生物质对红球菌属菌株lawq生长和脱硫酶活力的影响

红球菌属菌株lawq是专一性脱硫菌,其脱硫酶系由dszA、dszB和dszC组成,其中关键酶是dszC。文章以脱硫活力作为产脱硫酶系的基准,研究了基本营养物质C、N和S对发酵产酶的影响,实验结果发现最佳的碳源、氮源和硫源分别为甘油、氯化铵和二苯并噻吩(DBT),甘油和氯化铵适宜质量浓度为2 g/L,DBT适宜浓度为0.2 mmol/L;还研究了生物质对菌体生长和脱硫酶活力的影响,实验结果发现,添加VB类物质对菌体的生长和酶活力有不同程度的提高。     

石油脱硫菌 Gordonia sp. WQ-01激光诱变选育及关键酶DszC克隆表达分析

利用脱硫菌株Gordonia sp. WQ-01为出发菌株进行激光诱变育种,考察了不同照射时间和输出功率对菌株的正突变率影响,根据DszC酶活检测、序列比对、空间结构分析以及在大肠杆菌的异源表达研究了突变菌株的关键性能。结果发现,在最适宜诱变条件下（激光照射15 min、输出功率20.0 mW）获得脱硫效率提高28％［0.15 mmol/（L·h）］、有效脱硫时间缩短（36 h）的脱硫菌株,该菌株关键酶DszC活性提高了33.3%。此外,突变菌株脱硫基因dszC的核酸和氨基酸序列、二级结构和三级结构均发生了改变,从而导致酶活显著提高。dszC基因在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导后可以表达出45 kDa大小的DszC蛋白。     

红平红球菌LSSE8–1的培养及其对二苯并噻吩中硫元素脱除的影响

红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)LSSE8-1是一株新分离的专一性脱硫菌，HPLC分析表明该菌能选择性地脱除二苯并噻吩(DBT)中的硫，最终代谢产物是2-羟基联苯(2-HBP). 适宜的初始pH为6.5~9；能利用多种碳源，其中以甘油为最佳，适宜的甘油浓度为8 g/L；2 g/L的乙酸铵是菌体生长和脱硫的合适氮源；二甲基亚砜是提高该菌细胞收率和脱硫比活性的有效硫源.     

燃料油的生物脱硫

从大港油田的污泥中分离出一株能以二苯并噻吩(DBT)为唯一硫源而生长的菌株(Rhodococcussp.EBT-2)。HPLC分析结果表明,EBT-2可专一性降解DBT,生成2-羟基联苯(2-HBP)。以DBT为唯一硫源考察了培养基的初始pH、温度、碳源和氮源等因素对EBT-2生长和脱硫的影响。结果表明,EBT-2的最适初始pH为7.5,最适温度为30℃,最佳碳、氮源分别是葡萄糖和氯化铵。在最适条件下,EBT-2能够在48 h内将DBT从0.25 mmol/L降解到0.03 mmol/L,同时生成0.19 mmol/L 2-HBP。     

固体酸催化FCC柴油氧化脱硫

分别采用沉淀-浸渍法制备了SO_4~(2-)/ZrO_2固体酸催化剂,以30%H_2O_2(质量分数)为氧化剂,将FCC柴油中难以脱除的弱极性苯并噻吩(BT)和二苯并噻吩(DBT)类有机硫化物氧化成极性较强的砜和亚砜类物质,再采用极性有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺(NMP)进行萃取以脱除氧化后柴油中的砜和亚砜类含硫化合物,最后以脱硫率来评价所制备固体酸的催化脱硫活性和效果.考察了焙烧温度、焙烧时间、硫酸浸渍液浓度等制备条件对固体酸催化脱翩:活性的影响规律.实验结果表明,低温沉淀制备的SO_4~(2-)/ZrO_2固体酸作催化剂时脱硫率较低;高温沉淀制备的SO_4~(2-)/ZrO_2固体酸作催化剂时脱硫率较低,最高脱硫率可达69.2%,回收率可迭97%.     

