不同功率高强度聚焦超声治疗人胰腺癌移植瘤初步实验研究

【摘要】 目的 观察不同功率高强度聚焦超声（HIFU）治疗人胰腺癌移植瘤的有效性和安全性。方法 建立裸小鼠人胰腺癌YY- 1细胞移植瘤模型,将荷瘤鼠分为低功率HIFU治疗组（200 W,n=10）、高功率HIFU治疗组（300 W,n=10）和空白对照组（n=10）。观察肿瘤体积变化、肿瘤生长速率及治疗不良反应,末端脱氧核苷酸转移酶、生物素dUTP切口末端标记（TUNEL）法检测各组肿瘤细胞凋亡率。结果 低功率组、高功率组肿瘤体积、生长速率均明显低于对照组（P＜0.05）,两治疗组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与低功率组相比,高功率组不良反应增多（P＜0.05）,主要为皮肤灼伤（60%）和声通道损伤（20%）。治疗后7 d、14 d,低功率组和高功率组细胞凋亡率均高于对照组（P＜0.05）,两治疗组间细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 低功率HIFU治疗胰腺癌移植瘤有效,且安全性更好。     

体外不完全射频消融后肝癌细胞上皮-间质转化相关长链非编码RNA差异表达

【摘要】 目的 研究上皮-间质转化（EMT）相关长链非编码RNA（LncRNA）在不完全射频消融（RFA）肝细胞癌（HCC）病灶的差异表达谱变化。方法 采用Huh7细胞47℃水浴加热,获取体外模拟的不完全RFA HCC细胞。镜下及免疫印迹检测Huh7- H细胞EMT改变,Transwell检测细胞迁移与侵袭能力,CCK- 8检测细胞增殖能力。采用LncPathTM Human EMT Array芯片分析Huh7- H和Huh7差异表达的EMT相关LncRNA,RT- PCR验证。结果 镜下显示Huh7- H呈现EMT形态学改变。免疫印迹检测显示Huh7- H细胞上皮表型标志分子E- cadherin表达降低,间质表型标志分子N- cadherin、vimentin表达增加。Transwell迁移及侵袭实验显示,Huh7- H、Huh7穿膜细胞数分别为（138.0±11.8）和（61.0±5.2）、（82.7±39.4）和（33.3±7.8）,Huh7- H细胞迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）。CCK- 8检测显示Huh7- H细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）。LncPathTM Human EMT Array芯片筛选出3个差异表达LncRNA（P≤0.05,变化倍数≥1.5）,即2条LncRNA（FUNDC2P4、RPL27P7）下调,1条LncRNA（MTND4LP14）上调。RT- PCR验证HUH7- H组FUNDC2P4、RPL27P7、MTND4LP14基因表达丰度分别是HUH- 7组的0.137、0.869、1.037倍。临床标本验证LncRNA FUNDC2P4在癌旁组织表达高于HCC组织,HCC组织高于RFA术后残余HCC组织。结论 筛选出不完全RFA后HCC细胞低表达的EMT相关LncRNA FUNDC2P4,为深入探讨该基因功能及分子机制提供了基础。

     

长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1表达对宫颈癌顺铂耐药的影响

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA（LncRNA）尿路上皮癌相关基因（UCA）1表达对宫颈癌顺铂（DDP）耐药的影响。方法 DDP递增剂量和高剂量刺激构建DDP耐药的宫颈癌HeLa细胞模型。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测UCA1在HeLa细胞和HeLa/DDP细胞中表达,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）、细胞计数试剂盒（CCK）- 8和流式细胞术检测HeLa细胞增殖活性,RT- qPCR检测UCA1- siRNA敲除UCA1表达,CCK- 8、EDU和流式细胞术检测HeLa/DDP细胞增殖活性,半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3、p21、生存素（survivin）和cyclin-细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）2表达。结果 UCA1过表达可通过促进宫颈癌细胞增殖及抑制其凋亡诱导DDP耐药。敲除UCA1可显著降低宫颈癌细胞对DDP耐药性。UCA1参与调控宫颈癌细胞凋亡和增殖信号转导通路,通过下调caspase- 3和上调CDK2抑制宫颈癌细胞凋亡,通过提高survivin水平和降低p21水平促进宫颈癌细胞增殖。结论 UCA1在宫颈癌DDP耐药中起重要作用。UCA1表达上调促进宫颈癌细胞对DDP耐药性,可能是未来宫颈癌治疗新策略的潜在靶点。
     

磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1过表达对肝细胞癌进展的影响

【摘要】 目的 研究磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1（PIK3R1）表达对肝细胞癌（HCC）进展的影响。 方法 免疫组化和逆转录- 定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC组织中PIK3R1表达。RT- qPCR和免疫印迹检测不同HCC细胞系中PIK3R1 mRNA和蛋白表达,选择MHCC97H、HCCLM3细胞作为模型研究PIK3R1对HCC进展的影响。溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和流式细胞术评价PIK3R1下调对HCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。蛋白印迹分析评估PI3K/蛋白激酶B（Akt）/mTOR信号传导通路的表达变化。 结果 HCC组织中PIK3R1表达与相邻正常组织相比,显著上调。下调PIK3R1表达抑制HCC细胞系增殖、迁移并促进其凋亡。PIK3R1下调还抑制MHCC97H、HCCLM3细胞中p- PI3K、p- Akt和p- mTOR表达。 结论 HCC中PIK3R1表达显著上调,沉默PIK3R1可抑制HCC细胞系增殖、迁移并加速凋亡,其可能是未来HCC治疗的潜在靶点。
     

舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究舒洛地特（SDX）对氧化型低密度脂蛋白（ox- LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用及其机制。方法 CCK- 8法确定ox- LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧（ROS）检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用。实时荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、小凹蛋白（caveolin）- 1 mRNA表达,免疫印迹试验检测eNOS、caveolin- 1蛋白表达。Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化eNOS（p- eNOS）蛋白表达。结果 100 μg/ml ox- LDL刺激下, HUVEC细胞活力显著下降（P＜0.01）,加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善（P＜0.01）,ROS产生降低（P＜0.01）。SDX可下调ox- LDL损伤HUVEC后caveolin- 1 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）,上调eNOS mRNA和蛋白、p- eNOS蛋白表达（P＜0.05）,明显改善受损HUVEC迁移能力（P＜0.01）。结论 SDX通过调控caveolin- 1/eNOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞。

     

微小RNA- 155通过Notch信号通路对脑缺血-再灌注损伤的影响

【摘要】 目的 探讨微小RNA（miR）在小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）所造成缺血-再灌注（I- R）损伤中的调控作用。方法 构建C57BL/6小鼠MCAO模型,采用氯化三苯四氮唑（TCC）染色和神经功能评分了解脑I- R损伤对小鼠神经功能的影响。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）技术检测miR- 155表达,苏木精-伊红（HE）染色观察miR- 155对脑组织病理学的影响,伊文氏蓝（EB）和脑组织含水量检测观察miR- 155对血脑屏障（BBB）通透性的影响,一氧化氮（NO）含量和内皮型内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达检测评估miR- 155对血管内皮细胞功能的影响,免疫印迹法检测Notch1、Notch1胞内结构域（NICD）、Jagged1和Hes1表达, RT- qPCR检测Notch1和Hes1 mRNA水平,以明确miR- 155在Notch信号通路中的作用。结果 miR- 155缺失提高Notch1、NICD、Hes1表达,降低脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）染色阳性细胞百分比和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3水平;干扰miR- 155表达增加NO产生和eNOS表达,导致脑组织含水量和EB含量下调。miR- 155过度表达使所有这些改变恢复至脑I- R损伤水平。Notch1、NICD、Hes1表达减轻脑I- R损伤状态。结论 miR- 155可通过Notch信号通路阻断正常NO产生和eNOS表达,这一调控机制可能是未来缺血性脑卒中治疗潜在靶点之一。

     

COL4A1在miR- 29b对N2B细胞氧糖剥夺/再灌注损伤保护作用中的调控机制研究

【摘要】 目的 通过构建N2B神经细胞氧糖剥夺（OGD）/再灌注（R）模型验证miR- 29b对神经细胞的保护作用，探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1（COL4A1）在miR- 29b对神经细胞OGD/R损伤保护作用中的调控机制。方法 正常和缺氧条件培养N2B细胞，实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 29b表达。细胞计数试剂盒（CCK）- 8、克隆形成、Hoechst实验，流式细胞术分别检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。免疫印迹双荧光素酶验证miR- 29b靶基因是否为COL4A1；N2B细胞转染miR- 29b mimics，RT- qPCR和免疫印迹检测COL4A1表达。构建COL4A1 3’非翻译区（UTR）野生型和突变型载体、靶基因，设计合成COL4A1，转染N2B细胞，缺氧培养，CCK- 8、克隆形成、Hoechst实验，流式细胞术检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。 结果 OGD/R细胞中miR- 29b表达较正常细胞组降低。在相同缺氧/复氧条件下培养细胞中miR- 29表达上调，细胞增殖能力明显增强，凋亡明显抑制。miR- 29b表达上调抑制COL4A1表达，但转染COL4A1及其对照组后，COL4A1对照组细胞增殖明显高于过表达组，凋亡明显低于过表达组。 结论 miR- 29b对N2B神经细胞OGD/R模型具有保护作用，通过抑制COL4A1表达减轻缺氧对N2B神经细胞的损伤。miR- 29b可通过调节COL4A1表达减少缺血/缺氧再灌注对神经细胞的损伤。

