抑制食源性致病菌脂肽的分离鉴定及生物学特性分析

从传统香肠中分离拮抗芽孢杆菌菌株,并对菌株所产脂肽进行分离纯化和抗菌特性分析.采取平板对峙法筛选产生抗菌脂肽的芽孢杆菌菌株.抗菌脂肽采用有机溶剂萃取、Sephadex LH-20柱层析、半制备反向高效液相色谱(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP...     

荷叶提取物的分离和纯化

用三种方法对荷叶提取物进行分离纯化,结合薄层层析(TLC)和颜色反应,对各分离组分跟随鉴定。结果表明:高速逆流色谱(HSCCC)分离效果最好,Sephadex LH-20柱层析分离效果次之,硅胶柱层析分离效果最差;荷叶提取物经高速逆流色谱分离纯化,可以得到两种黄酮醇类单体。     

辣木籽抗氧化肽的分离鉴定及其稳定性分析

采用碱性蛋白酶酶解辣木籽蛋白制备抗氧化肽,通过超滤、Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分离纯化辣木籽抗氧化肽,利用LC-MS/MS鉴定其抗氧化肽序列,并分析pH、金属离子、温度对辣木籽抗氧化肽活性的影响.结果表明:当酶解物、超滤物(<3 kDa)、柱层析纯化物的浓度为8 mg/mL时,对应的还原力吸光值分别为0...     

苏木化学成分的研究

目的 研究苏木(Caesalpinia sappan L.)的化学成分.方法 采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、ODS柱层析等技术分离纯化化合物,根据理化性质结合光谱学方法鉴定化合物结构.结果 从苏木乙酸乙酯提取物中分离并鉴定了8种化合物:鸢尾苷(tectorigenin)(1),苏木酮A(sappanone A)(2),3-去氧苏木酮B(3-deoxysappanoneB)(3),苏木查尔酮(sappanehalcone)(4),3-去氧苏木查尔酮(3-deoxysappanchalcone)(5),原苏木素B(protosappanin B)(6),(-)-丁香树脂酚((-)-syringaresinol)(7),表苏木醇(episappanol)(8).结论 化合物1系首次从苏木中分离所得.药理实验结果表明化合物2～4对H2O2所致内皮细胞损伤有显著的保护作用.     

苏木化学成分的研究

目的 研究苏木(Caesalpinia sappan L.)的化学成分.方法 采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、ODS柱层析等技术分离纯化化合物,根据理化性质结合光谱学方法鉴定化合物结构.结果 从苏木乙酸乙酯提取物中分离并鉴定了8种化合物:鸢尾苷(tectorigenin)(1),苏木酮A(sappanone A)(2),3-去氧苏木酮B(3-deoxysappanoneB)(3),苏木查尔酮(sappanehalcone)(4),3-去氧苏木查尔酮(3-deoxysappanchalcone)(5),原苏木素B(protosappanin B)(6),(-)-丁香树脂酚((-)-syringaresinol)(7),表苏木醇(episappanol)(8).结论 化合物1系首次从苏木中分离所得.药理实验结果表明化合物2～4对H2O2所致内皮细胞损伤有显著的保护作用.     

罗望子壳降血糖活性化学成分的研究

本文测定了罗望子壳醇提取物各个活性部位的降血糖活性,发现其正丁醇相活性最高.接着对正丁醇相的化学成分进行分离鉴定,采用大孔吸附树脂(HP-20),正相硅胶柱层析,反相硅胶柱层析(RP-18),以及葡聚糖凝胶(LH-20)等分离手段分离鉴定其主要化学成分.通过<'1>H NMR,<'13>C NMR技术并结合文献对照对7...     

余甘子果实提取物活性成分分离及结构鉴定

以余甘子果实为原料提取其有效成分,经溶剂萃取及柱层析进行初步分离纯化后,得到A、B、C、D、E五个组分,其中组分C、D显现出较高的抑菌性;组分C、D经硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析进一步纯化后,得到五个单体化合物。对这五个单体化合物作抑菌活性实验,发现其中三个具有抑菌性,采用NMR、MS等分析方法对其结构进行鉴定,结果表明,这三个组分分别是：没食子酸(gallic acid)、槲皮素(quercetin)和齐墩果酸(oleanolic)。     