乙二醇对NiMoP/Al2O3上二苯并噻吩加氢脱硫反应的影响

在NiMoP浸渍液中添加不同含量乙二醇,制备了一系列NiMoP/Al2O3催化剂,以二苯并噻吩为模型化合物,考察有机添加剂乙二醇对NiMoP/Al2O3催化剂加氢脱硫性能的影响.结果表明,乙二醇的加入显著提高催化剂的加氢脱硫性能,乙二醇中的羟基与Ni物质的量比为5∶1时,催化剂的加氢脱硫活性最高.乙二醇明显改善NiMoP/Al2O3催化剂的加氢性能.     

超声辅助的柴油催化氧化脱硫研究

在超声作用下采用[(C16H31)N(CH3)3]3[PW12040]催化剂将柴油中的含硫有机物(主要为二苯并噻吩类)氧化成相应的砜,用 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)作萃取剂将砜从柴油中萃取除去.考察了[(C16H31)N(CH3)3]3[PW12040]的量、超声条件(频率、声强)、温度等因素对柴油脱硫的影响.     

碳掺杂六方氮化硼氧化脱硫性能的理论研究

采用密度泛函方法计算了包括苯并噻吩(BT),二苯并噻吩(DBT),二甲基二苯并噻吩(DMDBT)在内的芳香性硫化合物在掺杂碳的六方氮化硼表面的吸附及氧化机理。结果表明,O_2在掺杂碳的氮化硼首先被活化为O_2~-,O_2~-作为活性氧物种进一步将硫化物氧化为亚砜或砜。三种芳香性硫化物在碳掺杂氮化硼表面的脱硫性能按照DMDBT,DBT,BT的顺序降低。     

人Ⅰ型精氨酸酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

PCR扩增人Ⅰ型精氨酸酶基因(hAⅠ),插入大肠杆菌表达载体pET30a中,构建重组表达质粒pET30a-hAⅠ,转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),构建大肠杆菌基因工程菌BL21(DE3)(pET30a-hAⅠ),IPTG诱导后表达,菌体酶活为每克湿菌体34.6 U.SDS-PAGE分析表明,诱导后的BL21(DE3)(pET30a- hAⅠ)在约35 kD处有明显的蛋白表达.     

东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa在大肠杆菌中的异源表达及其对宿主菌增殖的影响

目的在大肠杆菌中异源表达东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa,并观察其对宿主菌增殖的影响。方法构建BmK CT基因原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。光密度法检测含不同质粒的大肠杆菌BL21(DE3)及空菌在37℃,LB液体培养基中的生长速率。结果重组原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa经PCR、双酶切和测序证明构建正确。目的蛋白的表达量占全菌总蛋白的19.94%,为可溶性表达,且具有良好的反应原性。rBmK CTa的异源表达显著抑制了大肠杆菌在对数生长期的增殖。结论rBmK CTa在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,且对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。提示BmK CT可能特异性地作用于宿主菌的氯离子通道,对原核生物的氯离子通道有抑制作用。     

Phosphotungstic acid containing ionic liquid immobilized on magnetic mesoporous silica rod catalyst for the oxidation of dibenzothiophene with H2O2

We have synthesized phosphotungstic acid (PA) containing ionic liquid 1-methyl-3-[(triethoxysilyl) propyl] imidazolium chloride (IL) immobilized on magnetic mesoporous silica rod to catalyze dibenzothiophene (DBT) for producing dibenzothiophene monoxide (DBTO) and dibenzothiophene dioxide (DBTO₂). The effects of reaction time and reaction temperature on the conversion of DBT were studied. It was demonstrated that the catalyst was extremely effective for the reaction and the catalyst could be easily separated from the reaction solution by applying an external magnetic field and recycled several times.     

