NS-398 诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的: 研究选择性环氧化酶-2(COX-2) 抑制剂NS-398 对人肝癌细胞HepG₂ 凋亡的影响, 及其相关蛋白Bcl-2 在细胞凋亡中的作用。方法: 通过体外细胞培养, 应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS-398 对HepG₂ 的凋亡诱导作用, 应用免疫细胞化学法观察Bcl-2 在人肝癌细胞HepG₂ 凋亡中的表达。结果: NS-398 处理HepG₂ 细胞后, 电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示, NS-398 处理后的HepG₂ 细胞,其Bcl-2 表达较对照组明显下降。结论: COX-2 选择性抑制剂NS-398 对人肝癌HepG₂ 细胞有显著的凋亡诱导作用;抗凋亡基因Bcl-2 在NS-398 诱导的HepG₂ 细胞凋亡中有重要的调控作用。     

黄芪对实验性肝纤维化组织ICAM-1表达影响的免疫组化研究

目的 观察黄芪抗肝纤维化的疗效并探讨其机理。方法 用黄芪治疗CCl 4 诱导的肝纤维化模型,观察它对血清HA 、肝组织纤维化评分及ICAM-1表达的影响。结果 黄芪组肝纤维化评分及血清HA 明显低于模型组,肝组织中ICAM-1阳性细胞数明显减少。结论 黄芪有良好的抗肝纤维化作用,其机理可能与其抑制肝细胞中ICAM-1的表达有关。     

霉酚酸酯对2 型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的: 探讨霉酚酸酯对2 型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法: 将实验动物分为正常对照组、糖尿病组及霉酚酸酯治疗组。霉酚酸酯组给予霉酚酸酯(15 mg·kg^-1·d^-1) 治疗。13 周后检测各组大鼠尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、血糖、血脂、血胰岛素;HE 及PAS 染色观察肾脏病理改变;免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子(CTGF) 及胶原(Col I 、Col Ⅲ) 的表达。结果: 霉酚酸酯可降低尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、减轻早期肾小球肥大, 且不同程度降低肾组织CTGF 表达及Col I 、Col Ⅲ的沉积。结论: 霉酚酸酯对2 型糖尿病大鼠肾脏有保护作用, 此作用可能与霉酚酸酯降低肾组织中CTGF 的表达, 减少系膜外基质的沉积有关。     

红杉醇对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的: 观察红杉醇对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响。方法: 采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型35只,灌服红杉醇(50、25及 12.5 mg·kg^-1·d^-1)6周,每天1次。全自动生化分析仪测定血清TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量;ELISA法检测血浆游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)、肝脏载脂蛋白A₁(Apolipoprotein A₁,Apo-A₁)和载脂蛋白B₁(Apolipoprotein B₁,Apo-B₁) 含量;放射免疫法测定肝组织瘦素(Leptin)含量;MASSON染色观察肝脏病理改变。结果: 红杉醇能显著降低模型大鼠血脂、FFA含量,下调肝组织Apo-B₁及Leptin水平,上调肝组织Apo-A₁的含量,减轻肝细胞脂肪变性,减少肝细胞间质和血管旁胶原沉积。结论: 红杉醇具有调节2型糖尿病大鼠脂代谢、减轻脂肪肝和肝脏胶原沉积的作用。     

灵菌红素抗癌细胞浸润转移作用及对MMPs 活性的影响

目的: 研究灵菌红素在体外对癌细胞浸润、转移的抑制作用, 并探讨其分子机理。方法: 用创伤试验测定高转移性人肺腺癌细胞95-D 的运动能力, 用浸润杯试验法研究细胞的浸润能力, 用明胶酶谱分析法观察细胞分泌基质金属蛋白酶2 和9(MMP-2,-9) 的能力, 通过Western-blot 印迹法, 定量分析细胞质内NF-κB 的蛋白量, 用高效液相色谱(HPLC) 检测细胞内的药物浓度。结果: 在非细胞毒作用的浓度范围, 2. 5 μmol·L^-1 灵菌红素作用于肿瘤细胞12 h后, 抑制癌细胞的运动能力达42 %, 同时, 显著抑制癌细胞的浸润转移(EC₅₀=5 μmol·L^-1) 。灵菌红素可明显抑制肿瘤细胞MMP-2, 9 的分泌, 增加肿瘤细胞质内NF-κB 蛋白量, 抑制胞内NF-κB 蛋白的活化。灵菌红素能有效通过细胞膜, 其药效学作用与细胞内药物浓度相关。结论: 灵菌红素能有效地进入细胞内, 通过调节肿瘤细胞内NF-κB 蛋白活性来抑制MMP-2,-9 的表达, 从而抑制癌细胞的浸润转移。     