基于NRPS基因筛选鉴定产生环脂肽葡萄附生细菌的研究

本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定为克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、克考氏菌(Kocuria marina)、嗜气芽孢杆菌(Bacillus aerophilus)、类芽孢杆菌(Paenibacillus agaridevorans)。在此基础上,以非核糖体多肽合成酶基因(non-ribosomal peptide compounds synthetase,NRPS)为靶点,筛选到含有目的条带的菌株PTWA2,经系统发育树预测该菌株能够产生环脂肽类化合物。该菌株发酵产物经有机溶剂萃取、常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20等分离手段纯化得到一个单体化合物,采用核磁共振和质谱方法鉴定该化合物为环脂肽Surfactin A。该研究结果为以功能基因定向筛选产生环脂肽化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。     

南瓜籽ACE抑制肽的Plastein反应修饰及分离鉴定

为进一步提升南瓜籽多肽的ACE抑制活性,利用Plastein反应对南瓜籽ACE抑制肽进行修饰,探究底物质量分数、反应温度、反应时间以及3种外源氨基酸添加量对ACE抑制率的影响。采用超滤和Sephadex G-25柱层析等分离修饰产物,并利用LC-MS/MS鉴定肽序列。结果表明：Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数45%,反应温度20℃,反应时间3 h;分别添加亮氨酸、苯丙氨酸或甘氨酸均能显著提升修饰产物的ACE抑制率,其中添加0.5 mmol/g亮氨酸时,修饰产物的ACE抑制率最高,比修饰前提高了24.50百分点;经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,获得ACE抑制率达89.61%的组分,经LC-MS/MS鉴定出76个肽段,固相合成其中4种多肽IFH、IFF、LAAF、DFHPR,其抑制ACE的IC₅₀分别为1.55、2.24、3.79 mmol/L和7.86 mmol/L。综上,Plastein反应修饰可显著改善南瓜籽ACE抑制肽的ACE抑制活性,经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,可获得高ACE抑制活性的南瓜籽ACE抑制肽。     

儿茶素单体分离制备方法

茶叶中含有丰富的儿茶素类物质,占茶叶干重12%～24%,是茶叶中最具生理活性和保健功效的物质。文中对目前国内外纯化制备儿茶素的常见方法进行了综述。常见的儿茶素制备方法包括纤维素柱层析、葡聚糖凝胶(Sephadex LH—20)、硅胶柱层析、吸附树脂柱层析和高速逆流色谱等方法。通过这些方法制备的儿茶素单体纯度不高,仍需结合结晶、制备型液相色谱技术或膜分离技术进行进一步纯化,从而才能获得高纯度的儿茶素单体。在儿茶素单体的制备方法中,每种方法都有相应的优缺点。Sephadex LH—20柱层析分离的量较大,但是分离时间较长,而且Sephadex LH—20柱填料昂贵;高速逆流色谱分离效果较好,得到的儿茶素单体的纯度较高,分离时间相对要短,但是目前市场上只有分析型,分离的量相对少;硅胶材料廉价,但是分离的效果不佳,且分离过程相对繁琐,单体制备量较小;吸附树脂柱层析分离已实现EGCG单体的工业化生产,但在其他儿茶素单体的分离制备上尚不成熟。     

腊肉拮抗菌分离及抗真菌脂肽特性分析

从传统腊肉中筛选拮抗菌株,纯化鉴定新型抗菌物质并对其抗菌特性研究,为抗菌脂肽在食品防腐中的应用提供理论依据。采用抑菌圈法筛选拮抗菌株;通过酸沉淀、硅胶柱层析和半制备反相高效液相色谱分离纯化抗菌脂肽;通过傅里叶红外光谱、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对脂肽鉴定。结果表明,筛选得到12?株拮抗细菌,其中菌株XLP27对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及对1?株酵母菌和4?株霉菌有明显抑菌作用。拮抗菌株XLP27鉴定为短小芽孢杆菌,其抗菌物质主要在稳定期合成,并在发酵60?h时达到最大产量。分离纯化得到单一组分抗菌物质,并鉴定为环状脂肽Iturin?A,其由m/z?1?046.182、1?060.213、1?074.198、1?088.201和1?102.175的5?个同系物组成,对应脂肪酸链长度C14～C18。脂肽具有极高的热稳定性,在40～100?℃下保温30?min活性基本保持不变,在较宽的pH值范围（4～10）内稳定性好,且对所有蛋白水解酶不敏感。菌株XLP27所产抗菌物质主要是脂肽Iturin?A,具有广谱抑菌活性,稳定性良好,有潜力在食品保鲜和农业生物防治领域替代传统抗菌剂使用。     