Mg~(2+)和氨基酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)生长及羧肽酶原B表达的影响

目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响。方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响。结果添加1g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18·7g/L提高到24g/L。结论添加适量的Mg2+和氨基酸能促进重组菌的生长和提高目的蛋白的表达量。     

重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性

目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性。方法以PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosettablue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性。结果重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高。最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h。重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5～1.0和1.0～1.5μg/ml。结论重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞。     

红平红球菌LSSE8-1中辅因子再生系统的构建

采用PCR方法从红球菌Rhodococcus sp. RHA1基因组中克隆了编码甲酸脱氢酶的基因(fdh),将该基因片段插入大肠杆菌-红球菌穿梭质粒pBS306,构建了甲酸脱氢酶表达质粒pBS-PFG,转入专一性脱硫菌R. erythropolis LSSE8-1,得到重组菌LSSE8-1-FDH. 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)显色反应测得重组菌LSSE8-1-FDH的总脱氢酶活(OD496)为0.464,原始菌LSSE8-1的总脱氢酶活(OD496)为0.353,重组菌比原始菌酶活增加了31%. 考察了不同浓度甲酸根对R. erythropolis LSSE8-1与重组菌LSSE8-1-FDH生长的影响,当甲酸根浓度为25 mmol/L时重组菌LSSE8-1-FDH的生长最佳. 油水相静息细胞脱硫实验表明,重组LSSE8-1-FDH菌比宿主菌的脱硫速率增加了12.5%,总脱硫率增加了约20%.     

cTnI特殊位点抗原的重复表达、免疫及其抗体效价检测

构建了含人cTnI蛋白稳定区段2个特殊抗原决定簇位点的pMAL-Antigen质粒. 利用BamHI/BgLII两限制性内切酶的同尾酶作用进行连接,在pMAL-p2x质粒的MBP(麦芽糖结合蛋白)之后接入了上述5个相同的片段. 此质粒在大肠杆菌E. coli BL21 (DE3)中经1.0 mmol/L IPTG诱导表达出的融合蛋白MBP-Antigen经Amlyose-resin亲和层析柱纯化后免疫BABL/C小鼠,成功获得了能抗人cTnI和抗牛cTnI的抗血清.     

大肠杆菌GBP的定点突变与制备方法研究

在mglB基因上进行了E149C、 A213S、 L238S三个定点突变,并利用大肠杆菌BL21(DE3)/pET28c系统,构建了表达突变型GBP的基因工程菌BL21(DE3)/pLE3.工程菌经诱导培养后收获细胞,利用渗透休克法提取周质空间蛋白,经Ni-NTA柱纯化,从1 L培养液中可得到约3.5 mg SDS-PAGE纯度的GBP.     

固定化细胞催化合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯工艺研究

采用硅藻土作载体,聚乙烯亚胺和戊二醛作交联剂来固定化E.coli BL21(DE3)/pCDFDuet-gdh-cr共表达菌株,以此来催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯[(5R)-1]合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯[(3R,5R)-2],考察了硅藻土-聚乙烯亚胺-戊二醛固定化细胞的催化性能,进一步优化了固定化细胞催化合成(3R,5R)-2工艺。结果表明:在固定化细胞用量100g/L、葡萄糖与底物质量浓度比为1:1、转化温度30℃、pH7.0、流速12mL/min、100 g/L的(5R)-1转化完全的条件下,填充床式反应器可以连续反应五个批次,转化570 g/L的(5R)-1,较搅拌式反应器提高了107.3%,较游离细胞间歇催化操作提高了185%。     

重组氨基酰化酶1与N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶酶学性质比较

利用基因工程手段重组表达了牛肾来源的氨基酰化酶1(ACY1),并与实验室之前构建的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶(NAO)进行比较,以N-乙酰-DL-蛋氨酸为底物,研究了其酶学性质,考察了pH、温度、反应时间、表面活性剂、金属离子等因素对拆分DL-蛋氨酸的影响。结果表明,重组NAO和ACY1拆分300 mmol/L的N-乙酰-DL-蛋氨酸所需时间分别是2 h和6 h;重组NAO的酶活及N-乙酰-L-蛋氨酸的转化率分别为1 139.41 U/g和98%,高于重组ACY1的671.24 U/g和58.78%,约是重组ACY1的1.7倍。