积雪草总苷抗A549肺癌细胞诱导的肿瘤的实验研究

目的: 研究积雪草总苷对A549诱导的荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法: 用A549细胞建立裸鼠荷瘤模型,随机分为空白组、模型组、积雪草总苷高、中、低剂量组。造模后连续给药 21 d,断头取血,取瘤,计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤细胞形态变化;ELISA法测定血清中IL-2、TNF-α表达水平。结果: 与模型组相比,积雪草总苷能显著抑制肿瘤的生长;并使得部分肿瘤细胞坏死、溶解、消失;还能明显提高IL-2、TNF-α的含量(P<0.01)。结论: 积雪草总苷具有一定的抗肿瘤作用,其机制可能与提高IL-2、TNF-α的含量有关。     

泛素连接酶hrd1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的: 研究泛素连接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,以此探讨hrd1在胃癌发生发展中的意义。方法: 收集临床胃癌组织及距癌灶边缘 5 cm 以上胃壁组织,应用免疫组织化学SP法研究63例胃癌(实验组)及其癌旁正常组织(对照组)中hrd1蛋白的表达水平,应用荧光定量PCR(Q-PCR)方法分别检测实验组及对照组hrd1基因表达水平,并用统计学方法分析hrd1表达水平与胃癌临床病理参数之间的关系。结果: 免疫组化及Q-PCR结果均显示,胃癌组织中hrd1表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。hrd1在癌灶≥5 cm 的胃癌组织中表达水平高于癌灶＜5 cm 的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中hrd1的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结有无转移和临床分期均无关(P>0.05)。结论: 泛素连接酶hrd1在胃癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,提示hrd1可能与胃癌的发生有关。     

海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响

目的: 研究海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响。方法: 于实验d 1 一次性皮下注射小剂量四氯化碳并长期喂食高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型,7 周后,开始分别口服灌胃(ig)给予模型组等体积橄榄油,阳性药辛伐他汀4mg·kg^-1,海狗油各组ig 海狗油0.5、1.6和4.8g·kg^-1,每天1次,连续8周。观察肝组织病理形态的变化和肝细胞色素P450 2E1的表达;测定血清和肝内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及游离脂肪酸(FFA)含量的变化。结果: 与脂肪肝模型组比较,海狗油不同给药组病理切片苏丹Ⅲ染色和HE 染色显示肝细胞的脂变程度明显减轻,脂滴减少,免疫组化证明肝细胞色素P450 2E1表达受到不同程度的抑制,同时血清及肝内MDA、FFA显著降低,SOD活性升高。在模型组和各给药组不同的肝组织内,CYP2E1的表达强度及分布的方式存在着差异。结论: 海狗油能显著抑制大鼠脂肪肝CYP2E1的表达,减轻脂质过氧化反应。动物个体间存在CYP2E1多态性。     

携带Kringle 5 基因重组腺病毒的构建及其对荷肺癌小鼠生存期的作用

目的 构建携带人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因重组腺病毒并观察其在小鼠肺癌细胞中的表达和对荷TC-1 瘤小鼠的生存期的影响。 方法 构建携带人纤溶酶原K5 基因表达框的腺病毒载体Ad-EF1α-K5, 用RT-PCR 法检测腺病毒感染TC-1细胞后K5 mRNA 的表达, 用免疫沉淀和Westernbloting 法检测腺病毒感染TC-1 细胞后K5 蛋白的表达。建立荷TC-1 小鼠肺癌C57BL/6 小鼠模型,观察重组腺病毒对荷瘤小鼠生存期的影响。取肿瘤组织做免疫组织化学染色并计数微血管密度。 结果 携带K5 基因的人V 型腺病毒能有效感染小鼠肺癌TC-1 细胞, 在转录和翻译水平进行表达, 能有效延长荷瘤鼠的生存期并降低肿瘤微血管密度。 结论 腺病毒可作为便捷的载体携带K5基因感染肿瘤细胞, 分泌表达K5 蛋白, 延长荷瘤小鼠生存期, 可能与其通过抑制肿瘤区血管生成、遏制肿瘤区血供有关。     