     

磁共振弥散加权成像在125I粒子组织间植入治疗胰腺癌疗效评估中的应用

【摘要】 目的 探讨磁共振（MRI）弥散加权（DWI）成像对125I粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤疗效的评估价值。方法 将人胰腺癌SW1990细胞株接种于BABL/C裸鼠右下肢旁腹股沟区偏背侧皮下,待瘤体长至8 ～ 10 mm进行干预,共有16只裸鼠的成瘤大小适用于实验,分为实验组8只,植入125I粒子,和对照组8只,植入空载粒子。粒子植入前及治疗后2周和2个月时分别行MRI常规扫描及DWI成像。取瘤体标本行组织病理学检查。结果 实验组肿瘤细胞坏死明显,而对照组肿瘤细胞无明显或有少许坏死。裸鼠心、肝、肺、肾及脾脏等组织无明显放射炎症表现。常规MRI成像评价125I粒子治疗胰腺癌疗效的价值有限。DWI显示实验组内整个肿瘤组织的表观弥散系数（ADC）值在治疗前为（0.001 15 ± 0.000 13） mm2/s,治疗后2周为（0.001 29 ± 0.000 038） mm2/s,治疗后2个月为（0.002 08 ± 0.000 14 ）mm2/s,与治疗前相比差异有统计学意义（P < 0.05）。实验组肿瘤实质区的ADC值亦较治疗前及对照组增高,但低于坏死区ADC值。结论 125I粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤可导致肿瘤坏死,并对周围脏器是安全的。用常规MRI及DWI成像观察裸鼠皮下移植瘤可行。DWI对疗效评估有重要价值。
     

射频消融亚致死性温度对肝癌干细胞的影响

【摘要】 目的 研究亚致死温度射频消融（RFA）对肝癌干细胞（LCSC）产生及其相关转录因子表达的影响。方法 利用小鼠Hep1-6肝癌细胞株和肝细胞癌（HCC）患者临床样品，检测LCSC相关标志物和转录因子的表达。结果 不同温度分别刺激Hep1- 6细胞后发现，45℃是不能诱导细胞死亡的亚致死性温度。流式细胞仪（FCM）检测显示45℃处理可引起CD13+、CD44+、CD90+、CD133+ Hep1- 6细胞水平明显上调，提示45℃温度导致Hep1- 6细胞中以上各型LCSC产生增加；实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测显示45℃温度导致CD13、CD90、CD133 mRNA水平明显上调。CD13 mRNA水平在5例HCC患者复发肝癌组织中均明显上调，CD133 mRNA在4例复发肝癌中上调，CD90 mRNA仅在1例复发肝癌中上调；FCM检测显示CD13+ LCSC水平在4例复发肝癌中明显上调，CD133+ LCSC水平仅在1例复发肝癌中上调，提示CD13+ LCSC水平上调与45℃温度关系更密切。RT- qPCR检测显示4例CD13+ LCSC上调的复发肝癌患者13个LCSC相关转录因子中Sox2、Stat1明显上调，FCM检测显示45℃处理Hep1- 6细胞后Sox2、Stat1 mRNA明显上调。用Sox2、Stat1 siRNA分别沉默了Sox2、Stat1基因，表明Sox2、Stat1均参与了45℃温度诱导的CD13+ LCSC产生。结论 RFA治疗中45℃亚致死性温度所致CD13+ LCSC水平增高与Sox2、Stat1表达有关。该结果对肝癌复发研究有一定借鉴意义。

     

子宫肌瘤HIFU术后骶骨MR异常信号的影响因素研究

【摘要】 目的 探讨子宫肌瘤高强度聚焦超声(HIFU)消融术后骶骨MR异常信号的影响因素。方法 回顾性分析2017年3月- 2018年8月初次行HIFU治疗的133例子宫肌瘤患者的盆腔MRI及临床资料，记录子宫肌瘤特征及HIFU治疗参数。结果 36例(27.1%)患者在HIFU术后MRI观察到骶骨异常信号。单因素分析中，骶骨MR异常信号与肌瘤骶骨距离、HIFU治疗总能量和辐照时间相关（P均＜0.05）。多因素logistic回归分析中，肌瘤骶骨距离差异有统计学意义（P＝0.003），OR值为0.918，95%CI 0.868～0.971。 结论 肌瘤骶骨距离、HIFU辐照时间及治疗总能量与骶骨MR异常信号的出现密切相关，且肌瘤骶骨距离是骶骨MR异常信号的保护因素。