速140 r/min;试验得菌丝体干质量为17.232 g/L;胞内多糖含量为78.34 mg/g;腺苷含量为633.7 μg/g。