新型格列酮类化合物ANY2对HepG2细胞糖代谢的影响

目的: 体外实验研究新型格列酮类化合物ANY₂对糖代谢的影响。方法: 采用高浓度胰岛素持续作用肝癌细胞株( HepG₂)24 h 建立胰岛素抵抗模型( IR-HepG₂),并观察ANY₂对细胞葡萄糖消耗(GC) 、对细胞内糖原含量、糖异生及糖酵解作用的影响。结果: ANY₂能显著增加 IR-HepG₂在高、中、低糖条件下的葡萄糖消耗, 并呈明显的剂量依赖性;增加 IR-HepG₂细胞内糖原含量,但与模型组相比,仅在高浓度差异有统计学意义;减少IR-HepG2 细胞以乳酸为底物的糖异生量;提高糖酵解作用中IR-HepG₂细胞乳酸的生成和细胞内丙酮酸激酶(PK) 活力。结论: ANY₂可显著改善IR-HepG₂ 细胞的糖代谢作用。     

不同极性溶媒瑞香狼毒提取物的抗肿瘤活性比较

目的: 通过比较不同极性溶媒瑞香狼毒提取 物的体外抗肿瘤活性,确定瑞香狼毒抗肿瘤活性成 分所在的极性区间。方法: 采用索氏回流提取法,依次用石油脏、乙酸乙醋、丙酮和乙醇对狼毒进行回流提取,并用不同浓度的各溶剂提取物分别处理 Eca^-109、K562、HepG2 细胞株,通过 MTT检测法,比较各溶媒提取物对肿瘤细胞的抑制活性。结果: 石油醚提取物和乙酸乙酣提取物对体外培养肿瘤细胞表现出较强的抑制作用,在测定浓度范围内呈现出良好 剂量依赖性,石油耻提取物最大抑制率分别为 78%(Eca^-109)、93% (K562)、95% (HepG2),乙酸乙酣提取物 最大抑制率分别为 53% (Eca^-109)、 91%(K562)、87% (HepG2);而丙酮和乙醇提取部位在测定浓度范围内则显示出很弱的抑制作用;在各提取 物中石油耻提取物的体外抗肿瘤作用最强。结论: 石油趾提取成分是瑞香狼毒中体外抗肿瘤活性最强的部位。     

黄连解毒汤对人细胞色素P450酶6个亚型的体外抑制作用研究

目的: 研究黄连解毒汤对人肝微粒体6个亚型CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法: 采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;黄连解毒汤提取物和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC₅₀值表示对CYP450酶的抑制程度。结果: 在人肝微粒体体外孵育体系中,黄连解毒汤对CYP2D6的IC₅₀值为 3.54 μg/mL,对CYP1A2的IC₅₀值为 10.8 μg/mL,对CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4_T和CYP3A4_M亚酶的IC₅₀值依次为 67.7、299、530、199和 607 μg/mL。结论: 在正常剂量下,黄连解毒汤对人肝微粒体CYP2D6和1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4无明显抑制作用。     

CO2气腹压力对胃癌细胞侵袭黏附分子表达的影响

目的: 探讨不同压强CO₂气腹对胃癌细胞侵袭黏附能力的影响。方法: 建立体外CO₂气腹模型,选胃中分化腺癌株SGC-7901,分别暴露在6、9、12、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和常规细胞培养环境下各3 h。Real-time PCR法检测胃癌细胞中黏附侵袭分子E-cadherin、细胞黏附侵袭分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和细胞黏附分子CD44v6的表达水平;Western-blot检测胃癌细胞中E-cadherin、ICAM-1、MMP-2和CD44v6蛋白的表达水平。结果: 随着CO₂压强升高,在 15 mm Hg 时,E-cadherin的mRNA相对表达水平较对照组明显下降(P<0.05);MMP-2和CD44v6的mRNA相对表达水平较对照组明显上升(P<0.05);而ICAM-1 mRNA的相对表达水平也有上调趋势,但各组与对照组比较均无统计学差异。Western-blot检测结果显示蛋白的表达水平与基因检测结果一致。压强为 15 mm Hg时,CD44v6和MMP-2的表达上调,E-cadherin 的表达下调,具有统计学差异。结论: 在压强不高于 12 mm Hg 时,不同压强的CO₂气腹对胃癌细胞株的黏附侵袭能力无明显影响,并不增加肿瘤的转移几率。     