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱（Sephadex G-10）和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67 株芽孢杆菌。其中8 株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7 种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。     

沙棘果原花青素的分离纯化研究

用大孔树脂、Sephadex LH-20凝胶色谱的方法和反相高效液相色谱分离纯化沙棘果中的原花青素。结果表明：大孔树脂层析法分离纯化沙棘果中的原花青素时使用50％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液中原花青素的含量较高，达71．9％；将经过大孔树脂层析分离纯化的原花青素粗品经Sephadex LH-20柱分离，50％乙醇作为流动相，原花青素粗品可纯化至95％以上。反相高效液相色谱分析发现，从Sephadex LH-20洗脱下来的组分中含有原花青素的二聚体。     

生物表面活性剂生产菌的筛选及鉴定

从原油污染的士样中筛选得到了一株产生物表面活性剂的菌株RDY7-l,经细菌生理生化试验和16SrDNA基因序列分析初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),菌株RDY7-1的主要发酵产物通过离子性检测、糖、氨基酸等组分分析初步定性为脂肽类化合物.     

无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白的分离鉴定和抗菌作用的研究

对无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白进行分离鉴定,并探讨其抗菌作用。通过形态和生理生化特性及16sRNA序列分析方法鉴定菌株。采用滤纸片和牛津杯法抑菌实验研究其抗菌作用。用80%硫酸铵盐析,Sephadex G-100凝胶层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱分离纯化内生菌的胞外抗菌蛋白,通过SDS-PAGE电泳测定其分子质量。WHG1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),它对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、酵母菌、黑曲霉等5种食源性致病菌和食品中常见污染菌均有较强的拮抗作用。WHG1胞外蛋白对大肠埃希氏菌和黑曲霉有较强的抗菌作用,该抗菌蛋白分子质量25～53ku。无花果内生菌WHG1具有产胞外抗菌蛋白的特性。     

贝莱斯芽孢杆菌1-3产表面活性素的纯化、鉴定及表征

从口腔离体牙样品中筛选得到1株具有抑菌作用的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）1-3。通过硫酸铵沉淀、分子筛层析、薄层层析和基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱检测,确定具有抑菌活性的物质是含有14～16个C的环状脂肽Surfactin,其分子质量分别为1 030.642、1 044.660 Da和1 058.677 Da。通过对分离纯化Surfactin的特征研究,结果表明其具有表面活性剂的功能,对食品加工、医疗卫生、畜禽养殖中常见的病原菌具有抑制作用,其中对单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）ATCC 19115的最小抑菌浓度可达4 μg/mL。Surfactin对小鼠红细胞在有效抑菌浓度范围内未显示溶血性,且具有良好的热稳定性（20～100℃）和广泛的pH值（2.0～10.0）适应性,表明其在食品加工、医疗卫生和畜牧养殖中具有良好的应用潜能。     

1 株广谱抗菌活性菌株的筛选鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化

从湖南传统腊肉中分离筛选得到1 株具有广谱抑菌活性的菌株HLR13,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、荧光假单胞菌、藤黄微球菌和肠炎沙门菌等食品中常见的致病菌具有较强的抑制活性。通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌斯皮兹仁亚种（Bacillus subtilis subsp. spizienii）。采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析（Q Sepharose FF）和凝胶过滤层析（Sephadex G-75）等方法对该菌株所产抗菌蛋白进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示纯化后的蛋白为单一条带,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析和NCBI/nr蛋白数据库比对初步确定该抗菌蛋白分子质量为31?494?Da,是枯草芽孢杆菌产生的一种假定蛋白。本实验可为新型天然防腐剂的开发提供一定理论依据。     

原桃胶中1株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质

从天然原桃胶分离到1 株产抑菌活性物质的芽孢杆菌TJ12。其发酵产物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）和串珠镰刀菌（Fusarium moniliforme）有抑菌活性。结合菌落形态、生理生化指标、16S rRNA序列和gyrB序列将TJ12菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。通过硫铵沉淀、有机溶剂萃取、羟丙基葡聚糖凝胶、高效液相色谱分离纯化,得到其主要活性物质。该物质对pH值、温度和3 种蛋白酶（胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶）有较好的稳定性。经电喷雾电离质谱分析,初步鉴定该株地衣芽孢杆菌TJ12的主要抗菌物质为杆菌肽A。