穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因的亚克隆及表达

[目的]克隆并表达穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因.[方法]将穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体 pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因.[结果]重组酵母菌在0.5%甲醇中培养144 h后,所提取的酶蛋白具有穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的活性,经SDS-PAGE 分析,确定其相对分子质量为58 kD.[结论]穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因得到了表达.     

皂苷鼠李糖苷酶RhaG和RhaD的酶反应特性研究

[目的]研究皂苷鼠李糖苷酶RhaG 和RhaD 的酶反应特性.[方法]对微生物Absidia sp.G3g 菌产的人参皂苷糖苷酶(RhaG)和Absidia sp.DOd菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)分别进行分离纯化,并对2种提纯酶的分子量和酶性质进行了研究.[结果]RhaG 和RhaD 的酶蛋白分子质量分别为61、56 kDa.RhaG的酶反应最适pH为5.0,pH 稳定范围为3.0-7.0;最适温度为40℃,30～60℃温度稳定性较好;米式常数Km为9.523 mmol/L.RhaD的酶反应最适pH为5.0,pH稳定范围为3.0～7.0;最适温度为40℃,30～50℃温度稳定性较好;米式常数Km为8.834 mmol/L.[结论]该研究为进一步探明2 种酶间的差别奠定了基础.     

暗紫红毛菜ITS序列的测定与分析

[目的]对暗紫红毛菜rDNA内转录间隔区(ITS区)进行序列测定,为其系统发育研究提供新资料.[方法]以产于山西娘子关泉的一株暗紫红毛菜为材料,提取DNA,设计引物,进行PCR扩增,进而测定其ITS区基因序列.[结果]暗紫红毛菜与同科的少精紫菜ITS区同源性为75%,与条斑紫菜ITS区同源性为79%.[结论]ITS区序列进化速率相对较快,种类和地理分布的差异是其序列差异产生的原因.     

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的性质研究

[目的]研究发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的酶学性质.[方法]从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,研究不同温度和pH下的酶活,并确定该酶的最适温度和pH.研究了不同金属离子和不同离子强度(NaCl)对α-半乳糖苷酶酶活的影响.Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax.[结果]α-半乳糖苷酶的最适温度和pH分别为45 ℃、6.0,热稳定温度范围为20～50 ℃,pH稳定范围为5.0～7.0.Na+、K+、Mg2+和Cu2+对α-半乳糖苷酶酶活的影响不大,Zn2+促进酶活,Ba2+对酶活稍有抑制,Hg2+强烈抑制α-半乳糖苷酶的活性.在0～0.25 mol/L离子强度(NaCI)范围内,α-半乳糖苷酶的酶活不受影响.Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax 分别为0.556 mmol/L、1.19 WnoVmin,[结论]该研究为发芽咖啡豆α-丰乳糖苷酶的进一步应用提供理论指导.     

新疆阿拉尔垦区猪嗜血支原体PCR检测方法的建立

[目的]掌握阿拉尔垦区猪嗜血支原体的流行现状.[方法]根据GenBank上发表的猪嗜血支原体16S rRNA基因组序列(U88565)设计1对特异性引物,对采自新疆阿拉尔垦区的样品进行PCR扩增,并将其产物克隆到pBR322载体后测序.[结果]扩增出的片段为0.836 kb.同源性分析结果表明,该序列与猪嗜血支原体参考基因组序列同源性为99.47%,反映出我国分离株与国外株基因同源性较高.[结论]建立了一种猪嗜血支原体PCR检测方法,该方法为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段,并为相关基因的表达及功能研究奠定了基础.     

广州桑树矮缩病植原体secE基因序列分析与蛋白结构预测

[目的]预测广州桑树矮缩病植原体secE蛋白的抗原性.[方法]应用PCR技术从典型矮缩症状的桑树植株总DNA中扩增到约400 bp的特异片段,将此片段克隆后与GeneBank中已报道的5种植原体的secE基因进行序列同源性分析,并对克隆基因所编码的蛋白进行理化性质、二级结构、跨膜区以及前导信号序列分析.[结果]该片段长411 bp,编码136个氨基酸的蛋白.桑树矮缩植原体与洋葱黄化植原体同源性最高,核苷酸和编码的氨基酸序列同源率分别为100%和99%.secE蛋白理化性质预测其理论等电点为9.33;二级结构主要为螺旋,其次为折叠和无规则卷曲,无转角;有3个明显的疏水区,易形成跨膜螺旋;有4个明显的抗原区域.[结论]该secE蛋白具有良好的抗原性.     

固原鸡线粒体基因组ATPase 8基因的克隆及序列分析

[目的]扩增固原鸡(白羽、麻羽、红羽)、肉鸡品种AA鸡及蛋用品种罗曼鸡线粒体ATPase 8(ATP酶第8亚基)基因.[方法]从鸡血液中提取基因组DNA.然后,利用已经公布的鉴别检测鸡的源性成分的特异性引物,PCR扩增线粒体ATPase 8基因并测序.[结果]固原鸡不同品系和AA鸡的ATPase 8基因全序列为165 bp,罗曼鸡为168 bp.[结论]不同品系固原鸡的ATPase 8基因序列与罗曼鸡和AA肉鸡均有较高的同源性,但是与鹌鹑、鹧鸪、鸵鸟、鹅、火鸡的同源性相对较差.     

纹枯病菌诱导水稻表达的WRKY基因克隆及分析

[目的]克隆纹枯病菌诱导的水稻上调表达基因.[方法]对应用抑制差减杂交枝术(SSH)获得的纹枯病菌诱导水稻表达的EST序列K16进行电子克隆,根据电子克隆产物设计引物进行RT-PCR、克隆测序,利用生物信息学技术对克隆产物进行功能预测.[结果]克隆出一个长度为1079bp的序列,结构功能分析显示该基因编码236个氨基酸的蛋白,存在多个功能位点,含有2个典型的WRKY结构域和1个C2H2锌指型结构,该基因与水稻WRKY8、WRKY24和WRKY30基因有较高的同源性.[结论]经电子克隆获得的纹枯病菌诱导表达的基因为典型的WRKY家族基因,该基因可能在水稻抗纹枯病中起重要作用.     

野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析

[目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析.[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序.[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1 252和908 bp.rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525 bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448 和107 bp.[结论]为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础.     

宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因多态性分析

[目的]对宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体生长激素受体(GHR)基因的多态性进行分析,为宁夏黄牛杂交改良选育提供理论参考.[方法]采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对该群体70个个体的GHR基因多态性进行检测.[结果]扩增出了338 bp的目的片段,PCR产物被限制性内切酶Alu I消化后表现出多态性,其中AA基因型频率为75.71%;BB基因型频率为24.29%.[结论]共检测到AA和BB 2种基因型,六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因具有多态性.