高效液相色谱法定量尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度

目的: 建立高效液相色谱法测定尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度。方法: 用Agilent ZORBAX SB-Aq column色谱柱,ZORBAX-Extend C₁₈预柱,以甲醇和 47 mmol/L KH₂PO₄水溶液作为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长为 260 nm。结果: 血清中尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤的线性范围分别是(1.667~166.667)×10³ ng/mL (r=0.9995)、(0.033~3.338)×10³ ng/mL(r=0.9994)和 (0.033~3.338)×10³ ng/mL (r=0.9996),日间与日内精密度均<15%。结论: 该法灵敏度高,精密度和准确度佳,能满足非布司他体内药效学研究。     

川芎嗪联用左旋精氨酸对缺血-再灌注损伤兔肝脏能量代谢的影响

目的: 探讨川芎嗪(LGT)、左旋精氨酸（L-Arg)联合使用对肝缺血-再灌注损伤（HIRI)时肝细胞能量代谢的影响及其机制。方法: 实验兔40只,建立肝缺血-再灌注模型后随机分4组:模型组,LGT组,L-Arg组和LGT + L-Arg组,每组10只。再灌注45 min时,分别检测肝组织内三磷酸腺苷（ATP)、二磷酸腺苷（ADP)、一磷酸腺普（AMP)含量、总腺苷酸量(TAN)、能荷（EC)、丙二醛浓度（MDA)、超氧化物歧化酶活性（SOD)、一氧化氮代谢产物（N0₂^-/N0₃^-)水平、血栓素B₂(TXB₂)、6-酮基-前列腺素F_1α/6-keto-PGF_1α含量和 TXB₂/6-keto-PGF_1α比值。结果: 与模型组比较,LGT组、L-Arg组、LGT + L-Arg组肝组织内 ATP、EC、NO₂^-/NO₃^-、6-keto-PGF_1α含量及SOD活性均明显增高（P<0.05和P<0.01),MDA、TXB₂含量及TXB₂-keto-PGF_1α比值均显著减少（P<0.05和P<0.01)。结论: LGT联用L-Arg可通过降低体内氧自由基水平、提高一氧化氮水平、糾正TXA₂与PGI₂的平衡,而改善缺血-再灌注损伤肝脏的能量代谢。     

罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解的影响

目的: 探讨罗格列酮(rosiglitazone maleate)对糖尿病肾病的保护机制。方法: 大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L) ,高糖浓度(25 mmol/L )及25 mmol/L 葡萄糖+20μmol/L 罗格列酮的培养液中。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA 法检测培养上清液 Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1) ;明胶酶谱法检测培养上清液基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2, 9) 的活性。结果: 高糖组系膜细胞较正常对照组出现增殖增加, 合成基质蛋白Col-Ⅳ、FN增多;MMP-2及MMP-9 活性下降 ;TIMP-1 含量增加;TGF-β₁分泌增加。与高糖组比较, 罗格列酮干预后能逆转上述变化。结论: 罗格列酮能抑制高糖培养的系膜细胞增殖, 减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

中国拟青霉对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:研究中国拟青霉(CN-802) 对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及其对T 淋巴细胞亚群的影响。方法:小鼠尾静脉注射卡介苗加脂多糖(BCG+LPS) 建立免疫性肝损伤模型, 检测其肝、脾重量和转氨酶活性, 并同时测定血清与肝组织中脂质过氧化物(LPO) 含量及T 淋巴细胞亚群数量。结果:CN-802 连用10 d 后可减轻其增大的肝、脾重量指数, 降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT) 水平, 降低其血清与肝组织中LPO 含量, 并增加外周血中T 细胞亚群CD₄ 数量和CD₄/CD₈ 比值。结论:CN-802 对小鼠免疫性肝损伤模型有保护作用, 其作用可能与调节细胞免疫有关。